两种HBV全基因组克隆方法的比较

目的通过比较血清HBVDNA水平对一片段PCR法和两片段PCR法这两种不同方法的HBV全基因组克隆效率的影响,选择出合适的HBV全基因组克隆技术,供后续的HBV的基础和临床研究。方法采集了乙型肝炎患者85份血清,分别用本研究建立的一片段PCR法及两片段PCR法扩增HBV全基因组,经双酶切鉴定后将PCR产物克隆入载体,进行HBV全基因组序列测定。同时用实时荧光定量PCR法检测上述85份血清的HBVDNA滴度。结果本研究建立的一片段法扩增成功需要的血清HBVDNA浓度高于二片段法,两种方法扩增的效率比较为一片段方法扩增的成功率低于二片段方法(P<0.05)。一片段方法的保真性:核苷酸的人为突变率为1.13bp/kb。灵敏度:为102个初始模板,大于103的重组质粒DNA80%可以成功扩增,浓度低于该值的扩增效率比较低。结论血清HBVDNA水平对两种扩增方法的成功率有一定影响,滴度高低是选择合适PCR扩增方法的依据。HBVDNA滴度大于103copies/ml的样本,可选用一片段PCR法的全基因组扩增、克隆技术,而对HBVDNA滴度小于103copies/ml样本,则可选用两片段法的全基因组扩增、克隆技术。本研究建立的一片段PCR法扩增HBV全基因组克隆的技术是一种值得推荐的好方法,但需进一步优化。