人参-三七-川芎提取物延缓过氧化氢诱导的内皮细胞衰老中线粒体氧化应激的作用

目的 通过观察人参-三七-川芎提取物（GNC）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）衰老中线粒体氧化应激的影响，探讨GNC对衰老HUVECs的治疗机制。方法 本研究以HUVECs作为研究对象，H₂O₂诱导内皮细胞衰老作为模型，实验分为空白组，H₂O₂组，H₂O₂+DMSO组（DMSO），白藜芦醇组（Resv）及GNC提取物低（GNC-L），中（GNC-M），高（GNC-H）质量浓度组，除空白组，H₂O₂组外，其余各组分别给予DMSO 1 mL·L^-1，Resv 8 μmol·L^-1，GNC 400，300，200 mg·L^-1药物干预，24 h后除空白组外给予300 μmol·L^-1 H₂O₂诱导HUVECs衰老，再给予正常培养基培养24 h。采用衰老特异性β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色法鉴定细胞衰老程度，流式细胞仪分析细胞周期，采用Mito SOX RED荧光染色法测定细胞内线粒体活性氧（mtROS）水平，以JC-10为荧光探针检测细胞内线粒体膜电位变化，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测含锰超氧化物歧化酶（MnSOD）与磷酸化（p-）p66的蛋白表达。结果 SA-β-gal染色结果显示，与空白组比较，H₂O₂组SA-β-gal染色蓝染细胞显著增多（P<0.01）；与H₂O₂组比较，各浓度组SA-β-gal染色蓝染细胞显著减少（P<0.01）；细胞周期结果显示，与空白组比较，H₂O₂组G₀/G₁期细胞数量比例明显增多（P<0.05），G₂/M期细胞比例明显减少（P<0.05）；与H₂O₂组比较，GNC各组及Resv组G₀/G₁期细胞数量比例明显减少（P<0.05），GNC-H组，Resv组在G₂/M期细胞比例明显增加（P<0.05）。线粒体ROS荧光结果显示，与空白组比较，H₂O₂组强度明显减弱（P<0.05）；与H₂O₂组比较，GNC-H，GNC-M组强度明显增高（P<0.05）；线粒体膜电位结果显示，与空白组比较，H₂O₂组荧光强度显著下降（P<0.01）；与H₂O₂组比较，GNC-H，GNC-M，GNC-L组线粒体膜电位荧光强度显著增高（P<0.01），Resv组明显增高（P<0.05）；Western blot结果显示，与空白组比较，H₂O₂组MnSOD含量明显降低（P<0.05）；与H₂O₂组比较，GNC-H与GNC-M组表达明显增多（P<0.05）；与空白组比较，H₂O₂组p-p66含量显著增高（P<0.01）；与H₂O₂组比较，各用药组表达显著降低（P<0.01），表明用药后可减轻细胞内线粒体氧化应激反应。结论 中药人参-三七-川芎提取物可以延缓H₂O₂诱导的血管内皮细胞的衰老，药物干预后，细胞线粒体活性氧、线粒体膜电位及相关蛋白MnSOD，p-p66蛋白发生明显改善，氧化应激反应减轻，其机制可能是中药通过抑制线粒体氧化应激反应延缓血管内皮细胞衰老的进程。