清肝泻肺方治疗肝火犯肺增加流感病毒易感性的作用研究

本实验采用慢性拘束应激诱导的H1N1流感病毒易感的小鼠模型,模拟临床上情志郁结、肝火犯肺,研究清肝泻肺方(黛蛤散合黄芩泻白散)治疗流感病毒性肺炎的作用。小鼠感染流感病毒后观察21天内的生存和发病情况,并于感染后的第6天取部分小鼠肺脏检测病毒性肺炎和磷脂过氧化等指标。实验结果显示,清肝泻肺方能够缓解慢性拘束应激负荷H1N1流感病毒引起的小鼠生存率和健康率下降,抑制小鼠肺部流感病毒的复制、炎症因子的产生,降低磷脂过氧化水平,改善小鼠肺炎症状。利用中药网络药理学技术构建的清肝泻肺方活性化合物-作用靶点网络,结果显示,该网络包含171个单体化合物和260个靶点,涉及氧化应激、炎症和免疫等相关信号通路。以上结果表明,清肝泻肺方治疗流感病毒性肺炎的作用机制可能与其调控氧化应激有关。实验方案经暨南大学动物实验伦理委员会批准,所有程序均严格按照动物使用和护理的伦理原则进行。     

川陈皮素对糖尿病肾病大鼠AMPK和eNOS表达的影响研究

【摘要】目的 观察川陈皮素对糖尿病肾病大鼠的治疗作用，并从腺苷酸蛋白活化激酶（AMPK）和内皮型一氧化氮酶（eNOS）途径探讨其作用机理。方法 采用高脂高糖饲料喂养+链脲佐菌素（STZ）腹腔注射复制2型糖尿病肾脏损害大鼠模型，模型构建成功后，将其随机分为正常组、模型组、贝那普利干预组以及川陈皮素低、中和高剂量治疗组（n=20）。实验中密切监测大鼠一般情况，治疗期结束后收集尿液检测24h蛋白尿，收集血液检测肾功能指标、抗氧化指标，收集肾脏观察肾脏病理学，同时检测肾脏组织中AMPK及eNOS蛋白和mRNA的表达结果。结果 正常组肾小球正常，无明显病理特征；模型组出现肾小球增大，系膜和肾间质纤维组织增生；贝那普利组和川陈皮素三个剂量组相较于模型组明显减轻。与正常组相比，模型组24h尿蛋白定量、UREA、CREA和MDA明显升高(P＜005)；SOD和GSH明显降低(P＜005)，与模型组相比，贝那普利和川陈皮素三个剂量组24h尿蛋白定量、UREA、CREA和MDA明显降低(P＜005)，SOD和GSH明显升高(P＜005)。与正常组相比，模型组p AMPK、AMPK和eNOS蛋白和mRNA表达均明显降低(P＜005)；与模型组相比，贝那普利组和川陈皮素低、中和高剂量组AMPK和eNOS蛋白和mRNA表达明显升高(P＜005)。结论 川陈皮素可保护肾功能，提高血清和肾脏抗氧化指标，同时增加AMPK和eNOS蛋白和mRNA表达，最终保护糖尿病肾脏损害。     

高血压脑出血术后颅内感染病原菌分布及相关因子表达

目的探讨高血压脑出血术后并发颅内感染患者病原菌分布,并对其血清炎症因子和氧化应激指标的表达情况予以分析。方法以2016年2月-2018年2月海南医学院第二附属医院神经外科收治的高血压脑出血患者200例为研究对象,将所有患者根据术后是否并发颅内感染分为感染组64例与非感染组136例。采集感染组患者的脑脊液标本进行病原菌培养以及鉴定,并分别采集感染组与非感染组患者血液标本检测其血清炎症因子和氧化应激指标水平。同时,分析不同感染程度颅内感染患者血清炎症因子、氧化应激指标水平,并分析高血压脑出血术后并发颅内感染严重程度与血清炎症因子、氧化应激指标水平的相关性。结果感染组64例患者脑脊液分离出病原菌80株,革兰阴性菌占32.50%、革兰阳性菌占47.50%、其他占20.00%;感染组患者血清C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、降钙素原(procalcitonin,PCT)、血管紧张素Ⅱ(angiotensin II,Ang-Ⅱ)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平均高于非感染组患者(P<0.05);轻度感染、中度感染、重度感染患者的血清CRP、PCT、Ang-Ⅱ、MDA水平均呈逐渐升高趋势,各组间对比的差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关性分析可得:高血压脑出血术后并发颅内感染严重程度与血清CRP、PCT、Ang-Ⅱ、MDA水平均呈正相关(P<0.05)。结论高血压脑出血术后并发颅内感染患者病原菌以革兰阳性菌和革兰阴性菌为主,并发颅内感染患者炎症因子与氧化应激指标水平明显升高,且各项指标与感染严重程度密切相关。     

四逆汤对心肌梗死后慢性心衰大鼠心功能和氧化应激反应的作用研究

目的观察四逆汤对心肌梗死后慢性心衰大鼠心功能和氧化应激反应的影响。方法采用结扎大鼠冠状动脉导致急性心肌梗死制备慢性心衰大鼠动物模型,将造模成功、存活的大鼠随机分为模型组、盐酸贝那普利组、四逆汤高剂量组、四逆汤中剂量组和四逆汤低剂量组,另设一组未行冠脉结扎术的大鼠为假手术组,每组8只。各组予以相应药物或去离子水,连续灌胃8周后行大鼠心脏彩色多普勒超声检查、病理形态学观察,并比较各组大鼠血清超氧化物歧化酶、丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶、及过氧化氢的含量差异。结果给药8周后,小动物心动超声结果显示:与假手术组比,模型组大鼠的心脏左室收缩末期内径显著升高(P0.05),左室射血分数、左室短轴收缩率、舒张末期室间隔厚度、收缩末期室间隔厚度显著降低(P0.05);与模型组比,四逆汤高、中剂量组左室射血分数、左室短轴收缩率、舒张末期室间隔厚度、收缩末期室间隔厚度显著改善(P0.05),而低剂量四逆汤有改善左室射血分数、左室短轴及收缩率的趋势,但差异没有统计学意义(P0.05)。HE染色示:给药组的大鼠心肌结构破坏程度较模型组明显改善;Masson染色示:四逆汤可有效降低心肌组织胶原蛋白含量,抑制心衰大鼠心肌纤维化(P0.05)。结论四逆汤能够改善心梗所致的慢性心衰大鼠的心功能,其机制可能与改善氧化应激状态,提高抗氧化能力,减少氧化损伤相关。     

壮药拔毒生肌膏对大鼠氧化应激性创面愈合的作用研究

目的研究壮药拔毒生肌膏对氧化应激性难愈合创面大鼠的作用。方法将96只大鼠随机分为氧化应激模型组24只、贝复济阳性对照组24只、拔毒生肌膏实验组24只、假手术组24只,采用表柔比星复合皮肤缺损建立72只氧化应激性创面大鼠模型,假手术组大鼠造同样大小创面,模型组与假手术组外敷生理盐水纱条,每天换药一次。分别在建模后3、6、12天计算各组大鼠创面愈合率,比浊法测定各组大鼠血清溶菌酶含量,放射免疫法检测各组大鼠血清中表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达,酶联免疫法(ELISA)检测各组大鼠创面新生肉芽组织中EGF含量,免疫组化检测各组大鼠创面新生肉芽组织中VEGF含量。结果壮药拔毒生肌膏和贝复济可以显著提高氧化应激模型大鼠6天和12天后创面愈合率(P0.05);壮药拔毒生肌膏可以显著提高氧化应激模型大鼠12天后血清和组织EGF含量以及3天后血清溶菌酶、EGF、VEGF含量(P0.05);与模型组相比,拔毒生肌膏组3天后、6天后、12天后组织VEGF水平均显著上升(P0.05);病理结果显示,模型组创面水肿及炎性反应严重,肉芽组织生长缓慢,壮药拔毒生肌膏干预后可以减轻水肿及炎性反应,促进肉芽组织新生。结论壮药拔毒生肌膏对氧化应激模型大鼠创面愈合有促进作用并能改善创面组织生长情况,其作用与促进EGF、VEGF表达及提高溶菌酶含量有关。     

大黄虫丸对H2O2诱导大鼠肝星状细胞氧化应激的影响

目的研究大黄■虫丸对H_2O_2诱导大鼠肝星状细胞氧化应激的影响,并探讨其分子机制。方法制备大鼠大黄■虫丸血清和正常血清;将肝星状细胞(HSCs)分为正常血清低浓度H_2O_2(50 nmol/L)组、大黄■虫丸血清低浓度H_2O_2组、正常血清高浓度H_2O_2(100μmol/L)组和大黄■虫丸血清高浓度H_2O_2组,应用化学荧光和流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平。蛋白质免疫印迹实验中,将HSCs分为正常血清组、大黄■虫丸血清组、正常血清低浓度H_2O_2(50 nmol/L)组和大黄■虫丸血清低浓度H_2O_2组,以检测ROS生成相关分子RAC1、p67~(phox)、p22~(phox)和p-ERK的表达。结果正常血清高浓度H_2O_2组和大黄■虫丸血清高浓度H_2O_2组细胞内均有较强ROS荧光,但两组之间差异无统计学意义(P0.05);大黄■虫丸血清低浓度H_2O_2组细胞的ROS荧光强度明显弱于正常血清低浓度H_2O_2组(P0.01);与正常血清组比较,正常血清低浓度H_2O_2组RAC1、p67~(phox)、p22~(phox)和p-ERK蛋白表达水平均显著升高(P0.01);与正常血清低浓度H_2O_2组比较,大黄■虫丸血清低浓度H_2O_2组RAC1、p67~(phox)、p22~(phox)和p-ERK蛋白表达下调(P0.01)。结论大黄■虫丸可能通过调控RAC1、p67~(phox)、p22~(phox)和p-ERK等分子,参与拮抗H_2O_2诱导的氧化应激,阻止ROS的生成,并最终抑制HSCs活化、增殖,防治肝纤维化。     

波动性高糖对内皮细胞自噬基因表达的影响

【目的】探讨波动性高糖对内皮细胞自噬的影响及其可能的机制。【方法】体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)用于实验。实验分正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)和葡萄糖交替处理组(5.5/28 mmol/L葡萄糖)。其中葡萄糖交替处理模拟人血糖波动状态,方案是前12 h内每隔4 h交替培养,后12 h内葡萄糖维持5.5 mmol/L水平,按此循环,共培养48 h。用CCK-8检测细胞活性,酶标仪检测氧化应激相关指标,实时荧光定量PCR检测自噬相关基因的表达情况。【结果】与正常对照组相比,葡萄糖交替处理组降低HUVEC细胞活性(P<0.01);降低细胞内抗氧化酶活性,增加丙二醛和8-羟基脱氧鸟苷的含量(P<0.01);增加自噬相关基因Atg4和Atg5的表达(P<0.001)。【结论】波动性高糖可能是先通过诱导HUVEC产生氧化应激,进而使HUVEC产生自噬,最终降低细胞活性。