| pGL3-Basic-COX-2-promoter:报告基因重组质粒的构建及其功能鉴定 |
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| 引用本文： | 李琦,周利红,王炎,孙珏,高虹,范忠泽.pGL3-Basic-COX-2-promoter:报告基因重组质粒的构建及其功能鉴定[J].世界华人消化杂志,2008,16(31):3498-3504. |
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| 作者姓名： | 李琦 周利红 王炎 孙珏 高虹 范忠泽 |
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| 作者单位： | 上海中医药大学附属普陀医院肿瘤科,上海市,200062 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目;No.30600844，上海市教委第五期重点学科资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建COX-2基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒 pGL3-Basic-COX-2-promoter,并进行功能鉴定.方法:根据已知人的COX-2基因启动子序列设计两端引物,扩增人基因组DNA中的COX-2启动子.载体质粒pGL3-Basic和COX-2启动子分别用限制性内切酶HindⅢ和Bgl Ⅱ 双酶切,将COX-2基因启动子插入到pGL3-Basic报告载体中.构建的pGL3-Basie-COX-2-promoter重组质粒和内参质粒pRL-SV40瞬时共转染胃癌MKN45细胞,加入100倍细胞数量的Hpylori共培养不同时间后,检测双荧光素酶的活性.结果:成功构建COX-2基因启动子重组质粒pGL3-Basie-COX-2-promoter,质粒测序及酶切结果完全正确.瞬时转染实验显示,COX-2启动子在MKN45细胞中的转录表达随时间的变化而升高,转染后40 h的双报告基因活性是转染后8 h的3.5倍(P＜0.01);加入Hpylori共培养后,同时间点的荧光素酶活性明显升高(P＜0.05或0.01),转染后40 h的活性是转染后8h的5倍(P＜0.01).结论:pGL3-Basic-COX-2-promoter在胃癌MKN45细胞中能被转录激活,加入Hpylon刺激后COX-2活性显著增强,pGL3-Basic-COX-2-promoter可以用来鉴定和检测细胞中,COX-2的水平.
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| 关 键 词： | 环氧合酶2 启动子 质粒 幽门螺杆菌 双荧光素酶 |
Construction of PGL3-Basic-COX-2-promoter reporter gene vector and detection of its function |
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| Qi Li,Li-Hong Zhou,Yan Wang,Jue Sun,Hong Gao,Zhong-Ze Fan.Construction of PGL3-Basic-COX-2-promoter reporter gene vector and detection of its function[J].World Chinese Journal of Digestology,2008,16(31):3498-3504. |
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| Authors: | Qi Li Li-Hong Zhou Yan Wang Jue Sun Hong Gao Zhong-Ze Fan |
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