基于代谢组学考察京尼平苷对慢性酒精中毒大鼠的神经保护作用

目的 利用代谢组学技术发现慢性酒精中毒相关的生物标志物，并以标记物为参数评价京尼平苷的神经保护作用，为慢性酒精中毒的诊断和治疗提供参考。方法 采用50%乙醇按8 mL·kg^-1连续灌胃14 d，再递增为12 mL·kg^-1连续灌胃21 d建立慢性酒精中毒大鼠模型；同时，通过连续灌胃给予京尼平苷（15 mg·kg^-1）35 d进行干预治疗。采集大鼠脑及肝组织进行组织病理形态学及生化指标检测。收集尿液并采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间-串联质谱法（UPLC-Q-TOF-MS）进行代谢组学分析，色谱条件为ACQUITY UPLC? HSS T3色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm），流动相0.1%甲酸乙腈溶液（A）-0.1%甲酸水溶液（B）梯度洗脱（0~2.5 min，1%~11%A；2.5~4.5 min，11%~21%A；4.5~7.0 min，21%~40%A；7.0~8.5 min，40%~99%A；8.5~10.5 min，99%A；10.5~10.6 min，99%~1%A；10.6~13.0 min，1%A），流速0.4 mL·min^-1；质谱条件为电喷雾离子源（ESI），正、负离子模式，扫描范围m/z 50~1 200。所得数据利用Progenesis QI 2.0及MassLynx 4.1软件进行分析，通过元素组成及二级碎片与人类代谢组数据库（HMDB）进行匹配来鉴定生物标记物。结果 病理结果显示，在模型复制第35天，与模型组比较，京尼平苷组的脑组织皮层神经元所呈现的排列紊乱、细胞核固缩和深染、细胞膜边界模糊的坏死状态得到明显改善。生化指标结果显示，京尼平苷能提高谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性，降低乙酰胆碱酯酶（AChE）活性，降低β-内啡肽（β-EP）和丙二醛（MDA）的水平。代谢组学结果显示，在模型组大鼠尿液中共鉴定48个慢性酒精中毒生物标志物，涉及色氨酸代谢、嘧啶代谢、苯丙氨酸代谢、戊糖和葡萄糖醛酸的相互转换、抗坏血酸和醛酸代谢、甾体激素生物合成、嘌呤代谢7个代谢途径，其中主要为色氨酸代谢的5-羟色胺途径。结论 慢性酒精中毒神经损伤相关的生物标志物主要源于5-羟色胺代谢途径。京尼平苷能够对该途径进行调节，从而改善脑内氧化应激状态发挥神经保护作用。

Investigation of Neuroprotective Effect of Geniposide on Chronic Alcoholism Rats Based on Metabonomics