加减薯蓣丸介导线粒体自噬改善APP/PS1小鼠氧化应激损伤及学习记忆能力

目的 探讨加减薯蓣丸对阿尔茨海默病（AD）小鼠学习记忆能力减退的作用及相关机制。方法 将40只5月龄SPF级APP/PS1小鼠随机分为模型组、多奈哌齐组、加减薯蓣丸组、加减薯蓣丸+氯喹（CQ）组，每组10只，同背景野生型C57BL/6J小鼠10只设定为正常组。其中加减薯蓣丸组予以加减薯蓣丸煎剂（10 g·kg^-1）灌胃，多奈哌齐组予以盐酸多奈哌齐溶液（0.45 mg·kg^-1）灌胃，加减薯蓣丸+CQ组则在加减薯蓣丸组基础上予以CQ（10 mg·kg^-1）腹腔注射1次，与灌胃同时进行，正常组与模型组予以等量生理盐水灌胃，1次/d，共35 d。给药结束后，Morris水迷宫实验和新物体识别实验检测小鼠空间记忆能力；原位末端标记法（TUNEL）染色检测小鼠海马CA1神经元凋亡水平；生化检测小鼠海马神经元活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）水平；透射电镜观察小鼠海马CA1区神经元线粒体超微结构；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠海马线粒体自噬接头蛋白（p62）、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、PTEN诱导激酶1（PINK1）、E3泛素连接酶（Parkin）蛋白表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测小鼠海马线粒体叉头状转录因子O1（FoxO1）、PINK1、Parkin mRNA表达水平。结果 与正常组比较，模型组小鼠逃避潜伏期明显增长，穿越平台次数及目标象限滞留时间占比明显减少，相对分辨指数明显降低，识别新物体能力减弱（P<0.05）；海马CA1区神经元凋亡细胞明显增多（P<0.05）；ROS水平显著升高（P<0.01），SOD水平显著降低（P<0.01）；海马线粒体形态严重损伤；p62、LC3Ⅱ蛋白表达显著增多（P<0.01），Parkin蛋白表达明显减少（P<0.05），PINK1蛋白表达增多（P<0.05）；FoxO1、PINK1、Parkin mRNA表达均减少（P<0.05）。与模型组比较，经加减薯蓣丸干预后小鼠逃避潜伏期明显缩短，穿越平台次数及目标象限滞留时间占比明显增多，相对分辨指数显著升高，识别新物体能力增强（P<0.05）；凋亡细胞明显减少（P<0.05）；ROS水平显著降低（P<0.01），SOD水平明显升高（P<0.05，P<0.01）；线粒体形态及各结构改善明显；p62、LC3Ⅱ蛋白表达明显减少（P<0.05，P<0.01），PINK1、Parkin蛋白表达增多（P<0.01）；FoxO1、PINK1、Parkin mRNA表达明显升高（P<0.05，P<0.01）。与加减薯蓣丸组比较，加减薯蓣丸+CQ组小鼠逃避潜伏期明显增长，穿越平台次数及目标象限滞留时间占比减少，相对分辨指数减少（P<0.05）；SOD水平明显降低（P<0.01）；线粒体形态结构损伤度再次加重；p62、LC3Ⅱ蛋白表达明显增多（P<0.05，P<0.01），PINK1、Parkin表达明显减少（P<0.05，P<0.01）；FoxO1、PINK1、Parkin mRNA表达明显减低（P<0.05，P<0.01）。结论 加减薯蓣丸能有效改善AD小鼠氧化应激损伤及学习记忆能力，其机制可能与上调FoxO1，PINK1，Parkin因子的表达，促进线粒体自噬，减轻氧化应激反应，保护神经元损伤有关。

Modified Shuyuwan Mediated Mitochondrial Autophagy Improve APP/PS1 Mice Oxidative Stress Injury and Ability of Learning and Memory