3-甾酮-△^-脱氢酶的融合表达及纯化

3-甾酮-△^1-脱氢酶是甾体母核降解的关键酶。能催化3-甾酮化合物在C1.2位处脱氢，提高原有底物的生物活性。利用表达载体pET-30a，实现了简单节杆菌3-甾酮-△^-脱氢酶在大肠杆菌BL21（DE3）中的高效表达。利用SDS-PAGE分别对超声破碎后的上清和沉淀进行分析．并用分光先度法检测酶的活力。结果表明，表达出的蛋白主要以无活性的包涵体形式存在。利用Ni离子螯合层析的方法纯化融合蛋白，复性后的酶活比简单节杆菌提高了近10倍。     

好氧颗粒污泥等温吸附甾体雌激素

为了研究好氧颗粒污泥对甾体雌激素E1、E2、EE2的吸附作用,通过摇瓶试验考察了吸附平衡时间及在不同温度下的等温吸附过程,对该过程进行了Freundlich方程和Langmuir方程拟合分析,并采用SEM观察好氧颗粒污泥结构.实验结果表明,吸附40min后基本达到平衡;吸附量随着温度的升高而减少,在20℃时,E1、E2、EE2最大吸附量分别为60.98、58.82、82.64μg/g;吸附过程符合Freundlich方程和Langmuir方程,其相关系数R2分别为0.93~0.99和0.92~0.99;吸附后好氧颗粒污泥表面及内部均发生了变化.     

孕甾酮在超临界CO2中的溶解度测定与模拟

采用动态法测定孕甾酮(progesterone)在超临界CO2溶液中的平衡溶解度,所用的压力范围为12～24 MPa,温度为313.15 K和323.15 K,结果表明其摩尔分数为5.3×10-5～8.9×10-4.实验数据经Chrastil密度型模型和Peng-Robinson状态方程模拟,均取得较好的吻合,前者归纳出孕甾酮溶解度与CO2密度之间的关系式ln y2=-73.56+8.56·ln ρ-5 733.08/T,后者可利用所得到的结果预测孕甾酮在其它条件下的溶解度.     

在线能量分辨质谱结合量子化学计算解析牛膝中甾酮类同分异构体

甾酮是牛膝的活性成分之一,其同分异构体的难以区分给牛膝化学成分的精准鉴定带来了巨大挑战。在线能量分辨质谱(online energy-resolved mass spectrometry, Online ER-MS)被证明是一种区分同分异构体的有效方法。本研究首先采用超高效液相色谱-四极杆-串联飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF-MS/MS)技术初步鉴定牛膝中的甾酮类化合物,为了进一步区分甾酮类同分异构体,利用超高效液相色谱-四极杆线性离子阱-串联质谱(UHPLC-Q-trap-MS/MS)的多反应监测模式采集各化合物拟离子对(pseudo-ion transitions, PITs)的碰撞能量(collision energy, CE)及相对离子强度,通过逐级改变CE绘制裂解曲线,定义裂解曲线顶点为最佳碰撞能(optimal collision energy, OCE),分别计算各化合物不同离子对的OCE。同时,结合量子化学计算各候选分子化学结构断裂的键能,建立化学结构与OCE的关系。结果表明,从牛膝中共鉴定到包括3组同分异构体的12个甾酮类化合物,并通过与标准品比对验证了该方法的...     

响应面法优化大球盖菇麦角硫因的提取工艺及其体外抗氧化能力稳定性的考察

目的 采用响应面法优化大球盖菇中麦角硫因的提取工艺,并评价多种环境因素对其抗氧化能力的影响。方法 本实验以大球盖菇次级菇为实验材料,首先确定提取方法,然后以温度、时间、料液比和乙醇浓度为单因素,考察它们对麦角硫因提取量的影响,在此基础上采用响应面法优化其提取条件,并且考察温度、pH和光照等外界环境因素对麦角硫因体外抗氧化能力稳定性的影响。结果 选取溶剂提取法进行提取实验,确定最优提取条件为：提取温度70℃、乙醇浓度43%、提取时间32 min、料液比1:27 (g/mL),在此条件下获得麦角硫因的最高提取量为(3.192±0.024) mg/g干重,与预测值接近;还发现麦角硫因的体外抗氧化能力受pH和紫外光照因素影响显著(P<0.05),受温度因素的影响不显著(P>0.05)。结论 研究表明大球盖菇次级菇中麦角硫因含量较高,其体外抗氧化能力的稳定性易受光照、pH等因素影响。这为麦角硫因的后续开发利用提供数据支撑,也促进了大球盖菇次级菇的高值化利用。     

麦角硫因机体内的分布与代谢和其在疾病中的作用研究进展

麦角硫因是一种稀有的天然氨基酸类强抗氧化剂,由放线菌、蓝细菌、部分真菌（例如链霉菌、分枝杆菌等）和蘑菇等微生物合成。动物（包括人类）和植物自身不能在体内合成麦角硫因,植物可通过根系从土壤中吸收微生物合成的麦角硫因,而动物可从食物中吸收和积累麦角硫因。人体通过有机阳离子转运蛋白1型从食物中吸收麦角硫因,其广泛分布于人体的细胞和组织中。已有大量研究报道了麦角硫因的合成、自然界中的分布、化学性质、生理功能和其作为抗氧化剂的特性。尽管研究证明麦角硫因在体外具有明显的抗氧化活性和细胞保护作用,但对其在体内的生理功能研究仍有限。本文旨在综述麦角硫因的独特性质、生物合成以及预防疾病的潜力。     

舒血宁注射液、尼麦角林联合治疗对眩晕症患者症状改善及TCD参数的影响

目的:探讨给予眩晕症患者尼麦角林、舒血宁注射液联合治疗的临床效果。方法:选取2017年5月-2018年6月本院收治的眩晕症患者94例,按随机数字表法将患者分为单药组(n=47)和联合组(n=47)。单药组患者给予舒血宁注射液治疗,联合组患者给予舒血宁注射液+尼麦角林治疗,观察两组患者TCD参数、眩晕评分改善情况、疗效及不良反应发生情况。结果:治疗后,联合组患者左、右VA血流速度及BA血流速度均获得明显改善,且各项指标均显著优于单药组(P<0.05)。治疗后,联合组患者眩晕程度评分有明显提高,且显著高于单药组(P<0.05);联合组患者主要症状(眩晕、前庭功能受损、植物神经症状、耳蜗综合征)消失时间均显著短于单药组(P<0.05)。联合组治疗总有效率为95.74%,显著高于单药组的78.72%(X~2=8.392,P<0.05)。联合组、单药组不良反应发生率分为6.38%、4.26%,组间对比差异无统计学意义(X~2=0.211,P>0.05)。结论:舒血宁注射液、尼麦角林联合治疗眩晕症患者效果显著,可使患者TCD参数获得更大程度的改善,加快患者症状缓解速度,且不良反应较少。     

3-甾酮-Δ~1-脱氢酶的融合表达及纯化

3-甾酮-Δ1-脱氢酶是甾体母核降解的关键酶,能催化3-甾酮化合物在C1,2位处脱氢,提高原有底物的生物活性。利用表达载体pET-30a,实现了简单节杆菌3-甾酮-Δ1-脱氢酶在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达。利用SDS-PAGE分别对超声破碎后的上清和沉淀进行分析,并用分光光度法检测酶的活力。结果表明,表达出的蛋白主要以无活性的包涵体形式存在,利用Ni离子螯合层析的方法纯化融合蛋白,复性后的酶活比简单节杆菌提高了近10倍。     

新型在线净化前处理HPLC-MS/MS测定香精香料中的麦角甾醇和麦角甾酮

建立一种新型的在线净化前处理装置结合高效液相色谱-串联质谱（high performance liquid chromatography-tandem with mass spectrometry,HPLC-MS/MS）法测定香精香料中的麦角甾醇和麦角甾酮。该前处理装置结合基质分散萃取和柱层析对样品进行萃取和净化,之后对样品进行浓缩并利用HPLC-MS/MS分析测定。HPLC-MS/MS方法以甲醇和水为流动相,0.4?mL/min流速条件下梯度洗脱,采用C18色谱柱进行液相色谱分离,大气压正离子方式电离,多重反应监测模式检测,内标法进行定量分析。结果表明,该方法前处理方便且稳定性强,溶剂可回收,净化萃取浓缩为一体;目标物质麦角甾醇和麦角甾酮能在5?min内得到分离检测,在1.5～250?μg/mL范围内具有较好的线性,各待测物的线性相关系数均大于0.999,检出限为0.32～0.35?μg/mL,在不同添加水平条件下,平均回收率为86%～96%,相对标准偏差在3.1%～3.6%之间。本方法能较好地应用于香精香料实际样品中麦角甾醇和麦角甾酮的测定。     

高效液相色谱分析真菌液态发酵产物中的麦角硫因

利用高效液相色谱(HPLC)建立了定量检测发酵产物中麦角硫因的方法。该方法采用Zorbax SB-Aq色谱柱,检测条件为流动相A(纯水:甲醇体积比99:1,使用20%的乙酸和50%的氨水调节流动相的pH至5.0)和B(甲醇),进样量5 μL,柱温30 ℃,流速0.7 mL/min,检测波长为257 nm。建立的梯度洗脱的模式进一步提高了方法的稳定性、延长了色谱柱的使用时间。经高效液相色谱(HPLC)和高效液相色谱质谱联用仪(HPLC-MS)验证,该方法特异性良好,检出限和定量限分别为0.045和0.900 μg/L。在2.5~1000 mg/L的浓度范围内,线性关系良好,相关系数R2=0.9991。精密性、日内稳定性和日间稳定性的RSD分别为0.33%、1.89%和0.026%。平均加标回收率在92.17%和93.92%之间。该方法简便、迅速、稳定、准确,可以用于麦角硫因的研发以及应用的定量分析。