动态观察黄芪对人巨细胞病毒感染的粒-单系祖细胞体外增殖的影响

目的:动态研究(CFU-GM)体外增殖的影响.方法:隔日计HCMV AD169体外持续感染后1～19天内黄芪注射液对CFU-GM细胞簇、集落、大集落及细胞总数变化规律.结果:培养后各组CFU-GM增殖均有不同程度的增加,7天达峰后减少.病毒组CFU-GM增殖均较空白组有明显降低(P＜0.05);黄芪组、更昔洛韦组和空白组细胞增殖明显高于病毒组(P＜0.01);更昔洛韦组和黄芪组CFU-GM增殖显著高于病毒组(P＜0.05).结论:黄芪注射液可以促进体外培养HCMV感染CFU-GM的增殖.黄芪注射液;粒--单系祖细胞;人巨细胞病毒;细胞增殖.     

人支气管上皮细胞转化过程中凋亡与增殖的改变

目的 观察凋亡、增殖在人支气管上皮细胞转化中的改变,探讨其有关机理。方法 使用末端脱氧核苷酰转移酶标记凋亡法（ＴＤＴ）、Ｂｒｄｕ掺入法、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ、荧光原位杂交等方法。结果 人永生化支气管上皮细胞Ｙ在无血清培养基连续转代过程中,晚代细胞软琼脂克隆形成率显著增高,并对血清分化产生明显抗性,对表皮生长因子（ＥＧＦ）依赖性有减弱倾向,细胞增殖速度明显加快,顺铂诱导的凋亡发生率显著低     

T细胞诱导的结肠炎中多形螺旋线虫感染对CD4^＋T细胞增殖的影响

目的 研究肠道多形螺旋线虫对T细胞诱导的小鼠结肠炎CD4^±T细胞增殖情况的影响。方法 用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）染色的卵清蛋白（OVA）特异性CD4＾±辅助性T细胞转入重度联合免疫缺陷（SCID）小鼠中，制作小鼠实验性肠炎模型。将实验模型小鼠分为多形螺旋线虫感染组和无感染组（每组n=5），观察多形螺旋线虫感染7d后小鼠结肠炎性反应的组织学变化；以流式细胞仪检测感染3、5、7d小鼠肠系膜淋巴结中CD4＾＋T细胞CFSE的阴性率，判定肠系膜淋巴结中CD4＾＋T细胞的增殖情况。结果 与无感染组比较，感染组小鼠第7天时有螺旋线虫感染结肠炎性反应明显加重，黏膜固有层细胞浸润增多，结肠上皮破损增加，病理评分明显升高（5．20±0．84比2．00±0．71，P〈0．05）。感染3、5、7d后，感染组小鼠肠系膜淋巴结中CD4±T细胞增殖均比无感染组明显增强，CFSE的阴性率升高[3d：（7．03±1．61）％比（2．32±0．62）％，5d：（55．05±13．41）％比（29．10±2．23）％，7d：（76．97±1．89）％比（43．87±5．56）％，均P〈0．05]。结论 多形螺旋线虫感染在CD4＾＋T细胞诱导的小鼠实验性结肠炎的早期阶段促进了炎性反应的加重，可能与促进CD4＾＋T细胞的增殖有关。     

慢病毒介导环氧化酶-2的沉默对食管鳞癌细胞增殖的抑制效应

目的制备环氧化酶-2(COX-2)的RNA干扰(RNAi)重组慢病毒(lentivirus),观察COX-2表达沉默对人食管鳞癌(ESCC)细胞增殖的影响。方法将目的基因短发卡RNA(sh RNA)载体与包装载体共转染293T细胞,收集上清液后浓缩纯化、滴度测定、感染ESCC细胞;应用荧光显微镜观察包装效率及感染效率,实时荧光定量PCR及Western blot评价COX-2基因沉默效应,MTS法检测细胞的增殖。结果成功制备了沉默COX-2的重组慢病毒,该病毒感染ESCC细胞后,COX-2 m RNA和蛋白的表达量分别降低了80%和50%左右,细胞的增殖明显减慢。结论慢病毒介导的sh RNA干扰能有效沉默ESCC细胞COX-2基因,COX-2表达沉默抑制ESCC细胞增殖。     

微小 RNA-590对口腔鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制

目的 探讨微小RNA(miR)-590对口腔鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响和分子机制.方法 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测2014年1月至2017年1月菏泽市牡丹人民医院52例口腔鳞癌组织中miR-590的表达.将口腔鳞癌细胞Tca-8113分为miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组、miR-590抑制物(anti-miR-590)组、空载体(pcDNA3.1)组、大肿瘤抑制基因1(LATS1)过表达载体(pcDNA3.1-LATS1)组、anti-miR-590+小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、anti-miR-590+LATS1小干扰RNA组(si-LATS1).四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞活力,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭数.双荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法检测验证miR-590和LATS1的靶向调控关系.结果 与癌旁组织比较,口腔鳞癌组织中miR-590的表达水平显著升高[(0.73±0.07)比(0.30±0.03),P<0.05].与anti-miR-NC组比较,anti-miR-590组细胞活力[(0.40±0.04)比(0.78±0.08)]、迁移[(46±5)个比(136±13)个]和侵袭数[(42±4)个比(128±13)个]显著降低(P<0.05);与pcD-NA3.1组比较,pcDNA3.1-LATS1组细胞活力[(0.49±0.05)比(0.78±0.08)]、迁移数[(56±6)个比(136±13)个]和侵袭数[(50±5)个比(128±13)个]显著降低(P<0.05).LATS1靶向负调控LATS1表达.与anti-miR-590+si-NC组比较,anti-miR-590+si-LATS1组细胞活力(0.61±0.06)比(0.40±0.04)、迁移数[(94±9)个比(45±4)个]和侵袭数[(87±9)个比(40±4)个]显著升高(P<0.05).结论 抑制miR-590通过靶向调控LATS1表达从而抑制口腔鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭.     

微小 RNA-203a-3p下调 Mink相关肽 1基因表达抑制非小细胞肺癌细胞转移潜能的实验研究

目的 探讨微小RNA-203a-3p(miR-203a-3p)对非小细胞肺癌恶性生物学行为的影响及机制.方法 本研究于2018年7月至2019年6月进行,正常肺上皮细胞BEAS-2B以及肺癌细胞H1299、SPC-A-1、NC-H446购自中国科学院上海细胞库;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-203a-3p和Mink相关肽1(KCNE2)mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测KCNE2蛋白表达;将SPC-A-1细胞分为miR-203a-3p(转染miR-203a-3p模拟物)组、miR-con组(转染miR-203a-3p模拟物阴性对照)、si-KCNE2组(转染KCNE2干扰表达载体)、si-con组(转染KCNE2干扰表达载体阴性对照)、miR-203a-3p+pcDNA组(转染miR-203a-3p模拟物和KCNE2过表达载体阴性对照)、miR-203a-3p+pcDNA-KCNE2组(转染miR-203a-3p模拟物和KCNE2过表达载体);四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)法检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期素依赖蛋白激酶6(CDK6)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测miR-203a-3p和KCNE2的靶向关系.结果 与BEAS-2B细胞相比,肺癌细胞H1299、SPC-A-1、NC-H446中miR-203a-3p表达水平显著降低[(0.27±0.05)、(0.18±0.07)、(0.25±0.04)比(1.00±0.24)],KCNE2 mRNA表达水平显著升高[(4.37±0.43)、(5.24±0.34)、(6.39±0.35)比(1.00±0.08)],KCNE2蛋白表达水平显著升高[(0.73±0.07)、(0.75±0.06)、(0.59±0.05)比(0.38±0.04)](P<0.05).与miR-NC组相比,miR-203a-3p组SPC-A-1细胞活性降低[48 h为(0.42±0.05)比(0.55±0.05),72 h为(0.63±0.07)比(0.84±0.09)],迁移细胞数减少[(79.90±5.21)个比(172.13±8.57)个],侵袭细胞数减少[(45.89±3.50)个比(101.83±9.55)个];Cyclin D1、CDK6、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05).与si-NC组相比,si-KCNE2组SPC-A-1细胞活性降低[48 h为(0.44±0.05)比(0.58±0.05),72 h为(0.63±0.08)比(0.94±0.09)],迁移细胞数减少[(71.71±4.52)个比(174.56±13.67)个],侵袭细胞数减少[(35.68±3.27)个比(81.37±5.46)个];Cyclin D1、CDK6、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05).miR-203a-3p靶向调控KCNE2的表达;KCNE2过表达部分逆转miR-203a-3p对肺癌细胞SPC-A-1的作用.结论 miR-203a-3p可通过下调KCNE2抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭.     

叶酸对子宫颈癌细胞甲基-CpG-结合蛋白质2表达及细胞增殖抑制的作用

目的 探讨叶酸对子宫颈癌细胞甲基-CpG-结合蛋白质2(MeCP2)表达及细胞增殖抑制的影响.方法 选择子宫颈癌细胞Caski(HPV16阳性)和C33A(HPV阴性)进行不同浓度叶酸干预后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,分别用Western blot和实时荧光聚合酶链反应(PCR)技术检测MeCP2蛋白和mRNA的表达水平.结果 叶酸随着浓度的增加,对两种细胞的生长抑制作用加强,各浓度叶酸实验组与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).C33A与Caski细胞的凋亡率随叶酸浓度的增加呈上升趋势(C33A:r=0.965,P＜0.001;Caski:r=0.973,P＜ 0.001).MeCP2蛋白的表达量则呈下降趋势,其与叶酸浓度呈负相关(C33A:r=-0.952,P＜ 0.001;Caski:r=-0.947,P＜ 0.001);Caski与C33A细胞各浓度组间mRNA表达水平差异有统计学意义(C33A:F=77.041,P＜0.001;Caski:F=59.885,P＜ 0.001);同一质量浓度下,500 μg/ml组Caski细胞MeCP2蛋白表达及mRNA水平均较C33A细胞高,且差异有统计学意义(P＜0.05).MeCP2蛋白表达量与细胞凋亡率呈负相关(C33A:r=-0.970,P＜0.001;Caski:r=-0.932,P＜ 0.001).结论 叶酸可以抑制子宫颈癌细胞的生长,促进细胞凋亡,降低MeCP2在子宫颈癌细胞中的表达.MeCP2的异常高表达对子宫颈癌细胞C33A和Caski的凋亡有抑制作用.     

补肾通络方对rIL-1β诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及TGF-β_1、CTGF的影响

目的：研究补肾通络方含药血浆对重组大鼠白细胞介素-1β（r IL-1β）干预的大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增殖与TGF-β1和CTGF表达的影响,以探讨补肾通络方抗肾脏纤维化的分子作用机制。方法：体外培养GMCs,制备补肾通络方含药血浆,用白细胞介素对GMCs进行干预,MTT比色法检测GMCs增殖、ELISA检测TGF-β1蛋白表达,RT-PCR检测CTGF mRNA的表达。结果：与空白对照组比较,白细胞介素能诱导GMCs的增殖、促TGF-β1生成、上调CTGF表达;补肾通络方含药血浆能下调由白细胞介素介导的GMCs增殖、TGF-β1蛋白和CTGF mRNA的表达量,与白细胞介素组比差异有统计学意义（P〈0.01）,且呈时间依赖性。结论：补肾通络方抗肾脏纤维化作用与抑制TGF-β1和CTGF的表达,调节GMCs的功能密切相关。     

贲门癌及其癌前病变中细胞增殖与细胞凋亡的比较和研究

目的探讨细胞增殖与细胞凋亡在贲门癌发生发展中的作用。方法应用免疫组化法检测PCNA、p53、Bcl-2在30例贲门癌、10例胃溃疡胃壁组织中的表达和分布，采用病理图像分析的方法进行灰度检测，并对胃壁上皮组织或癌组织中凋亡细胞进行计数。结果观察和比较自胃远端切缘、癌旁至癌灶等胃壁组织中的变化，发现PCNA呈显著的增高趋势，癌灶组织中PCNA呈强阳性表达；p53在正常胃黏膜组织中不表达，在癌灶组织中呈强阳性表达；Bcl-2在癌旁组织中呈强阳性表达，显著高于癌灶组织；细胞凋亡指数在癌灶组织中显著降低。胃溃疡病灶边缘的胃黏膜组织PCNA呈阳性表达，p53呈阴性表达，Bcl-2呈弱阳性表达，细胞凋亡指数显著增高。结论在非典型增生的贲门黏膜组织中，细胞增殖和细胞凋亡均非常活跃，而一旦细胞凋亡受到严重抑制，即可导致贲门癌的发生。     

癌前病变Caspase-3表达下调与胃黏膜癌变的关联

目的观察Caspase-3蛋白在胃癌及其癌前病变组织中的表达,分析它与细胞凋亡和细胞增殖的关系,探讨Caspase-3蛋白在胃癌发生过程中的生物学意义及相关分子病理学机制。方法选取184例胃黏膜活检和手术切除组织标本,其中胃癌20例,慢性萎缩性胃炎6例,萎缩性胃炎伴肠上皮化生(简称肠上皮化生)31例,萎缩性胃炎伴不典型增生(简称不典型增生)114例;正常对照13 例。采用SABC法检测Caspase-3蛋白的表达;通过图像域值分析计算其阳性指数,分析其与细胞增殖(Ki67蛋白阳性指数)和凋亡(TUNEL指数)的相关关系。结果 Caspase-3蛋白在重度不典型增生组织中的阳性指数(29．8％±3．9％)显著低于轻度(58．3％±4．2％)和中度不典型增生(50．4％± 4．8％)及萎缩性胃炎(68．3％±3．3％)或肠上皮化生(70．9％±4．3％),差异有统计学意义(P<0．05); 而与胃癌(26．9％±3．0％)相比,差异无统计学意义(P>0．05)。Caspase-3蛋白表达与细胞凋亡呈显著正相关(r=0．94,P<0．05),Caspase-3蛋白阳性组细胞增殖指数(18．3％±2．2％)显著低于阴性组(48．9％±3．1％;P<0．05)。结论 Caspase-3蛋白在萎缩性胃炎、肠上皮化生和(或)轻中度不典型增生黏膜中表达上调,而在重度不典型增生及胃癌组织中表达下调,且这种变化与细胞凋亡呈显著正相关。Caspase-3失活或表达下调相关的细胞凋亡和增殖紊乱可能在胃黏膜损伤及癌变过程中起某种作用。