榛仁免疫活性肽分离纯化及结构鉴定

以榛仁分离蛋白水解肽经超滤获得的分子质量小于3 kDa的组分为研究对象,采用凝胶色谱及反相高效 液相色谱对其进行分离纯化,并对所得组分进行结构鉴定和验证。结果显示：经Sephadex G-15分离得到的组分B1 能极显著降低小鼠RAW264.7巨噬细胞肿瘤坏死因子和白介素-6水平（P＜0.01）;经质谱解析筛选出的肽段Pro-Glu- Asp-Glu-Phe-Arg（PEDEFR）对细胞无毒性作用,高浓度PEDEFR（＞50 μmol/L）能提高小鼠RAW264.7巨噬细胞吞噬能 力;当浓度达到100.0 μmol/L时,促进脾淋巴细胞增殖率达到44.21%,在伴刀豆蛋白A共同作用下,增殖率达到53.22%。 PEDEFR对小鼠RAW264.7巨噬细胞具有较好的免疫调节能力,本研究为榛仁免疫活性肽的开发提供了理论依据。     

用生物素-亲和素系统测定放射性标记生物物质的活性

分别用^131I和^188Re标记亲和素，测定其与生物素结合的能力，并与未标记的亲和素、罗丹明标记的新和素进行比较，测定标记亲和素与生物素结合曲线和半解吸量；探讨用生物素－亲和素系统测定放射性核素标记生物物质活性的可能性。结果表明，未标记的亲和素、罗丹明标记亲和素、^188Re－亲和素和^131I－亲和素，它们与生物素的结合能力依次下降，与生物素半解吸量分别为21．9，19．5，25．7和47．9μg；放射性标记的亲和素与生物素结合的能力低于未放射性标记的亲和素和罗丹明－亲和素。由此推测，有可能用亲和素－生物素系统来评价标记方法对生物活性的影响。     

水解条件对挤压膨化高温豆粕酶解物免疫活性的影响

研究合理的水解工艺以有效提高高温豆粕的免疫活性。采用二次旋转回归法优化水解条件,以水解温度、酶添加量、底物添加量、酶解时间为影响因素,以淋巴细胞增殖指数(SI)为检测指标,运用SPSS13.0软件分析,最终用Design Expert 7.0.0软件优化出最优的水解条件。最优的工艺条件为：胰蛋白酶添加量7999.97U/g,酶解温度55.14℃,水解时间4.34h,底物添加量(底物与加水量之比)4.41%,经MTT法测定,此条件下酶解物对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞的免疫刺激指数最高,为1.1894。     

姬松茸多糖组分对小鼠巨噬细胞作用研究

为研究姬松茸多糖组分对小鼠巨噬细胞的激活作用,用姬松茸多糖组分(ABMB3)刺激体外培养的小鼠骨髓来源巨噬细胞,检测刺激后巨噬细胞分泌至培养基中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、NO 含量以及小鼠巨噬细胞对乳胶颗粒吞噬率的变化,并检测ABMB3刺激的巨噬细胞对肿瘤细胞的抑制作用,结果显示：经姬松茸多糖组分ABMB3刺激后能显著刺激巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β,并产生大量的NO,小鼠巨噬细胞对乳胶颗粒的吞噬功能也明显增强。而且可以通过激活巨噬细胞,增强其吞噬能力而达到抑制肿瘤细胞增殖的功效。     

香菇多糖的PMP-HPLC指纹图谱分析与免疫活性的谱效关系研究（网络首发、推荐阅读）

研究建立一种柱前1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）衍生化液相色谱测定香菇多糖单糖组成的方法,色谱条件为ZORBAX Eclipse XDB-C18液相色谱柱;流动相为0.1 mol/L磷酸盐缓冲液-乙睛（体积比80∶20）;柱温30 ℃;检测器为紫外检测器（245 nm）;流速为0.8 mL/min。方法学研究表明：方法准确度高,重现性、稳定性好,各单糖组分在一定的浓度范围内具有良好的线性关系 （R2≥0.998 5）,平均加样回收率在80.6%~91.4%（RSD≤5%）,可应用于香菇多糖样品的单糖组成分析。通过对81批次香菇多糖样品的分析,构建了基于多糖单糖组成信息的液相色谱指纹图谱,确定了7个共有特征峰,分别为甘露糖、氨基葡萄糖、核糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、岩藻糖,相似度在0.94以上。此外,运用偏最小二乘回归分析（PLS）关联香菇多糖单糖组成与小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW264.7细胞）存活率。结果显示,氨基葡萄糖、核糖和葡萄糖与细胞存活率呈正相关,其中前两种单糖的贡献较大。     

滁菊多糖结构特性及其免疫活性研究

目的 分离纯化滁菊多糖(Chuzhou chrysanthemum polysaccharides, CCPS),对其进行结构解析,并研究其免疫活性。方法 以滁菊为原料,热水浸提,乙醇沉淀得到CCPS;通过快流速二乙氨基乙基-琼脂糖凝胶(diethylaminoethyl-sepharose fast flow, DEAE-FF)和葡聚糖凝胶G-100 (Sephadex G-100)层析柱分离纯化CCPS,得到中性多糖CCPS-1-1。用高效液相色谱法、紫外和红外光谱法、刚果红实验等进行CCPS-1-1结构解析,建立小鼠单核巨噬细胞(mousemononuclearmacrophagescells,RAW264.7)的免疫模型探究其免疫刺激活性。结果 CCPS-1-1主要由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、半乳糖醛酸组成,具有三股螺旋结构。体外免疫活性实验表明,CCPS-1-1可以促进RAW264.7细胞的增殖和吞噬作用,显著诱导RAW264.7细胞中一氧化氮(nitricoxide,NO)的分泌及细胞因子包括肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)、白细胞...     

复合酶-微波辅助萃取结合超滤纯化的灰树花子实体多糖的免疫活性研究

目的:研究经酶解-微波辅助萃取、超滤分级纯化的灰树花子实体多糖的免疫活性。方法:采用复合酶解结合微波辅助萃取方法提取灰树花子实体多糖,采用超滤工艺对提取多糖进行分级纯化;采用MTT法研究多糖对小鼠脾淋巴细胞、ConA/LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞的增殖作用;建立荷瘤小鼠模型,研究灰树花多糖对肿瘤的抑制作用。结果:获得分子质量范围为<50kD的GFP-I、50～100kD的GFP-II和100～200kD的GFP-III;与RPMI-1640对照组相比,GFP-I、GFP-II和GFP-III对淋巴细胞增殖率分别增加26.558%～74.167%(P<0.001)、20.175%～152.075%(P<0.001)和26.473%～334.797%(P<0.001);对ConA诱导的淋巴细胞增殖率分别增加31.408%～122.894%(P<0.001)、53.075%～235.693%(P<0.001)和83.347%～367.241%(P<0.001);对LPS诱导的淋巴细胞增殖率分别增加20.526%～97.075%(P<0.001)、38.288%～211.348%(P<0.001)和54.454%～34...     

加压辅助碱法提取蝉花子实体多糖工艺优化及体外免疫活性研究

目的 优化加压辅助碱法提取蝉花子实体（人工培植）多糖的工艺，并对其免疫活性进行研究。方法 以多糖提取率为指标，在单因素基础上，经正交试验优化其提取工艺。同时以测定小鼠体重增长率、脏器指数，血清中TNF-α、IL-2、IL-6的含量、免疫球蛋白IgA、IgG、IgM的含量以及小鼠脾淋巴细胞增殖刺激指数来评价免疫活性。结果 最佳提取工艺条件为：氢氧化钠浓度0.2 mol/L，提取压力1.2 MPa，提取温度70℃，提取时间30 min，在此条件下多糖提取率为8.69%，该方法提取效果优于单一提取法。体外免疫活性试验表明，蝉花子实体（人工种植）多糖能有效增加模型小鼠的体重增长率及脏器指数，细胞因子TNF-α、IL-2和IL-6的含量，免疫球蛋白IgA、IgG和IgM的含量和脾淋巴细胞增殖刺激指数，表明其具有明显的提高免疫力作用。结论 优化后的提取条件能够有效提取蝉花子实体（人工种植）多糖，得到的蝉花子实体（人工种植）多糖具有明显的提高免疫力作用。该研究可为蝉花子实体（人工种植）多糖的提取及开发应用提供科学依据。