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【目的】 构建脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1(PELP1)基因慢病毒表达载体,研究沉默PELP1/雌激素受体非基因组活性辅助调节因子(PELP1/MNAR)基因表达对子宫内膜癌细胞增殖和周期的作用及机制。【方法】 构建合成靶向PELP1/MNAR RNAi慢病毒表达载体,并转染子宫内膜癌Ishikawa细胞,Real-time PCR和western blot检测PELP1/MNAR mRNA和蛋白水平的表达。使用普通培养基和加入E2的培养基培养各组细胞,MTT检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞生长周期情况;Western blot检测ER下游靶基因c-fos,cyclin D1的蛋白表达水平。【结果】 成功构建合成靶向PELP1/MNAR RNAi慢病毒表达载体,转染子宫内膜癌Ishikawa细胞,转染后 PELP1/MNAR mRNA的表达和蛋白的表达分别下降86%和65%(P < 0.05)。转染后Ishikawa细胞与对照组相比增殖抑制(P < 0.05), 细胞周期G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少 (P < 0.05)。加入雌激素后,三组细胞的生长速度加快,细胞S期的比例增加,转染组增殖抑制明显(P < 0.05),S期比例降低(P < 0.05)。转染组ER下游基因c-fos、cyclin-D1蛋白水平均显著降低(P < 0.05)。【结论】 在子宫内膜癌细胞中沉默PELP1/MNAR的表达能能抑制细胞生长、使细胞阻滞在G1期,下调ER靶基因蛋白表达,PELP1/MNAR有望成为子宫内膜癌治疗的潜在靶点。 相似文献
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【目的】 探讨矢车菊素-3-葡萄糖苷(C3G)对TNF-α诱导的血管平滑肌增殖的影响及可能的机制。【方法】 C57BL/6J小鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC) 购于ATCC,体外培养后以C3G对细胞进行预处理后观察TNF-α的促细胞增殖作用;Dihydroethidium (DHE)荧光染色检测VSMC在TNF-α作用下的活性氧(ROS)生成情况;实时定量PCR检测细胞内NADPH氧化酶活化蛋白1(NoxA1)的mRNA水平;蛋白质印迹法检测细胞内NoxA1、信号转导与转录激活因子3 (STAT3)、磷酸化STAT3及β-actin的表达水平。统计学方法采用单因素方差分析。【结果】 C3G预处理能够抑制TNF-α诱导的VSMC增殖,该作用呈现剂量、时间依赖性。联合应用50 μmol/L C3G及100 μmol/L apocynin显著减少TNF-α诱导ROS的生成。C3G联合apocynin较C3G或apocynin单独孵育更能显著抑制TNF-α处理下VSMC内NoxA1基因的表达及STAT3蛋白的磷酸化。应用ROS清除剂触媒(catalase 2 000 U/mL)能显著抑制TNF-α诱导的VSMC增殖及STAT3蛋白活化。【结论】 C3G对抗TNF-α诱导VSMC增殖的机制很可能是通过削弱NoxA1导致的ROS生成,从而抑制STAT3蛋白的激活。 相似文献
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【目的】 SLC33A1基因已被报道是我国北方一个HSP家系的致病基因,但研究未发现在欧洲的HSP患者中有该基因的突变。本研究的目的是检测SLC33A1是否为中国南方人群中遗传性痉挛性截瘫患者的致病性基因之一。【方法】 对收集到的70例中国南方散发遗传性痉挛性截瘫的患者,提取基因组DNA,并进行SLC33A1基因所有编码外显子及外显子-内含子交界区域的直接测序;鉴定所发现的遗传变异,并同我们所收集到的57例无血缘关系的正常人进行比对,以及生物信息学分析。【结果】我们只发现 SLC33A1基因区域的8个已存在于数据库中的单核苷酸多态性,未发现任何致病性突变。【结论】 与国外学者的报道相符合,我们的70例中国南方HSP病人中没有SLC33A1所导致的病人,故 SLC33A1对HSP的致病性需要进一步的核实、研究。 相似文献
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目的研究大肠癌患者血清中转化生长因子β1(TGF β1)表达意义及其与癌胚抗原(CEA)、肿瘤分期的关系。方法以酶联免疫法检测血清中TGF β1的含量。结果患者组血清TGF β1(40.36±17.60ng/ml)高于对照组(19.2±7.98ng/ml)(P<0.01),TGF β1的含量随着肿瘤分期增加而升高(P<0.05)且与血清中CEA含量有关(r=0.392,P<0.01)。结论大肠癌患者血清TGF β1含量与肿瘤的发生、发展有关。 相似文献
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目的:研究腺病毒/HSV1-tk/GCV、ACV系统对卵巢上皮癌细胞旁观者效应。方法:常规重组腺病毒扩增纯化后,测病毒滴度。X-gal染色法测定转染效率,PCR检测HSV1-tk的表达,混合细胞培养实验观察旁观者效应。结果:重组腺病毒扩增纯化后测定滴度分别为Ad/tk*"62×109pfu/ml,AdLacZ*"14×109pfu/ml。当感染复数为100时,近100%的细胞可被感染。PCR结果显示,Adtk转染TYK后,可见404bp的特异性条带,在同一MOI中,有10%的Adtk/TYK细胞存在,GCV就可杀死近50%左右的混合细胞。ACV的作用约为GCV的1/10。结论:重组腺病毒Ad/tk可有效地感染人卵巢上皮癌细胞,腺病毒/HSV1 tk/GCV、ACV系统存在着旁观者效应。 相似文献
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目的:探讨培哚普利对高血压肾间质纤维化的抑制作用和TGF-β1表达的影响。方法:Spontaneously hypertensive rats (SHR)大鼠随机分为高血压组和培哚普利治疗组,Wistar-Kyoto rats( WKY)大鼠为对照组。ELISA法测血清TGF-β1的浓度;免疫组织化学染色法检测Ⅰ,Ⅲ型胶原和TGF-β1在3组肾间质的沉积;半定量逆转录-聚合酶链反应观察TGF-β1 mRNA在3组肾脏的表达。结果:3组血TGF-β1 浓度的差异无显著性(P>0.05);高血压组肾间质Ⅰ,Ⅲ型胶原及TGF-β1明显增加(分别为P<0.01 , P<0.05),培哚普利能明显减少Ⅰ,Ⅲ型胶原及TGF-β1的沉积,显著降低TGF-β1 mRNA的表达(分别为P<0.01 , P<0.05);Ⅰ,Ⅲ型胶原的表达与肾间质TGF-β1的表达呈正相关(分别为r=0.734,r=0.762,P<0.01)。结论:肾脏局部的TGF-β1参与了自发性高血压大鼠肾间质纤维化,培哚普利可通过减少肾脏局部的TGF-β1的表达,来减轻肾间质纤维化。 相似文献
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