微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫SYBR Green real time PCR检测方法的建立

根据GenBank中登录的隐孢子虫小亚基rRNA基因序列设计1对引物,并以标准基因组DNA为模板,初步建立了检测乳牛微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫的SYBR Green real time PCR方法,并对乳牛微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫阳性样品和上海40份乳牛粪便进行了检测.结果表明,此次建立的real timePCR对微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫均能扩增出曲线,且其他寄生虫(鸡贝氏隐孢子虫、刚地弓形虫、犬新孢子虫)和大肠杆菌均未检测到;标准基因组DNA的检测阈值达到5个拷贝,牛粪中卵囊的最低检测量为每克粪便5个卵囊,乳牛粪便阳性率为15%(6/40).表明,建立的荧光定量PCR快速、特异、敏感,可用于乳牛隐孢子虫病的流行病学调查.     

南京地区犊牛隐孢子虫感染情况调查

以南京地区3个奶牛场的55头6月龄以内的犊牛为调查对象,在16头犊牛的粪便中查到隐孢子虫卵囊,平均感染率为29.1%(16/55).A、B 2个奶牛场犊牛的感染率(分别是40.0%和35.7%)高于C场犊牛的感染率(19.2%),但3个奶牛场感染率的统计学差异不显著(P＞0,05).各奶牛场1～3月龄犊牛隐孢子虫的感染强度和感染率均比4～6月龄犊牛高(P<0.05).     

酶法检测黄牛实验性急性肝坏死

反刍动物在各种原因所致的肝脏疾病中,通常只表现食欲下降或废绝,消化道功能扰乱或结合膜黄染等一般临床症状,由于对动物肝功能测定尚没有如人医那样具有代表性项目,故往往难以作出正确诊断。作者用四氯化碳投服黄牛造成急性肝坏死,测定血清中多种酶的变化水平,以期筛选出诊断牛急性肝坏死的理想酶。 (一)材料和方法 1.经临床检查和超声波探查确认健康成年黄牛6头(体重200～250公斤),分为试验     

锌与维生素A对隐孢子虫感染小鼠免疫功能的影响

为探讨锌和维生素A对隐孢子虫感染小鼠免疫功能的影响,将75只清洁级昆明小鼠随机分成5组,各组均饲喂基础日粮。其中Ⅰ组和Ⅴ组不添加锌和维生素A,Ⅱ组以饮水方式添加锌(38.5μmol/mL),Ⅲ组以灌喂的方法添加维生素 A(400 IU/只),Ⅳ组添加锌和维生素 A,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组均在试验开始时灌喂小型隐孢子虫卵囊( 2.56×106/mL),Ⅴ组作为不接种对照。试验结果,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组小鼠的粪便排卵量和排卵持续时间分别显著低于Ⅰ组(P<0.05);在试验的第 2 周和试验结束时,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组小鼠血液中CD4、CD8细胞百分率以及CD4/CD8比值均极显著高于Ⅰ组(P<0.01)。表明,锌和维生素A均能够增强小鼠的细胞免疫功能,提高机体抗隐孢子虫感染的能力。     

禽流感病毒GD/1/96株M基因在sf9昆虫细胞中的表达

从pUCM 1质粒中亚克隆禽流感病毒M基因至转移载体 pFastBac1质粒 ,PCR鉴定后 ,转化DH10 BAC感受态细胞。提取重组杆粒rBacM ,以M 13为通用引物作PCR分析 ,证明M基因已转入其中。用CellFectin试剂包裹rBacM杆粒转染sf9细胞 ,96h收取感染细胞。细胞表达产物裂解后作SDS PAGE蛋白电泳和Westernblot分析 ,证明M基因在昆虫细胞中成功表达且具有与天然M 1蛋白相似的活性。琼脂扩散试验结果进一步证明 ,重组M 1蛋白可作为诊断抗原。     

雏鸵鸟腹水综合征的诊治

某鸵鸟场有种鸵鸟 3 0余只 ,每周孵化 1次 ,每次入孵鸵鸟蛋 2 0枚左右 ,但自 1998年 7月以来 ,几批孵出的雏鸵鸟在 1月龄左右病死率高达 80 % ,发病雏鸵鸟中以腹水综合征居多 (约60 %～ 70 % )。1　发病情况该场雏鸵鸟孵出后即给饮服自配的电解质营养液 ,其中含ＮａＣｌ3 .5ｇ/Ｌ ,ＮａＨＣＯ3 2 .5ｇ/Ｌ ,在 14日龄前 ,每天饮用 3～ 4次 ,再不供给其他饮水 ;对不饮水的雏鸵鸟每次灌服该营养液10ｍＬ左右。雏鸵鸟在 2 0日龄左右即开始出现腹水综合征 ,表现为精神沉郁 ,被毛粗乱 ,食欲下降 ,腹部膨大 ,行走呈企鹅状 ,反应迟钝 ,有的雏鸵鸟有…     

肉鸡猝死综合症

肉鸡猝死综合症孙卫东，沈向真，程龙飞，王小龙，黄克和（南京农业大学动物医学院２１００９５）肉鸡猝死综合征（Ｓｕｄｄｅｎｄｅａｔｈｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＳＤＳ）又称；急性死亡综合征（Ａｃｕｔｅｄｅ－ａｔｈＳｙｎｄｒｏｍｅ，ＡＤＳ），两脚朝天病或仆翻病（Ｆｌ...     

雏鸡感染马立克氏病强毒后抗氧化酶活性和丙二醛水平的变化

对１０日龄雏鸡人工感染马立克氏病强毒后,马立克氏病发病率为７８．０％,死亡率为７６．０％。在攻毒后２,４和６周,感染鸡血清中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、血液中过氧化氢酶（ＣＡＴ）和谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰｘ）活性在总体上均显著低于健康对照组鸡（Ｐ＜０．０５）,血清丙二醛水平极显著地高于健康对照组鸡（Ｐ＜０．０１）。结合对马立克氏病临床病例的研究结果认为,氧自由基介入了马立克氏病的发病过程。     

布鲁氏菌全基因组DNA芯片研制及比较基因组杂交方法的建立

为利用布鲁氏菌强毒株马耳他布鲁氏菌(B.melitensis)16M和流产布鲁氏菌(B.abortus)9-941全基因组序列,构建布鲁氏菌全基因组DNA芯片,并将其应用于比较基因组学分析,从基因库下载马耳他布鲁氏菌16M和流产布鲁氏菌9-941中的3 218个基因设计引物,经过条件优化和重新设计引物等方法进行大规模PCR扩增,成功扩增3 212条基因。产物纯化后点制醛基修饰玻片,每个基因2个点,加上阳性和阴性对照,芯片上合计6 912个探针。囊括了布鲁氏菌3 212条基因和阳性、阴性对照点。采用Cy3/Cy5双色荧光杂交技术,分别以马耳他布鲁氏菌16M和流产布鲁氏菌9-941作为参照和待测样本进行荧光双色杂交分析,成功建立了布鲁氏菌比较基因组杂交分析方法。若干质控杂交结果表明,建立的全基因组DNA芯片杂交结果与全基因组测序结果完全一致。证明成功建立了基于全基因组DNA芯片的布鲁氏菌比较基因组学技术平台。