重组人canstatin的克隆、表达及其活性鉴定

目的: 克隆并表达canstatin基因，初步检测其抑制血管生成的活性。方法: 采用RTPCR方法从人胚肝组织中钓取canstatin cDNA，克隆入pMD18T载体中，并测序鉴定。在QIA表达系统中表达，Ni柱亲和层析纯化。进行生物学活性鉴定。结果: 经序列分析所获684 bp人canstatin基因与报道一致，重组进pQE30表达载体，IPTG诱导表达并纯化成功，表达产物能明显抑制血管生成。结论: 成功构建人canstatin cDNA克隆和表达载体并在大肠杆菌M15中高效表达。纯化回收产物在鸡胚绒毛尿囊膜（chorioallantoic membrane,CAM）实验中具有明显抑制血管生成活性     

以分子分型为基础的肺癌靶向治疗研究进展

随着基因分析技术的不断发展, 对肿瘤的发病机制以及治疗的研究愈加透彻。依靠传统的组织病理学分类无法充分实现对肿瘤患者的个体化治疗方案选择在制定临床研究的方案时, 研究者在考虑病理类型和临床因素之外, 还要充分考虑受试个体的基因特征。那么, 分子异常改变对肿瘤治疗意义如何, 以基因特征为基础的肿瘤临床试验时代离我们到底有多远?本文在此将可能影响肿瘤治疗方向的基因改变类型, 以及近年肺癌研究领域一系列基于分子特征的临床试验做一综述。      

血管基膜衍生多功能肽在大肠杆菌中的表达及抗肿瘤活性的测定

目的 构建血管基膜衍生多功能肽(VBMDMP)原核表达载体、诱导表达GST-VBMDMP融合蛋白,观察其对Lewis肺癌自发转移瘤模型的影响。方法 人工合成VB-MDMP DNA序列(人源性IgG3上游铰链区连接肽连接的Tumstatin的两个功能区获得性肽基因序列),构建克隆载体PUC19-VBMDMP,亚克隆到pGEX-4T-1原核表达载体上,经测序和酶切分析鉴定获得了未发生移码突变的PGEX-4T-1-VBMDMP融合载体质粒。转化入大肠杆菌后,用 IPTG诱导表达融合蛋白。Glutathione sepharose 4B层析柱纯化蛋白表达产物。采用Lewis肺癌自发转移瘤模型,检测VBMDMP的抗肿瘤作用。结果 成功的构建pUC19-VB-MDMP克隆和pGEX-4T-1-VBMDMP表达载体,在大肠杆菌获得稳定表达,用Glutathione sepharose 4B层析柱获得纯化的GST-VBMDMP融合蛋白。VBMDMP(GST-VBM-DMP 10、6、2 mg·kg~(-1))对小鼠Lewis肺癌原发瘤具有抑制作用(瘤重抑制率分别为95.5％,80.4％,60.05％)。VBMDMP(GST-VBMDMP 10,6,2 mg·kg~(-1))对小鼠Lewis肺癌自发性肺转移具有抑制作用(自发性肺转移瘤结节抑制率分别为94.8％,86.4％,73.9％)。结论 VBM-DMP对小鼠Lewis肺癌原发瘤和肺转移具有抑制作用。     

加强教学督导培养高素质人才

本校由教学主管部门组织专家、教授组成的督导团 ,主要贯彻或执行学校教学改革方案、教学制度和规定等 ,对全校各部门的教学工作进行督察、检查、评价和指导 ,并及时向学校主管教学的部门报告督导情况 ,提出意见和建议。本文就督导团以确保教学目标的实现和提高教学质量的做法[1 ] ,报告如下。1　以评价课堂教学为中心1.1　督导团对教师的评教活动　　督导团对全校申报副教授、教授的 14 6名教师进行了教学考核与评价。其中包括课堂教学考核、向学生及同行教师进行问卷调查、对教师的教学情况进行了全面综合评价。对评价等级较低、教学质量…     

两种源于胶原Ⅳ非胶原区具有抑制血管形成和肿瘤生长的功能肽

Tum statin和 Canstatin是继 Restin、angiostatin和 endostatin之后最新发现的基底膜来源人胶原 肿瘤血管生成抑制因子。 Tumstatin来源于胶原 α3链 ,其 N-端 5 4～ 132氨基酸功能肽能够抑制内皮细胞增殖和诱导内皮细胞凋亡 ,N -端 197～ 2 15氨基酸 [α3( ) NC1185～ 2 0 3氨基酸 ]功能肽能够抑制多种恶性肿瘤细胞的增殖。 Canstatin是来源于 型胶原α2链的 2 4 k D的血管生成和肿瘤生长抑制因子 ,它能剂量依赖性抑制内皮细胞管状结构的形成 ,有效抑制内皮细胞的增殖和迁移 ,并能诱导内皮细胞凋亡。在小鼠移植瘤模型体内实验中 ,Tum-statin和 Canstatin都显示出对实体瘤生长的显著抑制作用     

人胃癌及胃间质细胞肿瘤Epstein-Barr病毒的检测

目的 探讨Epstein-Barr病毒感染对人类胃肿瘤发生，分化程度及淋巴结转移的影响。方法 取冰冻组织及石蜡切片提取DNA，用PCR方法扩增EBV-DNABamHI-W片段，阳性者提示有EBV感染，分析EBV阳性胃肿瘤的分化程度，淋巴细胞浸润和淋巴转移情况。结果 109例胃癌中共有18例检出EBV-DNA（阳性率为16.5%)，3例胃间质细胞肿瘤中有1例EBV-DNA阳性（阳性率为33.3%)。EBV阳性胃肿瘤分化程度低，淋巴结转移率低（r=-0.176,P=0.031)。富于淋巴细胞浸润，结论 EB病毒感染可能参与胃肿瘤的发生。Epstein-Barr病毒感染与淋巴结转移率呈负相关。     

小细胞肺癌免疫治疗的临床研究进展

小细胞肺癌（smallcell lung cancer ,SCLC）是一种恶性程度较高的肿瘤,约占全部肺癌的15% ,其具有侵袭性高、增殖快、早期广泛转移的生物学特点。虽然对化疗和放疗高度敏感、初治缓解率高,但极易耐药和复发,迫切需要新的治疗策略以提高疗效、延长生存期。SCLC发生发展和化疗耐药涉及众多细胞学和分子生物学异常改变,随着对SCLC生物学行为理解的加深以及分析检测技术的不断发展,免疫治疗可能突破治疗瓶颈、为SCLC治疗开辟新的途径。本文将对小细胞肺癌的免疫治疗临床研究做一综述。      

重组人canstatin表达产物的抗肿瘤活性鉴定

 目的　正确构建人canstatin原核表达载体 ,诱导表达重组人canstatin融合蛋白 ,并对其活性鉴定。方法　将人canstatincDNA亚克隆入 pQE30 ,构建重组质粒 pQE30 canstatin ;转化M 15 [pREP4] 中 ,IPTG诱导表达 ,纯化回收表达产物 ,复性后用Lewis肺癌移植瘤模型对其活性鉴定。结果　成功构建人canstatincDNA表达载体 ,纯化回收 ,获得高纯度canstatin重组蛋白。纯化产物在体内能抑制Lewis肺癌移植瘤血管的生成 ,从而抑制肿瘤生长和转移 ,抑瘤率 (% )为 6 0 .0 % ,转移抑制率 (% )为 74 .3%。结论　 (1)成功构建了原核表达载体 pQE30 canstatin。 (2 )重组人canstatin融合蛋白在原核表达系统中高水平表达 ,并获得高纯度canstatin重组蛋白。 (3)重组canstatin融合蛋白可抑制Lewis肺癌移植瘤血管的生成 ,从而抑制肿瘤生长和转移活性。     

PIM1启动子区基因多态性与非小细胞肺癌易感性的相关性研究

原癌基因PIM1通过活化下游基因,参与细胞增殖、分化及肿瘤形成。本研究旨在探讨中国人群PIM1基因启动子区（-1 882A>T）单核苷酸多态性与非小细胞肺癌易感性的相关性。方法:应用聚合酶链反应-直接测序法检测25例患者及25例正常对照者的PIM1基因启动子区多态性,应用聚合酶链反应-直接测序法检测206例非小细胞肺癌患者以及189例正常对照者-1 882A>T多态性位点的基因型,并进行病例、对照相对危险度分析。结果:等位基因-1 882T在肺癌患者和健康对照者中频率分别为6.8%和11.0%,等位基因分布频率在两组间存在显著性差异（P=0.025）。相对危险度分析显示携带TA+TT基因型者发生非小细胞肺癌的风险明显低于携带AA基因型者（OR=0.568,95%CI=0.335～0.962,P=0.034）。结论:中国人中PIM1基因启动子区单核苷酸多态性（-1 882A>T）与非小细胞肺癌发生可能有关,T等位基因的存在可能降低肺癌发生的风险,可能是发生非小细胞肺癌的保护性因素。