miR-200c-3p靶向CCNE2抑制肾母细胞瘤细胞增殖

目的 预测和验证miR-200c-3p的靶基因并探讨其对肾母细胞瘤增殖的抑制作用。方法 应用生物信息学软件对miR-200c-3p在肾母细胞瘤中的靶基因进行预测,建立SK-NEP-1及G401的miR-200c-3p过表达及抑制表达的稳定细胞系。实验设未转染组（Blank）、模拟物阴性对照组（mimic NC）、miR-200c-3p模拟物组（miR-200c-3p mimic）、抑制剂阴性对照组（inhibitor NC）及miR-200c-3p抑制剂组（miR-200c-3p inhibitor）。采用 RT-PCR及Western blot方法检测CCNE2在SK-NEP-1及G401不同组中的表达水平,荧光素酶报告基因检测miR-200c-3p 和CCNE2的靶向关系,细胞计数盒（CCK-8）和软琼脂克隆形成实验检测miR-200c-3p对SK-NEP-1及G401细胞增殖的抑制作用。结果 生物信息学方法预测CCNE2为miR-200c-3p的靶基因之一。RT-PCR实验结果示肾母细胞瘤细胞中miR-200c-3p模拟物组的CCNE2的表达水平低于模拟物阴性对照组（P<0.05）;荧光素酶报告基因检测证实CCNE2是miR-200c-3p的靶基因（P<0.01）。Western blot示在肾母细胞瘤细胞中miR-200c-3p模拟物组的CCNE2蛋白的表达水平低于模拟物阴性对照组（P<0.05）;CCK-8和软琼脂克隆形成实验证实miR-200c-3p对肾母细胞瘤细胞的增殖能力有明显抑制作用（P<0.01）;而miR-200c-3p抑制剂组结果相反。结论 miR-200c-3p通过靶基因 CCNE2抑制肾母细胞瘤细胞的增殖。     

面向B超图像分割的动态权重因子水平集方法

目的研究和改进水平集方法,实现B超图像中病灶区域的准确快速分割。方法分析已有水平集方法在B超图像处理中
的局限,基于区域水平集的优点,将信息论中的熵引入图像处理,定义动态权重因子,准确反映局部灰度阶梯变化状况,定量度
量轮廓线像素点分别受到趋向目标、背景区域的两种作用力的动态权重,将其融合到区域水平集中,迭代引导曲线形变和位
移。由于B超图像病灶分割属于指定区域的局部分割,所以将计算约束到局部范围,从而明显降低运算代价。结果动态权重
因子水平集方法能够较好分割B超图像中的病灶区域,与几种主流水平集方法相比,本文方法精度更高,时间复杂度更小。结
论动态权重因子方法能够更合理准确地判断病灶边界像素点,局部计算策略有效地提高了分割效率。
     

基于体视学参数的肺癌组织芯片可靠性探讨

目的比较石蜡组织芯片和相应常规组织切片正常成人肺泡Ⅱ型上皮细胞、人胚胎肺泡上皮细胞和肺癌细胞的细胞核体视学参数,探讨组织芯片代表性的可靠程度。方法收集肺癌手术切除标本：鳞癌52例、腺癌38例、大细胞癌10例、小细胞癌4例、正常肺组织20例和胚胎肺组织20例。采用组织微阵列技术构建760点阵石蜡组织芯片。用Image-Pro图像分析软件测试胞核及细胞,按体视学公式计算以细胞为参照空间时肺癌细胞核的体积密度（Vvn）、表面积密度（Svn）、表面积与体积比（Rsv,n）、核浆比（Rnp）、平均自由程（λn）。结果石蜡组织芯片和相应常规组织切片细胞核的体视学参数基本类同,两者比较差异无显著性,P值均〉0.05。结论组织芯片和相应常规组织切片细胞核的体视学参数基本类同,组织芯片具有较好的可靠性。     

肺及肺癌组织芯片PBK/TOPK蛋白表达:检测的可靠性

背景:组织芯片技术可高通量检测组织中的生物分子.但是组织芯片所用的组织很小,直径仅0.6 mm,且肿瘤细胞具有异质性,所以组织芯片检测结果是否可靠尚不清楚.目的:比较石蜡组织芯片和对应组织常规石蜡切片PBK/TOPK蛋白在正常成人肺泡Ⅱ型上皮细胞、人胚胎肺泡上皮细胞、肺癌原发灶和相应的淋巴结转移灶的表达差异,探讨组织芯片检测PBK/TOPK蛋白表达的可靠性.方法:采用组织微阵列技术按照正常成人肺组织,胚胎肺组织,肺鳞癌原发灶及其相应淋巴结转移癌,肺腺癌原发灶及其相应淋巴结转移癌,肺小细胞癌原发灶及其相应淋巴结转移癌,肺大细胞癌原发灶及其相应淋巴结转移癌的顺序依次构建包含760点阵的石蜡组织芯片.应用免疫组化SP法,检测石蜡组织芯片和对应组织常规石蜡切片PBK/TOPK蛋白的表达.应用Leica Q500MC图像分析系统分别对石蜡组织芯片和常规石蜡切片上PBK/TOPK蛋白表达的阳性单位和阳性表达率进行定量测试.结果与结论:组织芯片和对应常规切片相应细胞中PBK/TOPK的阳性强度及阳性表达率基本相同,相对偏差不足0.6%,两者比较差异无显著性意义.结果说明石蜡组织芯片和常规组织切片检测PBK/TOPK蛋白表达结果高度一致;应用组织芯片检测肺癌、胚胎肺及正常肺组织中PBK/TOPK蛋白的表达结果可靠.     

基于虚拟切片的体视学模型仿真与分析

目的 建立虚拟组织切片的体视学模型,并以软件系统作为实现手段,模拟虚拟切片过程,为体视学的理论提供一个客观实证工具.方法 以数学手段描述组织切片可能出现的二维形态特征,模拟切片过程,将所得到的数据进行数值分析,与经验公式进行了拟合比较.结果 基于此算法可实现虚拟随机模拟切片,经拟合优度检验数据分布的均匀性检验通过率达94.5％以上.独立性检验通过率达92％以上.且均符合正态性要求.经线性和曲线拟合能够得到与经验公式相一致的体视学参数相关关系.结论 本文所述算法具有可行性,可以反映数值模拟结果的正确性.     

人支气管永生化HBE细胞形态计量学分析

目的:探索人支气管永生化HBE细胞超微结构的三维形态结构特征并与人肺腺癌A549细胞进行比较分析。方法:按常规方法制备HBE细胞与A549细胞的透射电镜样品。用Image-ProPlus图像分析软件设计网格测试系统,应用体视学原理和方法,分别测算HBE细胞和A549细胞核的体视学参数包括核体密度(VVn)、核表面积密度(SVn)、核表面积与体积比(RSVn)、核数密度(NVn)、核平均体积(vn)、核平均表面积(sn)和核浆比(Rnp);核仁的体视学参数包括核仁体密度(VVnu)、核仁表面积密度(SVnu)、核仁表面积与体积比(RSVnu)、核仁数密度(NVnu)、核仁平均体积(vnu)、核仁平均表面积(snu)等共13种体视学参数的数值。结果:①HBE细胞核平均体积(vn)和核平均表面积(sn)分别为206.74μm3和184.75μm2,明显小于A549细胞;②HBE细胞核及核仁的表面积与体积比(RSVn)分别为0.9192和2.3536,均大于A549细胞;③HBE细胞核浆比为0.3829,小于A549细胞。结论:HBE细胞核及核仁的形态与肺腺癌A549细胞有差异,其核和核仁的表面积、体积及形态大小均小于A549细胞。     

A549细胞光镜及电镜制样收缩系数测试

目的测试A549细胞经过光镜及电镜制样处理后的收缩系数,为定量研究A549细胞及其超微结构奠定基础。方法对A549细胞分别进行涂片HE染色、涂片巴氏染色、石蜡包埋3μm切片HE染色及透射电镜制样半薄（3μm）切片HE染色处理。通过光学显微镜获取细胞图像,用Image-Pro Plus图像分析软件测试细胞的平均直径,然后以A549培养之等渗重悬细胞之平均直径为基准计算细胞的收缩系数。结果A549培养之等渗重悬细胞的平均直径为14.93μm。经涂片HE染色、涂片巴氏染色、石蜡切片HE染色和透射电镜制样半薄（3μm）切片HE染色处理后的A549细胞的平均直径分别9.88μm、9.98μm、10.29μm和10.59μm。以等渗重悬细胞之平均直径为基准,经涂片HE染色、涂片巴氏染色、石蜡切片HE染色和透射电镜半薄切片HE染色之细胞的收缩系数分别为0.66、0.67、0.69和0.71。结论经涂片HE染色、涂片巴氏染色、石蜡切片HE染色和透射电镜制样半薄切片HE染色处理后,A549细胞收缩明显,直径约收缩了1/3。因此,在实际测试中,欲知细胞收缩前之结构大小,须据细胞收缩程度进行必要的校正。     

上皮-间质转化的信号转导机制

上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)出现在各种生理和病理情况下,在胚胎发生与器官发育、肿瘤形成和转移以及纤维化过程中均有表现。TGF-β是EMT的一个重要诱导因素,其通过Smad和非Smad依赖通路对EMT的发生进行调节,对肿瘤的形成、转移和扩散起到了重要的作用。本文综述了近年来EMT信号转导机制的研究进展。     

肺及肺癌组织芯片PBK/TOPK蛋白表达：检测的可靠性

背景：组织芯片技术可高通量检测组织中的生物分子。但是组织芯片所用的组织很小,直径仅0.6 mm,且肿瘤细胞具有异质性,所以组织芯片检测结果是否可靠尚不清楚。 目的：比较石蜡组织芯片和对应组织常规石蜡切片PBK/TOPK 蛋白在正常成人肺泡Ⅱ型上皮细胞、人胚胎肺泡上皮细胞、肺癌原发灶和相应的淋巴结转移灶的表达差异,探讨组织芯片检测PBK/TOPK蛋白表达的可靠性。 方法：采用组织微阵列技术按照正常成人肺组织,胚胎肺组织,肺鳞癌原发灶及其相应淋巴结转移癌,肺腺癌原发灶及其相应淋巴结转移癌,肺小细胞癌原发灶及其相应淋巴结转移癌,肺大细胞癌原发灶及其相应淋巴结转移癌的顺序依次构建包含760点阵的石蜡组织芯片。应用免疫组化SP法,检测石蜡组织芯片和对应组织常规石蜡切片PBK/TOPK蛋白的表达。应用Leica Q500MC图像分析系统分别对石蜡组织芯片和常规石蜡切片上PBK/TOPK蛋白表达的阳性单位和阳性表达率进行定量测试。 结果与结论：组织芯片和对应常规切片相应细胞中PBK/TOPK 的阳性强度及阳性表达率基本相同,相对偏差不足0.6%,两者比较差异无显著性意义。结果说明石蜡组织芯片和常规组织切片检测PBK/TOPK蛋白表达结果高度一致;应用组织芯片检测肺癌、胚胎肺及正常肺组织中PBK/TOPK蛋白的表达结果可靠。 关键词：肺癌;组织芯片;PBK/TOPK;免疫组化;可靠性