沉默VEGF对人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R侵袭迁移的影响

目的 探讨沉默血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）对人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R迁移和侵袭能力的影响。方法 制备含VEGF-shRNA的慢病毒载体（VEGF-LV1、VEGF-LV2、VEGF-LV3）和对照shRNA重组慢病毒（VEGF-NC）,并转染人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R,建立稳定沉默VEGF细胞（CNE-LV1、CNE-LV2和CNE-LV3）和阴性对照细胞（CNE-NC）。采用RT-qPCR和Western blot法检测细胞转染效果,划痕实验和Transwell小室实验检测VEGF沉默后细胞的迁移和侵袭能力。结果 成功构建VEGF-shRNA重组慢病毒并建立了稳定沉默VEGF细胞CNE-LV3。划痕实验和Transwell小室迁移实验显示,与空白对照组和CNE-NC组相比,CNE-LV3组细胞迁移率明显降低［（50.17±1.76）% vs （37.97±1.56）%,P＝0.001;（50.63±1.52）% vs （37.97±1.56）%,P＝0.001］,穿膜细胞数亦明显下降［（95.3±3.8） 个 vs （41.3±1.5） 个,P＜0.001;（94.3±4.0） 个 vs （41.3±1.5） 个,P＜0.001］;Transwell小室侵袭实验结果亦显示,CNE-LV3组细胞穿膜细胞数较空白对照组和CNE-NC组明显下降［（46.3±2.1） 个 vs（105.3±1.5） 个,P＜1.001;（46.3±2.1） 个 vs （93.3±2.5） 个,P＜0.001］。结论 沉默VEGF表达可抑制人鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R的迁移和侵袭能力。     

MDT模式下TBL+CBL+PBL联合教学法在肿瘤学临床教学中的应用

目的 探讨多学科联合团队(MDT)模式下小组合作学习法(TBL)+以案例为基础的教学法(CBL)+以问题为基础的学习法(PBL)联合教学法在肿瘤学临床教学中的应用效果。方法 选取在肿瘤科轮转的临床医学本科实习生68名,将其随机分为观察组和对照组各34名。对照组采用传统教学模式,观察组采用MDT模式下TBL+CBL+PBL联合教学法。教学结束后,比较两组学生的出科理论知识考核评分、临床技能考核评分、病历书写考核评分、教学效果认同情况和教学满意度。结果 观察组学生的出科理论知识考核评分、临床技能考核评分、病历书写考核评分及综合评分均高于对照组(均P<0.05)。观察组学生对提高理论知识掌握能力、提高临床技能、有效培养临床思维能力、提高团队协作能力、提高解决临床问题能力、增强临床学习兴趣6个方面的教学效果的认同率均高于对照组(均P<0.05)。观察组学生的教学总满意度为94.12%,高于对照组的67.65%(P<0.05)。结论 MDT模式下TBL+CBL+PBL联合教学法在临床医学本科生的肿瘤学临床教学中具有良好的应用效果。     

c-jun基因沉默对放射抗拒鼻咽癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响

目的 探讨c-jun基因沉默对人鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响。方法 用携带shRAN慢病毒载体感染CNE-2R细胞以沉默c-jun基因,构建c-jun-shRNA-CNE-2R细胞组（c-jun-shRNA组）以及阴性对照NC-shRNA-CNE-2R细胞组（NC组）,以CNE-2R细胞为空白对照组,采用Western blot 检测3组细胞中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白的表达水平。构建裸鼠模型,观察3组细胞裸鼠皮下种植瘤生长曲线及体积;采用免疫组化法检测移植瘤组织中VEGF、CD34的表达,并检测组织内微血管密度（microvessel density,MVD）。结果 Western blot 结果显示,c-jun-shRNA组细胞VEGF蛋白表达较NC组及空白对照组明显下调（P<0.05）。裸鼠模型实验中,c-jun-shRNA组移植瘤体积为（720.85±72.10） mm³,质量为（0.42±0.04）g,MVD为11.69±3.30;NC组移植瘤体积为（1 196.81±90.69） mm³,质量为（0.80±0.08）g,MVD为32.56±7.33;空白对照组移植瘤体积为（1 203.76±100.42） mm³,质量为（0.83±0.05）g,MVD为35.45±4.87;c-jun-shRNA组种植瘤体积、质量、MVD较NC组和空白对照组低（P<0.05）。免疫组化检测结果显示,移植瘤组织中VEGF蛋白表达c-jun-shRNA组呈弱阳性,NC组及空白对照组组均呈强阳性。结论 c- jun基因沉默可抑制放射抗拒性鼻咽癌移植瘤生长及血管生成。     

PARP-1对鼻咽癌CNE-2细胞迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1［poly（ADP-ribose）polymerase-1,PARP-1］对鼻咽癌CNE-2细胞迁移、侵袭能力的影响。方法 将鼻咽癌CNE-2细胞分为空白对照组（CNE-2组）、转染阴性病毒对照组（NC组）、转染稳定沉默PARP-1基因组（LV组）和未照射组（CNE-2-0 Gy组）,4组细胞在照射前划痕、前3组给予10 Gy剂量照射,48 h后计算细胞迁移率、穿入下室细胞数,采用Western blot法检测PARP-1蛋白及Vimentin蛋白的表达。结果 照射后48 h,CNE-2组、NC组、LV组和CNE-2-0 Gy组的细胞迁移率分别为（79.37±5.75）%、（70.13±6.56）%、（20.83±10.91）%和（27.13±7.50）%;迁移穿入下室的细胞数分别为（60.00±2.66）个、（52.33±9.71）个、（13.67±3.51）个和（23.33±4.04）个,侵袭入下室细胞数分别为（33.00±2.00）个、（29.00±1.72）个、（6.67±2.52）个和（9.67±1.16）个;PARP-1蛋白相对表达量分别为1.00±0.00、1.02±0.04、0.47±0.05和0.47±0.06,Vimentin蛋白相对表达量分别为1.00±0.00、0.99±0.04、0.24±0.02及0.27±0.03;LV组细胞迁移率较CNE-2组及NC组降低,迁移及侵袭入下室的细胞数较少,PARP-1及Vimentin蛋白相对表达量下调,差异均有统计学意义（P<0.05）;LV组与CNE-2-0 Gy组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 PARP-1照射后激活可促进鼻咽癌CNE-2细胞迁移、侵袭。