不同红色荧光蛋白在酵母细胞中的表达效果分析

目的 比较不同红色荧光蛋白基因在酵母细胞中的表达效果。 方法 利用分子生物学方法,构建了4种红色荧光蛋白(DsRed)基因酵母报告载体,分别是pGPD-DsRed、pGPD-DsRed-express-2、pGPD-yDsRed和pGPD-yDsRed-express-2,后两者含有酵母细胞偏好性的密码子,将4种DsRed酵母报告载体转入W303-1A酵母细胞,利用倒置荧光显微镜观察DsRed的表达,并用多功能酶标仪测酵母细胞的发光强度。结果 各红色荧光发光强度明显不同,其中DsRed-express-2发光最强,其次是yDsRed-express-2,yDsRed发光强度最弱。 结论 在酵母细胞中红色荧光蛋白的强度与密码子偏好性无关;定量红色荧光蛋白表达强度最好选用DsRed-express-2报告基因。     

乳腺癌发病率与动物性食物的相关性及死亡队列研究

目的 研究乳腺癌发病率与食物的相关性。为开展其有关病因、发病机制和预防提供线索。方法 用日本山梨医科大学环境卫生保健教研室提供的肿瘤发病数据库(IARC，1988～1992)和食物供应数据库(FAO，1961～1990)，对世界42个国家乳腺癌的发病率与有关食物进行了相关分析。用于乳腺癌出生死亡队列研究的年龄别死亡人数及人口数，来自“日本死亡统计数据库”，由日本文部省出版发行。结果 在所分析的36种食物中，动物性食物消费量与55岁以上乳腺癌年龄标化发病率关系最密切，其中动物性脂肪(对数，r=0．651)、牛奶(r=0．618)和肉类(r=0．573)的相关系数较大。逐步多元回归发现，牛奶对乳腺癌发病率的影响最大，复相关系数(r)为0．579(P=0．015)。死亡对列研究发现，出生越晚，死亡率越高，其中1945年前后出生的人群死亡率最高。结论 动物性食物的摄入量与乳腺癌发病率关系较密切，应进一步开展有关食物致病病因和发病机制的研究。     

镉对大鼠睾丸中某些酶活性及组织形态的影响

镉是环境中常见的有毒重金属之一,可引起多器官系统毒性,并且具有生殖系统（睾丸）毒性。我们研究了镉染毒后,大鼠睾丸组织中某些酶活性指标及组织形态的变化,探讨镉对生殖系统的毒性及其机制。材料与方法１．实验动物：成年雄性ＳＤ大鼠,由扬州大学动物实验中心提供...     

牛奶中雌激素类化合物对前列腺和睾丸的影响

目的 :研究牛奶中雌激素样物质对男性生殖系统的影响。　方法 :利用世界五大洲肿瘤发病数据库和联合国粮农组织 (FAO)数据库 ,对 42个国家 (地区 )前列腺癌和睾丸癌发病率 ( 1988～ 1992 )与相应的食物消费量资料 ( 1961～ 1990 )进行相关分析 ;根据美国食品药品管理局 (FDA)标准 ,选用Wistar大鼠 ,进行两代繁殖实验 ,主要研究牛奶中雌激素化合物对生殖器官的影响。　结果 :在所分析的食物中 ,前列腺癌与牛奶消费量的关系最密切(r =0 .711) ,其次是肉类与咖啡 ;奶酪与 2 0～ 3 9岁的睾丸癌标化发病率关系最密切 (r =0 .80 4) ,其次是动物性脂肪和牛奶 ;动物实验研究发现 ,大鼠经长期、大量地饮用牛奶后 ,未发现生殖器官明显减轻的现象。　结论 :牛奶中雌激素样物质对男性生殖健康的影响还需进一步研究     

两种维生素C测定方法的比较

目的 :研究 2 ,6 -二氯酚靛酚法与 2 ,4 -二硝基苯肼法测定蔬菜和水果及尿液中抗坏血酸含量之间的关系。方法 :对蔬菜和水果样品 ,及扬州医学院大学生和市某幼儿园儿童 3h尿总量 ,收集前受试者排空小便后 ,口服 5 0 0 m g维生素C片剂 ,饮水 4 0 0 ml。分别用上述两种方法进行测定样品中维生素 C。结果 :在冬瓜和黄瓜中 ,两种方法所测维生素 C结果差异无统计学意义 ,而在黄豆芽和绿豆芽中 ,两种方法测定结果差异有统计学意义。对于尿样中的维生素 C,2 ,6 -二氯酚靛酚法所测定结果明显高于 2 ,4 -二硝基苯肼法 ,两者有明显的相关关系 ,其回归方程为 Y=- 14 .5 7 0 .5 2 9X。结论 :当用 2 ,6 -二氯酚靛酚法测定绿豆和黄豆芽中的维生素 C时 ,其误差较大。但对于尿中维生素 C,如果使用 2 ,6 -二氯酚靛酚法 ,则须用回归方程进行推断     

男性直肠癌与植物性食物的相关性分析

目的 探讨男性直肠癌发病率与植物性食物的相关性，为直肠癌的预防提供依据。方法 从五大洲肿瘤发病率数据库和联合国粮农组织收集42个国家(地区)直肠癌发病率和食物相关性的资料，用SPSS8．0软件进行相关分析。结果 在所分析的食物中，豆类食物的消费量与男性直肠癌发病率呈明显的负相关，谷类、油作物、植物性调味品的消费量与直肠癌虽呈一定负相关，但无统计学意义；可可豆、咖啡、酒类饮料的消费量与直肠癌呈明显的正相关。结论 植物性食物中豆类食物可能对直肠癌发生的具有保护作用，而可可豆、咖啡、酒类饮料可能是直肠癌发生的危险因子。     

RNR2调控的重组绿色荧光蛋白酵母细胞的构建及其对化学诱变原的高通量筛选

目的建立RNR2调控的酵母增强绿色荧光蛋白(yEGFP)发光酵母细胞,高通量筛选化学诱变原。方法用PCR方法从酵母(W303-1A)基因组扩增RNR2启动子,经酶切后,用T4连接酶与线性化的含酵母嗜好遗传密码子的yEGFP报告载体相连,连接产物转化子质粒经酶切和测序鉴定,构建RNR2调控的yEGFP酵母报告载体。用醋酸锂方法将其转化于W303-1A酵母细胞,从而构建成RNR2调控的yEGFP发光酵母细胞(W303-1A/RNR2-yEGFP)。用甲磺酸甲酯0～400mg·L-1分别作用于该发光酵母细胞0,4,8,12,16和20h后,于倒置荧光显微镜下观察荧光,用多功能酶标仪检测其荧光发光强度,选择最佳诱导时间;用不同浓度的DNA烷化剂、DNA断裂剂和DNA合成酶抑制剂作用于该重组细胞16h,检测其荧光发光强度,考察W303-1A/RNR2-yEGFP细胞对各种化学诱变原的敏感性。结果经测序确定W303-1A/RNR2-yEGFP构建成功。选择16h为最佳诱导时间;各种化学诱变原与W303-1A/RNR2-yEGFP细胞作用16h后,与DNA发生结合的化合物中放线菌素D和溴乙锭诱导的发光度与对照组无明显差别,发光倍数<1.5;与DNA发生烷基化的化合物中,甲磺酸甲脂200mg·L-1诱导的细胞发光度最强,发光倍数为5.21,瘤可宁200μg·L-1诱导的发光倍数为1.9,而丝裂霉素C的发光度与对照组无明显差别。在使DNA发生断裂的诱变原中,顺铂250mg·L-1诱导的细胞最高发光倍数为3.7,其次4-硝基-N-氧化喹啉3.1mg·L-1、博来霉素12.5mg·L-1和福来霉素200mg·L-1,最高诱导倍数分别为2.35,2.26和2.53;在抑制DNA合成酶或拓扑异构酶的诱变原中,5-氟尿嘧啶500μg·L-1、羟基脲570.45mg·L-1和喜树碱30mg·L-1所诱导的细胞最大发光倍数分别为2.36,2.65和2.53;而非基因毒性化合物秋水仙碱、刀豆氨酸和四环素诱导的发光度与对照无明显差别。结论该重组发光酵母细胞可用于对多数造成DNA断裂或合成阻断的化学诱变原筛选,具有快速、方便和高通量等特点。     

基于报告基因的化学预防剂细胞筛选模型的建立

目的:建立基于报告基因和抗氧化反应元件(anti-oxidative response element,ARE)的药物筛选细胞模型,为化学预防剂的筛选奠定基础.方法:构建重组报告基因表达载体p4ARE-TK-GFP/neo,并将其转入HepG_2细胞中,利用已知化学预防剂检测该细胞模型,并观察白藜芦醇、原儿茶醛、熊果酸和齐墩果酸4种中药单体不同浓度(0,12.5,25,50,100,200 μmol·L~(-1))对GFP报告基因表达活性的影响.结果:表达载体p4ARE-TK-GFP/neo中GFP的表达受ARE的调控,其表达水平高于对照载体且在一定范围内与化学预防剂的浓度呈剂量效应关系.4种中药单体中白藜芦醇有较好的诱导效果.结论:利用此模型通过测定GFP报告基因的诱导表达水平可筛选得到新结构的化学预防剂.     

牛奶中雌性激素样物质对雄性大鼠生殖腺的影响

自丹麦的Carlsen等[1] 报道人类精子计数下降以来 ,世界各国对人类男性生殖健康问题给予了极大的关注。有研究报道 ,近 5 0年来 ,人类的精子数量减少了 5 0 %。与此同时 ,世界各国前列腺和睾丸癌发病率也在不断升高 ,特别是以发达国家为重[2 ] 。究竟是何种原因造成了男性生殖健康日趋恶化 ?有关专家认为是由于环境雌激素在起作用。所谓环境雌激素 ,是指环境中存在的一些能够像雌激素一样影响人体内分泌功能的物质 ,又称为环境内分泌干扰剂 (environmentalendocrine eisruptingchemicals ,简称EDCs) ,它干扰生物为保持体内平衡和调节发育…