平衡透析法测定具栖冬青苷和毛冬青酸的大鼠血浆蛋白结合率

目的建立测定具栖冬青苷、毛冬青酸血药质量浓度的方法,并测定其大鼠体外血浆蛋白结合率。方法采用高效液相色谱法和平衡透析法测定具栖冬青苷、毛冬青酸在大鼠体外血浆中的血浆蛋白结合率。结果低、中、高3种质量浓度,具栖冬青苷在大鼠体外血浆中的蛋白结合率分别为39.72%±2.68%,52.05%±3.35%和52.32%±0.76%;毛冬青酸在大鼠体外血浆中的蛋白结合率分别为55.18%±3.66%,60.79%±2.20%和47.00%±1.59%。结论建立HPLC法对具栖冬青苷和毛冬青酸进行分离,方法简便。体外实验,具栖冬青苷和毛冬青酸与大鼠血浆属中等结合型药物,且蛋白结合率与药物质量浓度无关。     

白香丹胶囊中3种主要成分人血浆蛋白结合率的测定

目的:建立同时测定白香丹胶囊中芍药苷、丹皮酚和α-香附酮在人血浆中含量的方法并测定其体外血浆蛋白结合率。方法:采用平衡透析法计算血浆蛋白结合率。样品经乙酸乙酯萃取,采用LC-MS/MS检测,Phenomenex Luna C18色谱柱(2.0 mm×100 mm,3μm),流动相甲醇-0.1%甲酸水(含2 mmol·L~(-1)甲酸铵)(80∶20),流速0.2 m L·min~(-1)。离子化模式为正离子,定量模式多反应监测模式,毛细管电压4 kV,干燥气温度400℃。检测对象芍药苷m/z 503.2~503.2,裂解电压200 V,碰撞电压0 V;丹皮酚m/z 167.1~120.9,裂解电压100 V,碰撞电压20 V;α-香附酮m/z 218.9~111.0,裂解电压100 V,碰撞电压20 V;毛蕊异黄酮(内标)m/z 285.1~213.1,裂解电压170 V,碰撞电压40 V。结果:白香丹胶囊在低、中、高(56.2,112.5,168.8 mg·L~(-1))质量浓度下,芍药苷的血浆蛋白结合率分别为(24.82±3.91)%,(20.88±2.69)%,(22.40±3.33)%,丹皮酚分别为(88.62±1.68)%,(86.16±2.36)%,(88.73±0.80)%,α-香附酮依次为(80.69±1.12)%,(78.10±2.28)%,(72.57±0.30)%。结论:白香丹胶囊中主要成分芍药苷、丹皮酚及α-香附酮与人血浆蛋白结合率大小排序为丹皮酚α-香附酮芍药苷。     

LC-MS法测定清热养心颗粒中的5种成分

目的采用LC-MS法同时测定清热养心颗粒中的绿原酸、咖啡酸、甘草次酸、氧化苦参碱和薯蓣皂苷元。方法色谱柱为Agilent Zorbax SB C18柱(100 mm×3.0 mm,3.5μm),流动相为水-甲醇(10∶90),柱温40℃,流速0.2 m L·min-1,进样量10μL,离子化方式为电喷雾(ESI),选择性离子检测(SIR),正负离子同时检测,检测电压3.5 k V,离子源温度120℃,脱溶剂温度450℃,脱溶剂气体为N2,体积流量480 L·h-1。结果绿原酸、咖啡酸、甘草次酸、薯蓣皂苷元和氧化苦参碱的线性范围分别为11.60~2.97×103(r=0.9986)、3.05~780(r=0.9958)、1.10~282(r=0.9991)、3.63~930(r=0.9931),0.47~120μg·L-1(r=0.9977)。结论所用方法专属性强、快速灵敏、可用于清热养心颗粒中绿原酸、咖啡酸、甘草次酸、氧化苦参碱、薯蓣苷元等成分的含量测定。     

LC-MS/MS测定大鼠血浆中咖啡酸、绿原酸及其药代动力学研究

该研究建立大鼠血浆中咖啡酸、绿原酸的LC-MS/MS测定方法,并用于大鼠体内的药代动力学研究。6只SD大鼠,单剂量静脉注射(4 mL·kg^-1)灯盏细辛注射液,以替硝唑为内标,用LC-MS/MS测定给药后血浆中的药物浓度,并用DAS 1.0软件计算药动学参数。咖啡酸、绿原酸的线性范围分别为2~128 μg·L^-1(r = 0.998 1),3~384 μg·L^-1(r = 0.998 7)。方法学考察均符合要求。日内、日间变异系数(RSD)均小于10%,精密度和准确度等均符合生物样品分析的要求。大鼠体中咖啡酸药代动力学参数:t_1/2β为(130.91±38.77) min,AUC_0-t为(4.89±0.96) mg·min·L^-1,CL为(0.12±0.02) L·min^-1·kg^-1;绿原酸药代动力学参数:t_1/2β为(49.38±8.85) min,AUC_0-t为(9.54±0.95) mg·min·L^-1,CL为(0.09±0.003) L·min^-1·kg^-1。该研究建立的LC-MS/MS分析方法准确灵敏,适于咖啡酸、绿原酸的药代动力学研究。     

HPLC同时测定白香丹胶囊中的3种成分

目的 采用HPLC法同时测定白香丹胶囊中芍药苷、丹皮酚和α-香附酮的含量.方法 采用Lichrospher C18色谱柱(250 mm× 4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,检测波长230(芍药苷)、274(丹皮酚)、254(α-香附酮)nm.结果 芍药苷、丹皮酚和α-香附酮的线性范围分别为7.740 ～123.8、3.776～60.42、0.6881 ～11.01 μg·mL-1,r均为0.9999;加样回收率分别为99.77％、100.76％、99.79％(n=6).结论 所用方法灵敏简便、准确度高,适用于同时测定白香丹胶囊中芍药苷、丹皮酚和α-香附酮的含量.     

LC-MS/MS法同时测定CUMS大鼠血浆中3种单胺类神经递质

目的建立测定大鼠血浆中五羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)的LC-MS/MS方法,观察慢性不可预见性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)抑郁大鼠血浆单胺类神经递质DA、5-HT、NE的变化情况。方法♂SD大鼠22只,分为对照组(n=10)和模型组(n=12),模型组每天给予9种慢性不可预见性温和刺激因子,造模21 d后,分别于造模前后进行行为学测定及眼眶采血;采用苯甲酰氯作为柱前衍生化试剂,将3种待测物及内标衍生化后进入LC-MS/MS检测,测定造模前后血浆中5-HT、NE、DA 3种神经递质浓度。结果造模21d后,与对照组相比,模型组大鼠体重明显降低(P<0.05),水平得分、垂直得分均明显降低(P<0.01),同时糖水消耗量明显降低(P<0.01)。血浆中5-HT、NE、DA的浓度在1.47~752、1.75~898、2.05~1053μg·L-1范围内线性关系良好,最低定量限分别为1.47、1.75、2.05μg·L-1,以质控样品计算,在各浓度水平下,此法的回收率均大于70%,日内和日间精密度小于15%,符合生物样品分析要求。造模21 d后,模型组血浆中5-HT、NE、DA的浓度分别为(3.99±1.21)、(6.24±1.94)、(6.07±1.98)μg·L-1,与对照组相比均明显降低(P<0.01)。结论 CUMS造模成功后,血浆中的3种神经递质分别呈下降趋势。     

HPLC法测定毛冬青胶囊中具栖冬青苷和毛冬青酸的含量

目的：建立HPLC法同时测定毛冬青胶囊中具栖冬青苷和毛冬青酸含量的方法,并对3个批次毛冬青胶囊中上述两种化合物进行定量分析。方法：Zorbax SB-C18（4.6 mm×150mm,5μm）色谱柱,流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱,检测波长215 nm,柱温40℃,流速1.0 mL·min-1,进样量20μL。结果：具栖冬青苷和毛冬青酸的线性范围分别为1.22-521.1μg·mL-1（r=0.9995）、1.23-289.6μg·mL-1（r=0.9991）,加样回收率分别为99.24%（RSD=0.68%）、99.53%（RSD=0.85%）。结论：该方法简便、准确、重复性好,可为毛冬青胶囊提供质量控制依据。     

慢性不可预见性温和应激模型大鼠的肝脏药物代谢酶活性变化研究

采用鸡尾酒(cocktail)探针药物法研究慢性不可预见性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)造成的抑郁状态对大鼠体内6种CYP450亚酶活性的影响。根据Katz法建立CUMS大鼠抑郁模型;分别选用甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、茶碱、咪达唑仑、奥美拉唑及右美沙芬作为大鼠CYP2C6、CYP2E1、CYP1A2、CYP3A2、CYP2D1、CYP2D2的探针底物,采用液质联用法(LC-MS/MS)测定对照组与模型组大鼠体内6种混合探针的血药浓度,计算药动学参数。结果表明,茶碱和氯唑沙宗代谢显著加快(P<0.01),甲苯磺丁脲、右美沙芬、奥美拉唑、咪达唑仑的代谢无显著差异。结果说明,慢性不可预见性温和应激造成的抑郁状态对CYP1A2有强诱导、对CYP2E1有中强诱导作用。     

黄葵胶囊中3种成分与人血浆蛋白结合率的测定

目的 研究黄葵胶囊中芦丁、金丝桃苷和异槲皮苷与人血浆蛋白的结合率.方法 采用平衡透析法测定芦丁、金丝桃苷和异槲皮苷与人血浆蛋白的结合率,用HPLC测定透析内、外液中3种成分的质量浓度,计算血浆蛋白结合率.结果 芦丁、金丝桃和异槲皮苷的线性关系、精密度、提取回收率和稳定性均符合方法学要求;黄葵胶囊低、中、高(1、2、4 mg·mL-1)浓度中,芦丁与人血浆蛋白的结合率分别为58.58％±1.40％、61.83％±2.19％、57.17％±5.48％,金丝桃苷的为79.90％±0.22％、76.96％±0.54％、71.61％±1.76％,异槲皮苷的为80.69％±0.23％、78.10％±0.60％、72.57％±1.86％.结论 黄葵胶囊中3种成分与人血浆具有中等强度的蛋白结合率.