养阴清肺方调控放射性肺炎大鼠外周血T细胞Notch1,Jagged1信号通路

目的:观察养阴清肺方调控放射性肺炎大鼠T细胞Notch信号受体1(Notch1)及Notch信号配体1(Jagged1)表达规律的影响,探讨其对放射性肺炎防治作用的机制。方法:将40只雌雄各半的SD大鼠以随机数字表法随机分为正常组、模型组、激素组、联合用药组,直线加速器对除正常组外的3组大鼠全胸单次照射,剂量为16 Gy。照射后第1天起各组予相应的药物灌胃。照射后4周,处死大鼠,取全肺称重计算肺系数,取大鼠肺组织进行苏木素-伊红(HE)染色,马松(Masson)染色,Notch1免疫组化染色,取全血标本进行免疫磁珠分选提取T细胞及流式细胞术检测Notch1比率,用提取的T细胞进行实时荧光定量PCR(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)测定Notch1,Jagged1 mRNA及蛋白表达,观察各组大鼠在放射后4周肺系数改变及Notch1,Jagged1表达的变化。结果:放射后4周,各组肺系数差异明显,正常组与联合用药组肺系数最为接近;与模型组比较,养阴清肺方联合泼尼松龙可明显降低Notch1 T细胞所占比例(P0.05),可明显降低Notch1,Jagged1mRNA表达(P0.05),明显下调Notch1,Jagged1相关蛋白表达(P0.05)。结论:养阴清肺方能明显下调放射性肺炎大鼠Notch1,Jagged1表达,可能是防治放射性肺炎发生发展的机制之一。     

养胃抗瘤冲剂及其拆方对人胃癌细胞系MGC-803及BGC-823侵袭重组基底膜的作用及作用途径

目的：观察人胃癌细胞系MGC-803，BGC-823对重组基底膜的侵袭作用，分析养胃抗瘤冲剂对其侵袭作用的影响及可能作用途径。方法：实验于2001-05／2001-10在中国中医研究院广安门医院肿瘤细胞生物学实验室完成。选取日本健康雌性大耳白兔21只，按随机数字表法分为7组，即养胃抗瘤冲剂组及拆方（益气方、活血方、解毒方、益气活血方、益气解毒方）组、空白血清组，制备含药血清。采用Transwell细胞培养小室建立人肿瘤细胞系体外侵袭模型，动态观察人胃癌细胞系MGC-803，BGC-823对重组基底膜的侵袭作用以及中药复方养胃抗瘤冲剂（由生黄芪、人参、白花蛇舌草、草河车、三七、苏木等组成，每克含生药3．22g，由中国中医研究院广安门医院制剂室提供）及拆方的含药血清、化疗药顺氯氨铂对胃癌细胞系侵袭作用的影响，侵袭抑制率（％）：（对照组侵袭细胞数-给药组侵袭细胞数）／对照组侵袭细胞数&;#215;100％，凡抑制率达30％以上，认为有抗侵袭作用。同时采用流式细胞仪通过单克隆抗体标记的方法检测侵袭转移相关黏附蛋白CD9，CD31，CD36，CD42a，CD44，CD49d，CD62p，CD41，凝血酶敏感蛋白及CD63的表达。结果：④各组人胃癌细胞系MGC-803，BGC-823对重组基底膜侵袭作用的抑制率比较：养胃抗瘤冲剂组、益气组、解毒组对人胃癌细胞MGC-803的抑制率均显著高于空白血清组（55．14％．32．43％，36．59％，0，P〈0．05）。益气解毒、益气活血组作用优于单纯解毒、益气、活血组，但两组比较差异无显著性意义（44．86％，41．23％，P〉0．05）。人胃癌细胞MGC-803与BGC-823比较，侵袭作用MGC-803强于BGC-823（空白血清组侵袭细胞数分别为60．75&;#177;4．57，56．35&;#177;3．25），养胃抗瘤冲剂及拆方对MGC-803的抑制作用强于BGC-823，但比较差异无显著性意义（P〉0．05）。（2）各组人胃癌细胞系MGC-803，BGC-823侵袭转移相关黏附蛋白的表达水平比较：养胃抗瘤冲剂组肿瘤转移黏附蛋白CD63、凝血酶敏感蛋白的表达水平低于空白血清组（药物作用24h：3．30％，3．10％；24．97％，11．50％；48h：0．93％，3．56％；5．78％，10．41％），抑制肿瘤转移的黏附蛋白如CD9的表达水平高于空白血清组（药物作用24h：90．49％，86．23％；48h：94．81％，77．69％）。单纯的活血药在给药早期（24h）则可以促进CD63的表达（33．12％），随着给药时间的延长（48h）则降低CD9表达（30．22％）；益气活血组则可纠正活血药的这种作用（24hCD63：3．55％；48hCD9：82．92％）。结论：人胃癌细胞系MGC-803，BGC-823对重组基底膜均具有侵袭作用，MGC-803的侵袭作用强于BGC-823。养胃抗瘤冲剂及拆方对MGC-803的抗侵袭作用优于BGC-823。养胃抗瘤冲剂抗人胃癌细胞侵袭作用的可能作用途径在于可降低部分促进肿瘤转移的黏附蛋白如CD63、凝血酶敏感蛋白的表达，对抑制肿瘤转移的黏附蛋白如CD9表达有促进作用。     

益精方对少、弱精子症患者精浆活性氧水平影响的研究

目的观察益精方对少、弱精子症患者精浆活性氧水平的影响;方法采用自身前后对照的临床试验设计方法,观察益精方对30例少、弱精子症患者治疗前后精浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、尿酸(UA)的改善情况;结果经服用益精方治疗3个月后,少、弱精子症患者精浆SOD较治疗前提高, MDA较前降低,差别明显,P<0.05;尿酸水平较前也有提高,但在P=0.05水平差别不明显.结论益精方可以降低精浆活性氧水平,提高精浆抗氧化酶含量,这可能是益精方改善精子活力的一个重要途径.     

益气活血软坚解毒含药血清诱导人肝癌细胞系Bel-7402细胞的凋亡

目的:研究益气活血软坚解毒(YHRJ)含药血清对人肝癌细胞系Bel-7402生长抑制及诱导凋亡作用.方法:将YHRJ含药血清作用于人肝癌细胞系Bel-7402细胞,应用MTT检测对肝癌细胞生长抑制作用,倒置显微镜、荧光显微镜、激光共聚焦扫描显微镜等影像学方法观察细胞形态学变化,以及PI染色单染、AnnexinV-PI双染后,流式细胞术检测对细胞周期影响及诱导细胞凋亡程度.结果:MTT法检测结果显示:YHRJ含药血清具有抑制Bel-7402肿瘤细胞生长作用(其中20%YHRJ等效剂量抑制率49.1%,与NS比,P<0.01);荧光显微镜及激光共聚焦显微镜可观察到典型的凋亡形态学变化.流式细胞术检测结果,细胞周期出现G0/G1期阻滞,并出现典型的凋亡峰,AnnexinV-PI双染法检测到早期及中晚期细胞凋亡.结论:YHRJ含药血清有抑制人肝癌细胞系Bel-7402细胞生长并有诱导细胞凋亡作用.     

基于单水平集函数的细胞分割算法

目的：由于细胞图像十分复杂,传统的基于像素或者边界的图像分割方法难以精确的实现细胞分割。因此,需要设计一种可以实现细胞图像精确分割的方法。方法：结合大津分割算法和主动轮廓模型的优点,设计出一种基于单水平集函数的细胞分割算法,首先对细胞图像大津分割,其结果作为水平集函数的初始值,然后使用迭代法对水平集函数演化。采用MATLAB对显微镜下获取的细胞图像进行试验,将本文改进后的算法与常规的算法进行了对比。结果：与传统的水平集分割算法相比,本文方法对细胞图像分割结果更加准确,迭代次数减少一半左右,因此分割时间也减少了一半左右。结论：结合细胞图像的结构特点,利用大津分割结果作为主动轮廓模型的初始值,可有效解决主动轮廓模型因为初始值设置不当导致的分割缺陷问题,水平集函数能够跟踪拓扑结构变化,具有计算精度高、算法稳定、优化边界清晰光滑等优点,在本文中得到了充分的应用。因此本文所提出的算法能够高效地实现细胞图像的分割。     

风疹病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及应用

为了建立产生风疹病毒（ＲＶ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株及检测ＲＶ感染的捕获ＥＬＩＳＡ。用ＲＶ抗原免疫后的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合建立杂交瘤细胞株。用相应单抗建立检测血清中ＲＶ行异性ⅠｇＭ的捕获ＥＬＩＳＡ，并以该法与间接ＥＬＩＳＡ进行了比较实验。获得的杂交瘤细胞５Ｄ５、５Ｇ５、２Ｆ７相应单抗均属ⅠｇＧ１，与纯化ＲＶ抗原有强阳性反应。两法比较，阳性血清Ｘ＾２＝０．２５，Ｐ〈０．     

氧化苦参碱干预MCF-7细胞系肿瘤干细胞样细胞生物学行为的实验研究

目的研究中药单体氧化苦参碱(oxymatrine,OM)对人乳腺癌细胞系MCF-7肿瘤干细胞样细胞生物学行为的干预作用及分子水平作用机制。方法以MCF-7为研究对象,采用侧群分选法(side population,SP)分离富集MCF-7细胞系肿瘤干细胞样细胞(SP细胞);MTT技术检测SP细胞和非肿瘤干细胞样细胞(non-side population cells,non-SP细胞)的增殖特性;以及不同浓度顺铂(cisplatin,DDP)和OM对于不同细胞亚群的增殖干预作用;利用流式细胞技术、细胞免疫荧光技术检测细胞中β-catenin基因、蛋白表达水平。结果 (1)不同浓度OM对MCF-7细胞的不同亚群细胞增殖抑制作用不同,其中对non-SP细胞的增殖抑制作用最弱,未分选的细胞次之,对SP抑制作用最强;不同浓度DDP对non-SP的增殖抑制作用最强,未分选的细胞次之,对SP细胞抑制作用最弱;(2)浓度为0.25、0.50、1.00mg/mL的OM作用SP细胞后,其在细胞总数中所占比例分别为3.1%、1.7%、0.2%;经过OM处理过的SP细胞磷酸化β-catenin表达率为(42.62±2.62)%,与未经OM处理过SP细胞的表达率[(22.81±1.66)%]比较,差异有统计学意义(P0.01);(3)与未经OM处理过的SP细胞比较,经过OM处理过的SP细胞中β-catenin的表达明显减少,而且特异性地分布在细胞膜下,核转位现象明显减少。结论 OM可能通过抑制Wnt/β-catenin信号转导通路的活性来干预人乳腺癌MCF-7细胞系中肿瘤干细胞样细胞的生物学行为。     

复方苦参注射液诱导人肝癌SMMC-7221细胞凋亡的研究

目的 探究复方苦参注射液对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响.方法 无菌培养人肝癌细胞SMMC-7721,采用MTT法检测复方苦参注射液对SMMC7721细胞的影响,复方苦参注射液的浓度分别为3.34、2.38、1.43和0.48 mg/ml;采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染法测肝癌细胞凋亡率,复方苦参注射液的浓度分别为0.86、1.72和3.43 mg/ml.结果 复方苦参注射液浓度3.34、2.38、1.43、0.48 mg/ml作用于SMMC-7721 24 h的细胞抑制率分别为51.03％、53.67％、49.83％、0.03％;作用48 h后,上述浓度的细胞抑制率分别为67.14％、65.35％、62.25％、0.05％,作用72 h后,分别为74.16％、68.77％、66.04％、26.02％.结果 复方苦参注射液浓度0.86、1.72和3.43 mg/ml作用于SMMC-7721 24 h的细胞凋亡率分别为(2.86±0.35)％、(15.16±1.15)％、(13.17±0.40)％;作用48 h后,上述浓度的细胞凋亡率分别为(8.57±0.44)％、(28.07±0.76)％、(29.81±8.10)％,均高于空白对照组(1.05±0.09)％(P＜0.05).结论 复方苦参注射液对人肝癌SMMC-7721细胞增殖具有抑制作用,其作用机制与诱导细胞凋亡有关.     

风疹病毒基因序列,结构蛋白及ELISA检测法

风疹又称德国麻疹 ,是临床上常见的呼吸道感染性、出疹性疾病 ,普通人发病率高、症状较轻 ,合并症少 ,患病后常可获得持久免疫。孕妇、尤其是早孕妇女初次感染风疹病毒 (Ｒｕｂｅｌｌａｖｉｒｕｓ ,ＲＶ) ,ＲＶ除了在母体内繁殖造成损害外 ,尚可经胎盘进入胎体 ,引起胎儿先天性风疹综合征 (Ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌｒｕｂｅｌｌａｓｙｎ ｄｒｏｍｅｓ,ＣＲＳ) ,导致死产、流产或胎儿先生性畸形[1] 。疫苗免疫可降低风疹的发病率 ,但据报道[2 ] 在西欧和南美免疫后的人群约 10 %～ 2 0 %仍保持着对ＲＶ的敏感性。我国虽已有减毒活疫苗问世 ,但尚…     

益气活血软坚解毒方对荷瘤小鼠抑瘤作用及对生存期影响研究

[目的]研究益气活血软坚解毒(YHRJ)方对荷瘤小鼠生存期的影响。[方法]抑瘤作用观察:荷S180腹水瘤昆明鼠、荷H22昆明鼠与615小鼠,造模后随机分成对照组、CTX(环磷酰胺)组、YHRJ等效剂量组、YHRJ高剂量组、YHRJ等效剂量组+CTX或顺铂(DDP)组、YHRJ高剂量组+CTX(或DDP)组,第2天开始用药,于第13天拉颈处死动物,取出瘤组织,称质量。生存期观察:荷H22昆明鼠,截尾期为对照组出现第1只动物死亡为止,记录小鼠存活时间。[结果]1)对荷S180昆明鼠:各用药组肿瘤明显缩小,YHRJ高剂量抑制率为64.22%,与生理盐水及YHRJ等效剂量组相比,差异显著;YHRJ高剂量+CTX组抑制率为80.10%,高于YHRJ等效剂量组及CTX组。2)对荷H22昆明鼠:除YHRJ等效剂量组外,其余各组抑瘤率均超过30%,抑瘤作用明显(P0.05),YHRJ高剂量组抑瘤率为51.36%。优于其他各组。3)对荷H22615小鼠肿瘤:YHRJ等效剂量抑瘤率为47.15%,YHRJ高剂量+DDP组抑瘤率为80.60%,说明中药对DDP有增效作用。4)对荷H22昆明鼠生存率影响:YHRJ高剂量组及各加DDP组荷瘤小鼠生存期及中位生存天数明显延长,生存率明显提高有统计学意义。[结论]益气活血软坚解毒方对小鼠S180腹水瘤、H22肝细胞癌肿瘤生长有抑制作用,并明显延长荷H22昆明鼠生存期。