鼻咽癌复发的分子标志物Jab1 和Akt1 蛋白表达的差异*

 目的：通过筛查鼻咽癌病人复发组织与鼻咽癌初发组织分子标志物表达的差异,探讨差异表达的蛋白与鼻咽癌复发的关系,为干预鼻咽癌复发提供新的靶点。方法：免疫组织化学SABC 法检测Jab1、p-STAT3、 CHOP 和Akt1 在复发和初发病人鼻咽癌组织中的表达;Western blotting 法检测鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2、CNE-2R 和HONE1 中Jab1 和Akt1 蛋白的表达。结果：复发病人鼻咽癌组织Jab1和Akt1核表达水平均高于初发鼻咽癌组织（P<0.05）;Jab1 和Akt1 在CNE-1、CNE-2R 和HONE1细胞中的表达高于在CNE-2细胞中的表达,电离辐射能促进CNE-1、CNE-2、CNE-2R 和HONE1细胞中Jab1 蛋白的表达。结论：复发病人鼻咽癌组织或辐射抗拒鼻咽癌细胞中Jab1 和Akt1 核表达均高于初发鼻咽癌组织或辐射相对敏感的鼻咽癌细胞;电离辐射促进鼻咽癌细胞中Jab1 过表达。     

山柰酚通过Met/PI3K/Akt/mTOR通路诱导非小细胞肺癌NCI-H1650细胞发生自噬进而影响其增殖

目的：探讨山柰酚诱导人非小细胞肺癌（NSCLC）NCI-H1650细胞发生自噬及其机制。方法：常规培养NCI-H1650细胞，用不同浓度山柰酚处理细胞，用CCK-8法、MTT法以及EdU法检测山柰酚对NCI-H1650细胞增殖能力的影响，用自噬双标记腺病毒mCherry-EGFR-LC3感染实验检测山柰酚对NCI-H1650细胞发生自噬的影响，用WB法检测山柰酚处理后NCI-H1650细胞中自噬相关蛋白及Met/PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达，用qPCR法检测山柰酚处理后NCI-H1650细胞中Met mRNA的表达。采用荧光素酶标记A549-luc细胞建立裸鼠移植瘤模型后用山柰酚进行处理，用活体动物成像技术观察移植瘤生长情况，用WB法检测移植瘤组织中自噬相关蛋白以及Met/PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果：山柰酚能显著抑制NCI-H1650细胞的增殖能力（P<0.05），山柰酚处理后NCI-H1650细胞内的自噬小体数量明显增加（P<0.05）、自噬标志蛋白LC3B和beclin1表达均明显上调（均P<0.05）、P62表达明...     

人乳头瘤病毒感染与梅州地区非小细胞肺癌发生的关系

目的 探讨人乳头瘤病毒( HPV)感染与梅州地区非小细胞肺癌(NSCLC)发生的关系.方法应用免疫组织化学SABC法检测43例NSCLC和27例肺良性病变组织中HPV的表达情况.结果HPV在NSCLC和肺良性病变组织中的检出率分别为39.5%和7.4%,差异有统计学意义(P=0.003).结论HPV感染与梅州地区NSC...     

微小RNA hsa-miR-93靶向STAT3提高鼻咽癌对放疗敏感性的机制研究

目的 研究hsa-miR-93在鼻咽癌放疗抗拒过程中的作用及分子机制。方法 以人鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2、CNE-2R、HONE1、C666.1以及鼻咽上皮永生细胞NP460为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞经放疗后hsa-miR-93的表达;采用Western blot法检测各组细胞经放疗后STAT3蛋白的表达;通过miRWalk软件和RNAHybrid软件预测hsa-miR-93和STAT3的结合作用及结合位点;通过双荧光素酶报告基因法检测hsa-miR-93对STAT3靶向结合情况;瞬时转染小分子模拟物或抑制剂调控hsa-miR-93的表达后,采用qRT-PCR和Western blot法检测STAT3的表达;转染siSTAT3沉默STAT3的表达后,通过细胞集落形成实验检测鼻咽癌细胞经放疗后的集落形成能力。结果 与CNE-1、CNE-2细胞(相对放疗敏感)相比,hsa-miR-93在HONE1、CNE-2R细胞(相对放疗抗拒)中表达降低(P＜0.001),且各组鼻咽癌细胞经放疗后hsa-miR-93的表达呈剂量及时间依赖性降低(P＜0.05);与CNE-1、CNE-2细胞相比,STAT3在HONE1、CNE-2R细胞中表达升高,且各组鼻咽癌细胞经放疗后表达呈剂量及时间依赖性升高;经预测,hsa-miR-93可直接靶向结合STAT3。过表达hsa-miR-93可以在mRNA以及蛋白水平上显著抑制STAT3的表达(P＜0.05),而抑制hsa-miR-93的表达可以显著上调STAT3的表达(P＜0.05);过表达hsa-miR-93或沉默STAT3均使鼻咽癌细胞的集落形成显著减少(P＜0.001);抑制hsa-miR-93减弱了鼻咽癌对放疗的敏感性,而同时抑制hsa-miR-93和STAT3后,可提高鼻咽癌对放疗的敏感性。结论 hsa-miR-93可能通过靶向STAT3提高鼻咽癌对放疗的敏感性。     

扶正抗癌方诱导H1650细胞凋亡的分子机制

目的:观察扶正抗癌方对H1650细胞凋亡的影响,并探讨其诱导H1650细胞凋亡的分子机制。方法:以人肺腺癌细胞株H1650细胞为研究对象,用0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 g·L~(-1)扶正抗癌方处理H1650细胞24,48,72 h,另设空白组,四氮唑蓝盐化合物(MTS)法检测细胞增殖;用0.5,1.0,1.5 g·L~(-1)扶正抗癌方处理H1650细胞24 h,另设空白组,Annexin VFITC/碘化丙啶(PI)流式细胞术检测细胞凋亡;用0.5,1.0,2.0 g·L~(-1)扶正抗癌方处理H1650细胞24 h,另设空白组,半胱氨酸蛋白酶-3/7(Caspase-3/7)活力检测试剂盒检测Caspase-3/7活力;蛋白免疫印迹法检测扶正抗癌方对pro Casapse-3,聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP),Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果:与空白组比较,扶正抗癌方能明显抑制H1650细胞的增殖(P0.05),且呈浓度和时间依赖性。与空白组比较,扶正抗癌方明显诱导H1650细胞的早期凋亡,增强Caspase-3/7的活力(P0.05),且呈浓度依赖性。与空白组比较,扶正抗癌方明显下调pro Casapse-3和PARP的表达(P0.05),呈浓度依赖性,明显上调Bax的表达(P0.05),且呈时间依赖性。结论:扶正抗癌方可通过激活Caspase-3和Bax诱导H1650细胞的凋亡。     

T63增强放疗诱导的鼻咽癌细胞凋亡和G2/M期阻滞

 目的： 探讨姜黄素衍生物T63在鼻咽癌CNE-2和CNE-2R细胞中的抗癌作用。方法： 采用MTT法、集落形成实验和流式细胞术检测单独放疗组、药物处理组和放疗药物联合作用组对CNE-2和CNE-2R细胞增殖能力、细胞凋亡和细胞周期的影响,并比较其差异。结果： T63可有效抑制CNE-2和CNE-2R细胞的活性和增殖;T63或电离辐射（IR）均可单独诱导CNE-2和CNE-2R细胞的凋亡和G2/M期阻滞;与T63或IR单独作用组比,T63与IR联合作用诱导细胞凋亡和G2/M期阻滞更明显（P<0.05）。结论： T63通过增加放疗诱导的细胞凋亡和G2/M期阻滞而逆转CNE-2R细胞辐射抗性,提示T63具有放疗增敏的潜在价值。     

姜黄素衍生物T83对同源不同辐射抗性鼻咽癌细胞凋亡的作用

 目的：比较4-芳甲叉类姜黄素衍生物T83对同源不同辐射抗性鼻咽癌细胞凋亡的作用差异。方法：采用MTT法、Hoechst 33342染色法、流式细胞术、Western blotting和qRT-PCR 检测和比较T83对CNE-2R和CNE-2细胞活力、细胞凋亡及线粒体膜电位、细胞procaspase-3/procaspase-9/Cyt-C蛋白表达和细胞PTEN/Akt/p27 mRNA水平的影响。结果：T83可抑制CNE-2R细胞的活性（24 h、48 h和72 h的IC50分别为0.9、0.4和0.2 μmol/L）,其抑制作用明显优于对CNE-2细胞的作用（24 h、48 h和72 h的IC50分别为1.8、0.5和0.4 μmol/L;P＜0.05）;T83作用48 h后,CNE-2R和CNE-2细胞中均观察到染色质浓缩、边集和分割成块状;T83作用48 h后,CNE-2R细胞晚期凋亡率升高（1.57%→27.26%）,明显高于CNE-2细胞（1.74%→8.15%;P＜0.05）;T83作用36 h后,CNE-2R细胞线粒体膜电位下降百分率（87.71%）明显高于CNE-2细胞（50.47%;P＜0.05）;T83作用48 h后,CNE-2R细胞中procaspase-3和procaspase-9蛋白表达明显低于CNE-2细胞,CNE-2R中Cyt-C蛋白表达明显高于CNE-2细胞。T83作用24 h后,PTEN和p27 mRNA水平明显上调,而Akt mRNA水平明显下调（P＜0.05）,且CNE-2R细胞的变化更加显著。结论：与CNE-2细胞相比,T83能更加明显地抑制PTEN/Akt/p27信号转导通路,启动线粒体凋亡途径,加速诱导CNE-2R细胞凋亡。     

CHOP在鼻咽癌中的表达及其意义

目的探讨CHOP在鼻咽癌组织与鼻咽炎组织中的表达差异及其意义。方法采用免疫组织化学法检测48例鼻咽癌组织和35例鼻咽炎组织中CHOP的表达,SPSS软件统计分析鼻咽癌组织中CHOP的表达与临床病理因素及预后的关系。结果鼻咽癌组织中CHOP高表达于胞浆（96％）及细胞核（52％）,鼻咽炎组织中CHOP仅弱阳性低表达于胞浆（49％）（P〈0．001）;鼻咽癌组织CHOP的浆表达与患者肿瘤T分期及年龄正相关（P〈0．05）,而鼻咽癌组织CHOP的核表达与鼻咽癌细胞分化负相关（P〈0．05）;单因素生存分析显示,鼻咽癌组织胞浆和细胞核CHOP的过表达均与病人生存率呈负相关趋势。结论CHOP可能通过抑制鼻咽癌细胞分化而促进鼻咽癌的发生发展及影响其预后,其可作为判断鼻咽癌分期、细胞分化的分子标志物和分子治疗的靶点。     

山柰酚抗肿瘤作用的药理研究进展

山柰酚是天然的黄酮类化合物,可从多种中药材及水果蔬菜中提取,具有药理活性广泛、毒副作用少的特点。研究表明,山柰酚对多种常见癌症如结肠癌、乳腺癌、白血病等有明显的预防和抑制作用。其主要通过阻滞细胞周期、抑制侵袭和迁移、诱导细胞凋亡和自噬、抑制有氧糖酵解等来发挥抗肿瘤作用。同时山柰酚与许多药物联合使用可以发挥协同抗肿瘤、增敏的作用,其纳米制剂治疗肿瘤具有更好的疗效,表明山柰酚具有很好的临床应用前景。该文综述近年来山柰酚抗肿瘤的药理作用机制的研究进展,为其进一步的研发提供理论基础和研究思路。     

澳洲茄边碱抑制CNE-1鼻咽癌细胞转移的分子机制

目的探讨澳洲茄边碱抑制CNE-1细胞转移的分子机制。方法 CCK8活力检测法和transwell实验分别观察澳洲茄边碱对CNE-1细胞增殖、侵袭和迁移的影响;Real-time quantitative PCR和蛋白质印迹法探索澳洲茄边碱对snail、slug、E-cadherin和N-cadherin m RNA及蛋白表达的影响。结果澳洲茄边碱以浓度和时间依赖性抑制CNE-1细胞增殖(P0.05);以浓度依赖性对CNE-1细胞的侵袭和迁移能力进行抑制(P0.05);分别在基因和蛋白质水平上抑制snail、slug、E-cadherin和N-cadherin的表达水平(P0.05)。结论澳洲茄边碱通过在基因和蛋白质水平抑制转录因子snail、slug的表达,进而影响E-cadherin和N-cadherin的表达,从而抑制CNE-1细胞的转移。