银杏二萜内酯葡胺注射液及其银杏二萜内酯成分抗人脐静脉内皮细胞氧糖剥夺损伤的转录组学研究

目的 研究银杏二萜内酯葡胺注射液（Diterpene Ginkgolides Meglumine Injection,DGMI）及其银杏二萜内酯成分抗人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells-T1,HUVEC-T1）氧糖剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）损伤的潜在作用通路。方法 采用CCK-8法分别测定不同浓度银杏内酯A（ginkgolide A,GA）、银杏内酯B（ginkgolide B,GB）、银杏内酯K（ginkgolide K,GK）和DGMI对HUVEC-T1细胞的毒性,明确药物处理细胞浓度;采用转录组测序技术对溶剂对照组（二甲基亚砜）、模型组（OGD/R 4 h/24 h）及给药组（造模＋不同剂量DGMI、GA、GB、GK处理）的细胞样本分别进行转录组测序;通过生物信息学分析方法,以GEO数据库中缺血性脑卒中患者转录组数据为参考,采用基因集富集分析（gene set enrichment analysis,GSEA）、差异基因富集等分析方法完成对HUVEC-T1 OGD模型及不同浓度药物抗OGD损伤能力的评价,阐明DGMI及其功效成分的潜在作用机制。结果 GSEA分析显示,临床缺血性脑卒中患者血液转录组数据分析获得的疾病富集通路与本实验细胞模型测序结果获得的富集通路相似度为55.6%;DGMI、GA、GB、GK处理组与模型组相比,显著富集的主要信号通路包括FcεRI、NOD样受体、有丝分裂原激活蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）等。差异基因分析显示,与对照组相比,模型组共筛选出439个差异基因,差异基因的基因本体（gene ontology,GO）分析主要富集在应激反应过程,京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）分析主要富集在磷脂酶D、FcεRI、NOD样受体和血小板活化等信号通路;与模型组相比,给药组差异基因的GO分析主要富集在造血和代谢过程,KEGG分析主要富集在血小板活化、磷脂酶D等信号通路。结论 HUVEC-T1 OGD模型模拟了部分缺血性脑卒中的病理特征;DGMI、GA、GB、GK均具有抗OGD损伤作用,发挥抗OGD损伤作用的关键基因及信号通路主要集中在抗炎、抗凋亡、调控血小板活化等生物学过程,可能通过下调FcεRI、NOD样受体、MAPK和VEGF信号通路,干预血小板活化、磷脂酶D等信号通路发挥作用。