促红细胞生成素对环孢素致人肾小管上皮损伤保护作用

目的体外探索促红细胞生成素（EPO）拮抗环孢素A（CsA）所致肾小管上皮损伤的作用机制。方法采用人近曲肾小管上皮细胞作为体外实验模型,实验分对照组、CsA对照组、EPO 15U/mL与CsA合用组、EPO 30U/mL与CsA合用组,MTT法检测细胞增殖抑制率,采用金氏公式评价EPO与CsA合用拮抗作用效果,采用ELISA方法检测细胞培养上清液中肾损伤分子-1（KIM-1）的表达量,采用流式细胞仪检测细胞生存情况。结果采用金氏公式评价结果显示,EPO在15U/mL与30U/mL浓度时可以拮抗CsA对肾小管上皮的损伤作用;对比CsA对照组,EPO在15U/mL与30U/mL浓度可降低细胞培养上清液中KIM-1的表达量（P〈0.05）,降低凋亡细胞比率（P〈0.05）,降低坏死细胞比率（P〈0.05）,增加活细胞比率（P〈0.05）。结论 EPO拮抗CsA所致肾小管上皮损伤,可能通过减少细胞凋亡而实现。     

人食管下括约肌收缩和舒张调节机制的研究进展

人食管下括约肌(LES)包括神经调节、自身调节、体液调节三种调节方式。三种方式中神经调节虽然通过多种不同的神经递质完成,但其最终也是由控制自身调节机制的肌间神经丛来完成调节功能。体液调节涉及多种激素类物质,主要的激素类物质因配体和受体的不同调节功能也不尽相同。有些激素类物质对人LES的调节作用机制还需要进一步研究。     

蛴螬粗提物对人宫颈癌Hela细胞抑制作用的形态学观察

目的研究蛴螬粗提物对体外培养的人宫颈癌Hela细胞株抑制作用引起的形态学改变。方法应用MTT法、HE染色、油红O染色、透射电镜的方法检测蛴螬粗提取物对体外培养的人宫颈癌Hela细胞抑制作用的影响及观察细胞的形态学改变。结果蛴螬3种粗提取物中以石油醚粗提物增殖抑制率最高。蛴螬石油醚粗提物对人宫颈癌Hela细胞株的增殖抑制作用呈剂量依赖性(P<0.01),同时呈时间依赖性(P<0.01)。倒置显微镜下蛴螬石油醚粗提物50μg/m l作用后早期细胞出现凋亡形态学变化;作用晚期细胞发生膜破裂坏死。HE染色和透射电镜观察细胞出现典型凋亡形态变化。油红O染色和透射电镜观察到细胞发生脂肪变性。结论蛴螬粗提物对人宫颈癌Hela细胞株具有抑制增殖及诱导凋亡作用。蛴螬3种粗提物中以石油醚粗提物抑制增殖作用效果最佳。蛴螬石油醚粗提物对Hela细胞抑制增殖作用在粗提物50μg/m l作用48 h之前主要以诱导凋亡为主,在其后时间以诱发肿瘤细胞脂肪变性和坏死为主。     

蛴螬石油醚提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的研究蛴螬石油醚提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法MTT法检测蛴螬石油醚提取物对体外培养的HeLa细胞株增殖抑制作用及细胞毒活性;末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧核苷酸缺口末端标记(TdT-mediateddUTPnickendlabeling,TUNEL)法检测细胞凋亡;通过免疫细胞化学S-P法测定凋亡相关基因产物Bcl-2、Bax蛋白与凋亡相关蛋白caspase-8和caspase-3的表达情况。结果蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性(P<0.01)。蛴螬石油醚提取物作用细胞后凋亡细胞数目随时间延长而增多;凋亡指数与药物处理呈时间依赖性和剂量依赖性。蛴螬石油醚提取物作用后Bcl-2蛋白表达均下降,Bax、caspase-8和caspase-3表达上升,4种蛋白表达各组间比较均差异显著(P<0.01)。结论蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞具有抑制增殖及诱导凋亡作用。蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞抑制增殖作用(50μg/mL作用48h之前)主要以诱导凋亡为主。蛴螬石油醚提取物诱导凋亡作用可能与下调Bcl-2表达,上调Bax、caspase-8和caspase-3表达有关。     

人参糖蛋白对少弱精症小鼠生精障碍的改善作用

探讨人参糖蛋白（PGG）对少弱精症小鼠生精障碍的改善作用,并初步阐明其作用机制。     

环孢素引起肾小管上皮细胞培养液中肾损伤分子-1水平升高的机制

目的：探讨环孢素（CsA）引起人肾小管上皮细胞(HKC)培养液中肾损伤分子-1（KIM-1）水平升高的作用机制,阐明KIM-1表达与p38 MAPK通路和EKR1/2 MAPK通路的关系。方法：将处于对数生长期的HKC分为空白组、CsA损伤组、CsA与p38激酶抑制剂合用组、p38激酶抑制剂组、CsA与ERK1/2激酶抑制剂合用组和ERK1/2激酶抑制剂组。MTT法检测各组HKC增殖抑制率,ELISA法测定各组HKC上清液中KIM-1水平,流式细胞术检测各组细胞存活率、细胞凋亡率和细胞坏死率。结果：与空白组比较,CsA损伤组细胞上清液中KIM-1水平显著升高（P<0.05）,细胞存活率显著降低（P<0.05）,细胞凋亡率和细胞坏死率显著升高（P<0.05）;p38激酶抑制剂组和ERK1/2激酶抑制剂组中细胞存活率、细胞凋亡率和细胞坏死率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与CsA损伤组比较,CsA与p38激酶抑制剂合用组、CsA与ERK1/2激酶抑制剂合用组细胞上清液中KIM-1水平显著降低（P<0.05）,细胞存活率显著升高（P<0.05）,细胞凋亡率和细胞坏死率显著降低（P<0.05）。结论： p38 MAPK通路和ERK1/2 MAPK通路参与CsA素引起肾小管上皮细胞培养液中KIM-1水平升高的过程,KIM-1的表达可能成为临床监测CsA肾毒性的生化指标。     

蛴螬石油醚提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的研究蛴螬石油醚提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法MTT法检测蛴螬石油醚提取物对体外培养的HeLa细胞株增殖抑制作用及细胞毒活性;末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧核苷酸缺口末端标记(TdT-mediateddUTPnickendlabeling,TUNEL)法检测细胞凋亡;通过免疫细胞化学S-P法测定凋亡相关基因产物Bcl-2、Bax蛋白与凋亡相关蛋白caspase-8和caspase-3的表达情况。结果蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性(P<0.01)。蛴螬石油醚提取物作用细胞后凋亡细胞数目随时间延长而增多;凋亡指数与药物处理呈时间依赖性和剂量依赖性。蛴螬石油醚提取物作用后Bcl-2蛋白表达均下降,Bax、caspase-8和caspase-3表达上升,4种蛋白表达各组间比较均差异显著(P<0.01)。结论蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞具有抑制增殖及诱导凋亡作用。蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞抑制增殖作用(50μg/mL作用48h之前)主要以诱导凋亡为主。蛴螬石油醚提取物诱导凋亡作用可能与下调Bcl-2表达,上调Bax、caspase-8和caspase-3表达有关。     

治疗糖尿病中药有效组分配伍比例的筛选与验证

目的:运用均匀设计结合药理模型的方法筛选黄连总生物碱与三七总皂苷组合物(HS组合物)的最佳配伍比例,观察该剂量HS组合物对糖尿病并发症的影响。方法:以黄连总生物碱、三七总皂苷为研究对象,根据均匀设计方案选用U6(62)表分组设计,以小鼠血糖、血浆凝血酶原时间(PT),活化部分凝血酶原时间(APTT)为筛选指标,回归分析获得最佳剂量配比。采用高糖高脂结合链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠模型,将大鼠分为空白组,模型组,二甲双胍组(150 mg·kg-1),HS组合物组(黄连总生物碱360 mg·kg-1,三七总皂苷40 mg·kg-1),灌胃给药10周,通过观察各组大鼠血糖、糖耐量并计算血糖曲线下面积(AUC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),血液流变学指标以及胰腺、心脏、肾脏、视网膜的病理变化,验证该组合物对糖尿病并发症的作用。结果:HS组合物的小鼠给药最佳配伍比例为黄连总生物碱625 mg·kg-1+三七总皂苷60 mg·kg-1。验证实验显示,与空白组比较,模型组小鼠空腹血糖及血脂水平显著升高(P 0. 01),HDL-C显著降低(P 0. 01);全血高、中、低切黏度均显著升高(P 0. 01),胰腺、心脏、肾脏、视网膜损伤程度较重;与模型组比较,二甲双胍组于给药第6,8,10周血糖明显降低(P 0. 05,P 0. 01),HS组合物组第2,4,8,10周空腹血糖水平明显降低(P 0. 05,P 0. 01),血清中TG及LDL-C值明显降低(P 0. 05,P 0. 01),HDL-C,HDL-C/LDL-C值显著升高(P 0. 01),全血高切黏度与全血中切黏度均显著降低(P 0. 01);病理结果显示,HS组合物能减轻大鼠胰腺、心脏、肾脏以及视网膜的损伤。结论:HS组合物最佳配伍剂量对高糖高脂结合链脲佐菌素诱导的大鼠糖尿病并发症具有良好的抑制作用。     

CIK细胞对乳腺癌细胞株抗增殖及诱导凋亡的作用

目的研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-inducedkillcells,CIK)对ZK-75-1乳腺癌细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用,并探讨其作用机制。方法应用MTT法检测CIK细胞对ZK-75-1乳腺癌细胞株的抗增殖作用的影响及细胞毒活性;通过倒置显微镜、HE染色、透射电镜观察凋亡细胞的形态学改变。结果MTT比色法表明随着CIK细胞与乳腺癌细胞效靶比增加及作用时间延长,抑制率明显增强(P<0.01)。CIK细胞作用于乳腺癌细胞24h后,形态学观察乳腺癌细胞发生凋亡或坏死。结论CIK细胞是一种新型高效具有较强杀伤体外乳腺癌细胞的免疫活性细胞。     

CIK细胞对乳腺癌细胞株ZK-75-1的杀伤作用及其机制

目的研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞(cyto-kine-inducedkillingcells,CIK)对乳腺癌细胞株ZK-75-1的杀伤作用,并探讨其作用机制。方法通过HE染色观察凋亡细胞ZK-75-1的形态学改变。应用TUNEL(TdT-mediateddUTPnickendlabeling)法检测CIK细胞的凋亡。通过免疫细胞化学染色法检测ZK-75-1细胞中p53、p16、C-myc、Bcl-2及Bax的表达率。结果HE染色显示,CIK细胞向ZK-75-1细胞靠近,形成典型的玫瑰花环状;肿瘤细胞的胞浆中出现颗粒状物,有的肿瘤细胞只见颗粒状碎片;而作为对照的乳腺癌细胞生长良好。TUNEL法检测显示,对照组细胞未染色或染呈均匀的淡蓝色;实验组凋亡的细胞缩小,核或核周染呈深蓝色。CIK细胞作用4~12hZK-75-1细胞的凋亡率上升,作用12~24h细胞的凋亡率下降,与对照组相比较有统计学意义(P<0.01)。免疫细胞化学染色的结果表明,CIK细胞实验组p53、p16、C-myc及Bcl-2蛋白随作用时间的延长均下降,Bax蛋白的表达上调,与对照组相比较均有统计学意义(P<0.01)。结论CIK细胞对乳腺癌细胞ZK-75-1杀伤作用的机制之一,可能与p53、p16、C-myc、Bcl-2蛋白表达的下调及Bax蛋白表达的上调有关,并与CIK细胞作用的时间关系密切。