酶敏感多肽胶束的构建及其向T细胞递送药物的可行性研究

目的 构建包载芳烃受体抑制剂CH223191的酶敏感多肽胶束并对其进行表征,初步评估此多肽胶束向T细胞递送药物的可行性。方法 采用固相合成法合成了序列为stearyl-HHHRRRRRPLGLAGK-(Mal)的多肽(SHRP)。制备了载药胶束SHRP-CH,测定了其粒径、载药量、临界胶束浓度等,评价其细胞毒性及免疫原性,并使用流式及激光共聚焦考察了CD8⁺T细胞对胶束的摄取效率。结果 SHRP-CH的粒径为(133.8±7.4)nm,酶处理后粒径减少为(92±5.8)nm,载药量和包封率分别为(7.1±1.2)%、(67.7±2.3)%,酶解前后的胶束均具备较低的细胞毒性;CD8⁺T细胞摄取实验证实了此胶束体系向T细胞递送药物的可行性。结论 SHRP多肽酶敏感胶束体系具有较好的载药能力及低细胞毒性,有希望成为T细胞药物递送的潜在载体。     

MicroRNA基因递送系统抗激素非依赖型前列腺癌增殖作用研究

目的：采用分枝状聚乙烯亚胺（BPEI）、线型的聚乙烯亚胺（LPEI）和树枝状聚合物聚酰胺-胺（PAMAM）与具有抑制激素非依赖型前列腺癌细胞PC3增殖的miRNA-15a和miRNA-16-1质粒结合,构建了MicroRNA基因递送系统。考察形成的三种纳米复合物的粒径、zeta电位、细胞内摄取,以及对PC3细胞的抑制作用。方法：利用粒径分析仪测定形成的三种纳米复合物的粒径和电位,凝胶电泳实验测定三种材料对miRNA的结合能力; 利用FAM标记的NC-miRNA考察PC3细胞对三种复合的摄取情况;通过CCK8 法测定三种材料与miRNA-15a和miRNA-16-1形成的复合物对PC3细胞的抑制作用;PCR法测定三种材料与miRNA-15a和miRNA-16-1结合后对PC3细胞中Bcl-2,Cylin D1和Wnt3a表达的阻滞作用。结果：BPEI,LPEI和PAMAM三种材料与miRNA可结合形成稳定的纳米级复合物,在N/P=5时,PC3细胞对BPEI/miRNA-FAM的摄取高于LPEI/miRNA-FAM和PAMAM/miRNA-FAM,具有统计学意义（P<0.01）。BPEI、LPEI和PAMAM都可以携带miRNA-15a和miRNA-16-1进入PC3细胞,并且阻滞PC3细胞中Bcl-2,Cylin D1和Wnt3a蛋白的表达。结论：BPEI,LPEI和PAMAM三种材料包裹miRNA-15a和miRNA-16-1可对激素非依赖型前列腺癌细胞PC3细胞产生抑制作用。并可以有效阻滞PC3细胞中Bcl-2,Cylin D1和Wnt3a蛋白的表达。     

HPLC法测定不同厂家生产的硫酸氢氯吡格雷片含量及有关物质

目的 建立高效液相色谱法测定硫酸氢氯吡格雷片中有效成分S型氯吡格雷及有关物质R型氯吡格雷含量的方法,并比较3个厂家生产的氯吡格雷片中2种成分含量的差异。方法 色谱条件：ULTRON ES-OVM手性色谱柱（4.6 mm×150 mm,5 μm）,乙腈-0.01 mol/L 磷酸二氢钾溶液（20：80）为流动相,流速为1 mL/min,柱温17℃,检测波长220 nm。结果 硫酸氢氯吡格雷S型及R型分别在50~117 mg/L和1.52~30.4 mg/L范围内线性关系良好（相关系数r均为0.999 8）,精密度良好,平均回收率分别为99.7%和98.8%,供试品溶液室温放置12 h 稳定;3个厂家生产的硫酸氢氯吡格雷片S型及R型的含量均符合药典要求。结论 本方法准确度好,专属性强,可用于硫酸氢氯吡格雷片的质量控制。     

鲎血源主要生物活性物质功能研究进展

鲎血阿米巴细胞大小颗粒中存在多种生物活性物质,在这些物质中,抗脂多糖因子,鲎素抗菌肽,鲎防御素和D因子等是鲎先天免疫系统中的重要功能物质,体外研究表明,它们对细菌、真菌、病毒等有强烈的抑制作用,而对正常细胞毒性较低,是开发肽类抗菌药的重要候选物质。本文主要介绍存在于阿米巴细胞中的鲎源抗菌物质,对其结构、功能、作用机理以及基因工程重组鲎素的研究进展进行综述,并对鲎源抗菌肽的发展趋势进行讨论。     

治疗黑色素瘤的DC疫苗研究新进展

黑色素瘤是最具侵袭性的皮肤恶性肿瘤,易发生早期转移和治疗后复发。治疗性肿瘤疫苗是新兴的免疫疗法,具有毒性低以及可抑制肿瘤转移的特点。目前已有多个针对黑色素瘤治疗性疫苗的研究,其中黑色素瘤治疗性树突状细胞（DC）疫苗引起了广泛关注。虽然肿瘤治疗性DC疫苗在黑色素瘤中的疗效已被多项研究证实,但该类疫苗存在免疫效应不足、单独使用疗效不佳等问题,仍具有较大的改进空间。本文对黑色素瘤的治疗性DC疫苗的研究现状进行了综述,并对肿瘤治疗性DC肿瘤的研究重点及优化策略进行展望。     

可生物降解多肽基因载体的构建与体外评价

目的 制备一种应用于基因递送系统的硫辛酸修饰的聚精氨酸多肽纳米复合物,并考察其对人胚肾细胞系HEK293细胞的转染效率及细胞毒性.方法 以不同量的半胱氨酸作为交联剂,合成4种不同交联度的还原性硫辛酸修饰的交联聚精氨酸组氨酸(LHRss),利用1H NMR和凝胶色谱鉴定合成的LHRss.取质粒DNA (pDNA)和LHRss以不同氮磷比(N/P)自组装形成纳米复合物,用粒度测定仪测定复合物的粒径和zeta电位,凝胶阻滞电泳测定载体LHRss对pDNA的包裹能力.用LHRss/pDNA纳米复合物与HEK293细胞共同培养,考察不同交联度复合物的细胞摄取情况及相关基因转染情况,并测定不同纳米复合物对HEK293细胞的细胞毒性.结果 通过结构鉴定确定LHRss多肽合成成功.组装形成的纳米复合物粒径分布均匀,N/P≥40时LHRss3/pDNA及LHRss4/pDNA复合物的zeta电位均大于30 mV.凝胶阻滞电泳结果显示N/P值为5时,LHRss3可完全包裹pDNA.当N/P值为40时,HEK293细胞对LHRss3/pDNA的摄取及转染效率高于其他3种复合物及单体硫辛酸修饰的聚精氨酸组氨酸(LHR);其中LHRss3/pGL3复合物的平均荧光强度约为LHR/pGL3复合物的3.98倍,差异具有统计学意义(P＜0.05).细胞毒性实验显示LHR/pGL3及不同交联度LHRss/pGL3转染HEK293细胞24 h后,细胞存活率均在80％以上,其毒性作用均低于bPEI-25K(20 μg/mL bPEI-25K转染细胞24 h后细胞存活率为25％左右,P＜0.05).结论 制备的硫辛酸修饰的聚精氨酸多肽纳米复合物有望成为一种高效的基因载体.     

胰腺癌靶向的纳米级超声造影剂的制备及体外评价

目的 制备一种胰腺癌靶向的纳米级超声造影剂(T-UCA)并评价其体外靶向性效果。 方法 合成高分子聚合物PLGA-PEG-NHS并利用核磁共振氢谱检测;用乳化挥发法制备包裹全氟溴辛烷(PFOB)的PLGA纳米造影剂后连接Hedgehog抗体;BCA法测定抗体的连接率;透射电镜观察其形态,动态光散射法测定其粒径、电位;采用气相色谱-质谱法测定纳米造影剂的包封率及载药量;利用透析法测定纳米造影剂的体外释放特性;在人胰腺癌细胞株SW1990和CFPAC-1上,利用荧光显微镜和流式细胞仪定性和定量验证其体外靶向能力。 结果 所制得胰腺癌靶向的纳米级超声造影剂平均粒径为198.9nm,zeta电位为-31.8mV,包封率(63.7?Ee3.9%),载药量(14.3?Ee0.9%),48小时释药量为85.3%;体外细胞实验显示靶向造影剂与高表达Hedgehog抗原的SW1990细胞大量结合,而靶向造影剂与不表达Hedgehog抗原的CFPAC-1细胞未见特异性结合。 结论 本研究通过乳化挥发法成功制备了胰腺癌靶向的纳米级超声造影剂,其各项表征符合要求,并能特异性靶向Hedgehog高表达的胰腺癌细胞,有望成为胰腺癌诊断的超声造影剂。     

瑞舒伐他汀钙片剂的处方工艺及稳定性

目的 获得重现性好、质量稳定的瑞舒伐他汀钙片处方和工艺。方法 筛选合适的处方,分别采用三相搅拌制粒和沸腾床制粒制备舒伐他汀钙颗粒,考察对颗粒性质、压片特性和溶出度等质量的影响,考察所选处方和制备工艺的重现性,并进行制剂的影响因素研究。结果 高速搅拌制粒比沸腾床制粒工艺更优;按筛选的处方工艺制备的三批中试样品满足质量要求;其溶出度与原研药“Crestor”溶出行为相似;光照、湿度和温度影响瑞舒伐他汀钙片剂的稳定性。结论 筛选的处方和工艺重现性良好、质量稳定。     

依达拉奉联合银杏二萜内酯葡胺注射液治疗急性脑梗死的临床疗效观察

目的 研究依达拉奉联合银杏二萜内酯葡胺注射液治疗急性脑梗死（ACI）的临床疗效,探讨治疗ACI更为有效的治疗方案。方法 收集2014年1月至2015年1月于解放军463医院神经内科住院治疗的ACI患者100例,根据随机数字表法将患者分为观察组和对照组,每组各50例,观察组在常规治疗基础上加用依达拉奉和银杏二萜内酯葡胺注射液,对照组在常规治疗基础上加用银杏二萜内酯葡胺注射液。两组均连续治疗14 d,于治疗前、后采用神经功能评分比较,观察两组患者的临床疗效、不良反应和治疗满意度,并进行统计分析。结果 治疗前两组的神经功能缺损（NIHSS）评分无显著差异（P>0.05）。治疗后观察组的NIHSS评分明显优于对照组（P<0.05）。观察组总有效率为90%,对照组为66%,差异有统计学意义（P<0.05）。两组发生的主要不良反应有皮疹、恶心、头晕,且不良反应发生率无明显差异（P>0.05）。观察组患者的治疗满意度为94%,对照组为84%,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 在ACI常规治疗基础上,加用依达拉奉和银杏二萜内酯葡胺注射液,能够显著改善ACI患者的神经功能,提高治疗满意度,值得在临床推广使用。     

前列腺癌新型靶向纳米超声造影剂的合成及初步评价

目的：研究制备一种前列腺癌新型靶向性纳米超声造影剂。方法：采用PEG及抗前列腺癌特异性膜抗原（PSMA）适体A10-3.2修饰多壁碳纳米管（MWCNTs）合成新型靶向纳米超声造影剂,对其进行合成验证、体外特征评价、生物相容性研究及体外显影评价。结果：Zeta电位、透射电镜扫描图（TEM）、红外分析图（FT-IR）均表明此靶向纳米造影剂合成成功。体外细胞学研究表明,该造影剂细胞毒性小、生物相容性好。体外显影结果表明,该造影剂具有良好的显影效果。结论：该新型造影剂制备成功,具备靶向显影的潜能。