清燥救肺汤对荷Lewis小鼠肺癌细胞增殖相关糖酵解乳酸生成的影响

目的:观察清燥救肺汤对荷Lweis小鼠肺癌细胞增殖相关糖酵解乳酸生成的影响,探讨其作用机制。方法:50只雄性C57BL/6J小鼠,随机分为模型组,化疗组,清燥救肺汤高、中、低剂量组,每组10只。右腋下注射Lewis肺癌细胞建立肺癌荷瘤模型,清燥救肺汤高、中、低剂量组以11,5.5,2.75 g·kg~(-1)·d~(-1)造模前2周灌胃给药,化疗组以50 mg·kg~(-1)·(2d)~(-1)腹腔注射给药,模型组以等体积生理盐水灌胃给药,接种后继续给药2周后处死各组小鼠并取瘤称重,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测低氧诱导因子-α亚基(hypoxia inducible factor,HIF-)α),原癌基因蛋白(cancer-myc,C-myc)表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测乳酸水平以及乳酸脱氢酶-A(lactate dehydrogenase-A,LDH-A)活性。结果:与模型组比较,清燥救肺汤高、中、低剂量组及化疗组瘤质量,乳酸含量显著降低(P0.01);清燥救肺汤高、中、低剂量组及化疗组中肺癌细胞C-myc蛋白表达,LDH-A活性明显降低(P0.05,P0.01);清燥救肺汤高、中剂量组及化疗组HIF-1α蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:清燥救肺汤可通过抑制HIF-1α蛋白表达,导致C-myc蛋白表达下调,从而降低LDH-A活性,减少肺癌细胞糖酵解乳酸的生成,从而达到抑制荷Lewis小鼠肺癌细胞增殖的功效。     

一贯煎抗肝癌的方剂配伍分析

中医学认为肝癌病机为阴虚肝郁,临床上的肝癌患者亦多表现为阴亏液涸伴肝气郁结,治疗应滋阴疏肝。一贯煎为滋阴代表方,主治肝肾阴虚,肝气郁滞证,在肝癌防治中效果显著,本文尝试通过分析一贯煎方剂配伍特点,提出该方中川楝子既为佐助药,又为佐制药,在一贯煎抗肝癌中起到了重要作用。     

腰硬联合麻醉剖宫产术后给予盐酸曲马多的镇痛效果及对产后泌乳功能的影响

目的探讨剖宫产术后给予盐酸曲马多的镇痛效果及对产妇产后泌乳功能的影响,为临床剖宫产产妇寻找安全、有效的镇痛方案。方法选取2018年5月-2019年6月在该院行腰硬联合麻醉的剖宫产产妇220例为研究对象,均为足月产妇。按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组各110例。对照组术后给予吗啡硬膜外镇痛,观察组术后给予盐酸曲马多静脉镇痛。采用视觉模拟评分法(VAS)评价两组术后镇痛效果,检测两组产妇血清、尿液、乳汁及新生儿产后24 h尿液中药物含量。记录两组开奶时间、开始泌乳时间及哺乳次数,检测两组血清皮质醇(Cor)和泌乳素(PRL)水平。记录两组新生儿呼吸、心率及睁眼时间,并记录不良反应。结果观察组产妇术后6 h、12 h、24 h、48 h时VAS评分均明显低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。观察组产妇产后24 h血清和尿液中曲马多含量分别为(442.91±123.62)ng/ml、(26.01±10.32)μg/ml;乳汁中未检出曲马多;新生儿产后24 h尿液中检出曲马多者6例,平均为(0.26±0.06)μg/ml。对照组产妇产后24 h血清和尿液中吗啡含量分别为(0.32±0.08)μg/ml、(0.21±0.08)μg/ml;乳汁中检出吗啡含量平均为(0.15±0.05)μg/ml;新生儿产后24 h尿液中检出吗啡者7例,平均为(0.06±0.02)μg/ml。观察组产妇开奶时间<24 h率明显高于对照组,开始泌乳时间、48 h哺乳次数明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组产妇术后6 h、12 h、24 h、48 h时Cor水平均明显低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。观察组产妇术后6 h、12 h、24 h、48 h时PRL水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。两组新生儿呼吸、心率及睁眼时间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组均未发生明显不良反应。结论腰硬联合麻醉剖宫产术后给予盐酸曲马多具有较好的镇痛效果,有助于产妇产后泌乳功能的改善,尽管有药物进入新生儿体内,但药物药量较少,对新生儿无明显影响,具有一定安全性。     

六味地黄汤辅助环磷酰胺对荷H22肝癌小鼠MMP9、NF-KB表达的影响

目的:观察六味地黄汤辅助环磷酰胺对荷H22肝癌小鼠MMP9、NF-KB表达的影响。方法:雄性昆明小鼠40只,随机分为模型组、化疗组、六味组、六味化疗组,每组10只。腋下注射H22细胞建立H22荷瘤模型,六味组造模前两周开始用药(剂量为22g/kg·d),化疗组(剂量为50mg/kg·d,隔日1次)及六味化疗组造模后用药,造模14d后处死小鼠称重,取瘤组织称重计算抑瘤率,取脾组织称重计算脾指数,免疫组化检测MMP9、NF-k B蛋白的表达。结果:化疗组及六味化疗联合组具有明显的抑瘤作用,与模型组比较有统计学意义(P<0.01),与六味组比较,有统计学意义(P<0.05);六味组脾指数增大,与模型组及化疗组比较,均有统计学意义(P<0.05),六味化疗联合组的脾指数均高于化疗组,有显著性差异(P<0.01);与模型组比较六味化疗联合组MMP9蛋白表达水平显著下降(P<0.05),六味、化疗、六味化疗联合均可显著降低NF-k B蛋白的表达水平,与模型组比较,有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:六味地黄汤辅助环磷酰胺可提高动物免疫功能,其抗肝癌的协同机制可能不是通过NF-KB,而是通过降低肝癌组织MMP9蛋白表达来实现。     

清燥救肺汤对荷Lewis小鼠肺癌细胞糖酵解关键限速酶HK2，PFK2，PKM2的影响

目的:观察清燥救肺汤对荷Lewis小鼠肺癌细胞糖酵解关键限速酶己糖激酶2(hexokinase 2,HK2),6-磷酸果糖激酶2(phosphofructokinase,PFK2),M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase isoform M2,PKM2)的表达及葡萄糖含量的影响。方法:雄性C57BL/6J小鼠50只,随机分为模型组,环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)组,清燥救肺汤高、中、低剂量组,每组10只。所有小鼠右腋下注射Lewis肺癌细胞建立肺癌荷瘤模型,清燥救肺汤高、中、低剂量组剂量分别为11,5.5,2.75 g·kg^-1·d^-1,造模前2周开始灌胃给药,CTX组以50 mg·kg^-1·(2 d)-1腹腔注射给药,模型组以等体积生理盐水灌胃给药,接种后继续给药2周,处死小鼠取瘤组织;氧化酶法检测葡萄糖含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测HK2 mRNA表达;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测PFK2蛋白表达;酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunesorbent assay,ELISA)检测PKM2活性。结果:与模型组比较,清燥救肺汤高、中、低剂量组肺癌细胞HK2 mRNA表达及PKM2活性显著降低,葡萄糖含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,清燥救肺汤高、中剂量组肺癌细胞PFK2蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:清燥救肺汤可有效抑制荷Lewis肺癌细胞增殖,降低肺癌细胞葡萄糖摄取速率,糖酵解关键限速酶HK2,PFK2,PKM2可能是其药效作用靶点。     

清燥救肺汤对肺癌JAK2/STAT3信号通路及其下游凋亡相关蛋白表达的影响

目的:观察清燥救肺汤对肺癌细胞凋亡和Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录活化因子3(STAT3)信号通路及其下游凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax),细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达的影响。方法:雄性C57BL/6J小鼠50只,随机分为环磷酰胺(CTX)组,模型组,清燥救肺汤高、中、低剂量组,共5组,每组10只。在小鼠右腋下注射Lewis肺癌细胞建立肺癌荷瘤模型,清燥救肺汤高、中、低剂量组分别以清燥救肺汤11,5.5,2.75 g·kg^-1·d^-1,造模前2周开始灌胃给药,CTX组以CTX 50 mg·kg^-1·(2 d)-1腹腔注射给药,模型组以等体积的生理盐水灌胃给药,接种后继续给药,2周后处死各组小鼠并取瘤组织;免疫组化法(IHC)检测肺癌组织JAK2蛋白磷酸化水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测STAT3,Bax,Cyclin D1的表达;透射电镜(TEM)观察肺癌细胞的凋亡情况。结果:与模型组比较,清燥救肺汤高、中剂量组,CTX组肺癌细胞JAK2,STAT3蛋白磷酸化水平明显降低,Bax蛋白表达明显升高,Cyclin D1蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。透射电镜结果显示,与模型组比较,清燥救肺汤高、中、低剂量组和CTX组均出现显著的凋亡现象。结论:清燥救肺汤能明显促进肺癌细胞凋亡,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路,上调其下游Bax蛋白表达,下调其下游Cyclin D1蛋白表达有关。     

川楝子配伍对一贯煎抑制荷H22小鼠肝癌细胞增殖的影响＊

目的 对比研究一贯煎，一贯煎去川楝子，川楝子对荷H22小鼠肝癌细胞增殖及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（B-celllymphoma/Leukemia-2，Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、细胞色素C（Cyt-c）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白表达的影响。方法 小鼠随机分为模型组，环磷酰胺（cyclophosphamide， CTX）组（50 mg·kg^-1），一贯煎组（23 g·kg^-1），一贯煎去川楝子组（21 g·kg^-1），川楝子组（0.1 g·kg^-1）。雄性KM小鼠每组10只右侧腋下皮下注射H22细胞构建肝癌荷瘤模型，CTX组造模后腹腔注射给药，隔日一次，共7次，余组造模前后14天均灌胃给药，统计各组瘤重。原位末端标记法（TUNEL）检测肿瘤细胞凋亡；蛋白免疫印记法（Western blot）检测Bax、Bcl-2、Cyt-c、Caspase-3蛋白表达。结果 与模型组比较，CTX组，一贯煎组，一贯煎去川楝子组，川楝子组瘤重均降低（P<0.01），肝癌细胞凋亡率均升高（P<0.01），Bax、Caspase-3和Cyt-c蛋白表达均升高（P<0.05或P<0.01），CTX组、一贯煎组Bcl-2蛋白表达降低（P<0.01）；与一贯煎组比较，一贯煎去川楝子组、川楝子组瘤重、Bcl-2蛋白表达升高（P<0.05），肝癌细胞凋亡率和Bax、Caspase-3蛋白表达降低（P<0.05或P<0.01）；与一贯煎去川楝子组比较，川楝子组肝癌细胞凋亡率，Cyt-c、Caspase-3蛋白表达均升高（P<0.01），Bcl-2蛋白表达降低（P<0.01）。结论 一贯煎中川楝子配伍能明显增强该方抑制肝癌细胞增殖的功效，其机理可能与升高Bax、Caspase-3和Cyt-c蛋白表达，降低Bcl-2蛋白表达，进而促进肝癌细胞凋亡有关。     

抑制AMPK观察清燥救肺汤对肺癌细胞自噬启动相关蛋白表达的影响

目的 观察应用腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抑制剂（compound C）后，清燥救肺汤对肺癌细胞自噬启动相关蛋白AMPK，哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR），UNC-51样激酶1（ULK1）表达的影响。方法 雄性C57BL/6J小鼠随机分为模型组，环磷酰胺（CTX）组（50 mg·kg^-1），清燥救肺汤组（11 g·kg^-1），AMPK抑制剂组（10 mg·kg^-1），清燥救肺汤加AMPK抑制剂组（清燥加抑制剂组）（11 g·kg^-1+10 mg·kg^-1）。小鼠右腋皮下注射Lewis肺癌细胞构建肺癌荷瘤模型。造模24 h后，CTX组腹腔注射给药，隔日1次，共7次，AMPK抑制剂组与清燥加抑制剂组腹腔注射compound C，每日1次，共14 d。清燥救肺汤组和清燥加抑制剂组，造模前后14 d均以中药设定剂量灌胃给药。实验结束后处死各组小鼠并取荷瘤组织，统计各组瘤质量；透射电镜（TEM）观察各组肺癌组织自噬溶酶体的生成情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测AMPK，磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK），mTOR，磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR），ULK1，磷酸化UNC-51样激酶1（p-ULK1），微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）和p62蛋白的表达；苏木素-伊红（HE）染色观察各组肺癌组织病理学变化。结果 与模型组比较，清燥救肺汤组瘤质量降低（P<0.01），电镜下发现自噬溶酶体生成，p-AMPK，p-ULK1，LC3B，LC3B-Ⅱ蛋白表达和p-AMPK/AMPK，p-ULK1/ULK1，LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ均升高（P<0.05，P<0.01），p-mTOR，p62蛋白表达和p-mTOR/mTOR均降低（P<0.05）。与清燥救肺汤组比较，清燥加抑制剂组电镜下未见自噬溶酶体生成，p-AMPK，p-ULK1，LC3B，LC3B-Ⅱ蛋白表达和p-AMPK/AMPK，p-ULK1/ULK1，LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ均明显降低（P<0.05，P<0.01），p62蛋白表达升高（P<0.05）。HE染色结果显示，各给药组肺癌组织与模型组比较，病理有明显改善。结论 清燥救肺汤能促进自噬发生标志蛋白LC3B-Ⅱ升高及p62蛋白表达降低从而诱导自噬发生，其自噬启动机制可能不是调控AMPK/mTOR/ULK1通路介导，而是通过AMPK/ULK1通路实现的。