大肠杆菌亚型致脓毒症模型比较研究

目的 探讨不同种类大肠杆菌诱导的脓毒症模型损伤程度。方法 将152只小鼠随机数字表法分为对照组、DH5α 组、44102 组和 25922 组,每组 38 只。DH5α 组、44102 组和 25922 组分别腹腔注射 300 μL 浓度为 1.0×109CFU/kg的大肠杆菌DH5α、44102和25922,以不同种类大肠杆菌诱导脓毒症模型,对照组腹腔注射等体积生理盐水。（1）造模8 h后,每组各取4只小鼠,进行外周血细菌培养,计算细菌菌落数。（2）造模12 h后,通过酶联免疫吸附试验（ELISA）的方法检测血清中肿瘤坏死因子（TNF）-α、白介素（IL）-6水平（每组10只）;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）测定血清中晚期炎症因子高迁移率族蛋白1（HMGB1）水平（每组4只）;使用自动生化分析仪检测血清中丙氨酸 转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、尿素氮（BUN）、血肌酐（CR）水平（每组10只）;取肺肝肾组织经甲醛固定后,进行苏木精-伊红（HE）染色（每组10只）。结果 DH5α组、44102组、25922组细菌菌落形成数量,炎症因子TNF-α、IL-6以及HMGB1蛋白,肝肾功能指标ALT、AST、CR、BUN均呈依次增高趋势（P＜0.01）。DH5α组、44102组、25922组的肺泡结构损伤程度、肝炎性细胞浸润程度及肾小球萎缩程度由重到轻依次为25922组、44102组、DH5α组,对照组肺、肝、肾组织无明显损伤。结论 大肠杆菌25922诱导脓毒症模型损伤严重,可用于研究脓毒症初期炎症风暴阶段的动物模型;大肠杆菌44102诱导脓毒症模型损伤适中,可用于无需限定脓毒症分期实验的动物模型;大肠杆菌 DH5α诱导脓毒症模型损伤较轻,可用于探索脓毒症免疫抑制期治疗方法的动物模型。     

血必净对免疫抑制脓毒症模型的保护作用

目的 观察血必净对免疫抑制脓毒症小鼠的影响。方法 使用随机数字表法将152只小鼠分为对照组（Control）、免疫抑制组（IM）、免疫抑制脓毒症模型组（ISM）、血必净治疗组（XT）,每组38只小鼠。IM组沿下腹正中线旁边腹腔注射环孢素A免疫抑制,25 mg/kg,隔日1次,共3次。ISM组免疫抑制后沿下腹正中线旁边腹腔注射300 μL浓度为1×109 CFU /mL的大肠杆菌44102;XT组免疫抑制脓毒症造模后30 min,沿下腹正中线旁边腹腔注射血必净4mL/kg,30 min后按相同剂量重复注射1次;Control组注射等体积的生理盐水。（1）造模8 h,各组取4只小鼠,进行血细菌培养。（2）造模12 h,各组取10只小鼠,使用流式细胞法检测外周血CD3+CD4+和CD3+CD8+。（3）造模12 h,各组取10 只小鼠,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测外周血肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6。（4）造模12 h,各组取4只小鼠,采用蛋白免疫印迹法测定高迁移率蛋白（HMGB1）。（5）造模12 h,各组取10只小鼠,使用全自动分析仪检测外周血丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、尿素氮（BUN）、血肌酐（CR）。结果 与ISM组相比,XT组的CD3+CD4+/CD3+CD8+的比值明显升高,血细菌培养数量明显降低;肝肾功能指标ALT、AST、CR、BUN和炎症指标TNF-α、IL-6、HMGB1均明显下降。结论 血必净能够明显调节免疫抑制脓毒症小鼠的免疫系统,对抗细菌,抑制炎症反应,并对重要器官有保护作用。