4种丹参酮类化合物对U266细胞增殖的抑制作用及机制

目的 研究丹参酮ⅡA(TAⅡA)、丹参酮Ⅰ(TAⅠ)、隐丹参酮(CTA)及二氢丹参酮Ⅰ(DIA Ⅰ)对U266细胞的增殖抑制作用及其可能的机制.方法 采用CCK法检测4种丹参酮类化合物对U266细胞的增殖抑制率,用Annexin-V-FITC/PI检测细胞的凋亡,用PI法检测细胞周期;收集多发性骨髓瘤患者的骨髓标本,分离培养间充质干细胞(MSCs),用流式细胞仪检测4种丹参酮类化合物对MSCs分泌白介素6(IL-6)的影响.结果 4种丹参酮类化合物对U266细胞的增殖均有抑制作用;DIA Ⅰ较其余3种化合物的作用更强,引起细胞早期凋亡较多,细胞周期被阻滞在S期;DIAⅠ能明显抑制IL-6的分泌,其余3种化合物对IL-6的分泌作用无统计学意义.结论 DIA Ⅰ能明显抑制多发性骨髓细胞株U266的增殖,其抑制作用可能是通过抑制MSCs分泌IL-6而实现的.     

丙吡胺的分光光度法测定

丙吡胺（disopyramide，1）属于IA类抗心律失常药，即钠离子通道阻断剂。1可用毛细管电泳法（CE）和HPLC法测定，但仪器价昂。本研究拟建立一种易于普及的可见分光光度法测定1。经试验以Feigl氏方法为基础进行测定最为适宜。Feigl氏法原理如下：RCONH2＋H2O＋H^＋→RCOOH＋NH4^＋。     

14色流式检测人外周血白细胞亚群方案的建立

目的 建立14色流式检测人外周血中白细胞亚群方案.方法 用细胞膜表面抗体CD45、CD3、CD4、CD8、CD19、CD56、CD16、CD14、CD25、CD127、HLA-DR、CD123、CD11c和核酸染料DAPI建立14色流式染色方案,检测人外周血白细胞主要细胞亚群.取健康成年志愿者外周血标本分别对各抗体进行...     

急性白血病患者八色流式免疫表型分析起始管方案的建立

目的建立急性白血病(AL)患者八色流式免疫表型分析起始管方案。方法用胞膜CD3(CD3)、CD19、CD10、CD34、CD45、胞浆CD79a(cCD79a)、髓过氧化物酶(MPO)和胞浆CD3(cCD3)等8种抗体建立八色流式染色方案。膜表面抗体直接染色;膜内抗体经固定破膜,再染色后上机检测。将3个血小板减少患者骨髓标本分别进行抗体的单色染色和缺一色染色;最后对17例确诊的AL初发患者标本进行检测。结果用单色染色来确定染色方案中各抗体的检测电压及荧光补偿;缺一色染色中,阳性细胞群较单色染色变化均<10%,表明方案中的各抗体相互作用小。17例AL初发患者中,6例急性B淋巴细胞白血病原始细胞均为CD34和CD19阳性,5例cCD79a阳性和4例CD10阳性;4例急性T淋巴细胞白血病患者均为cCD3阳性;6例急性髓细胞白血病均为CD34和MPO阳性;1例B+T混合表型AL患者CD34、cCD3、CD19、cCD79a及CD10均为阳性,MPO和CD3为阴性,此检测方案能够确定各类AL的细胞类型。结论建立了AL患者八色流式免疫表型分析起始管方案,操作简便快速,适用于临床检测。     

建立九色流式检测人外周血中TCR Vβ淋巴细胞亚群活化及凋亡方案

目的 建立九色流式方法检测人外周血中TCR Vβ淋巴细胞亚群活化及凋亡状态的方案。 方法 用细胞膜表面抗体CD3、CD4、CD8、CD95、CD69、磷脂结合蛋白Annexin-Ⅴ、TCR Vβ抗体试剂盒和细胞核染料DAPI建立九色流式染色方案。用1例健康成年人外周血标本分别进行抗体滴度实验、最适检测电压选择、单色染色和缺一色染色,确定条件后,对8例健康成年人外周血标本进行检测分析。 结果 根据细胞分群情况选择了合适的抗体滴度和检测电压,单色染色和缺一色试验确定了适宜补偿,建立了九色流式检测人外周血中TCR Vβ淋巴细胞亚群活化及凋亡状态的方案;采用此方案检测的8例健康成年人标本,TCR Vβ亚群分布与TCR Vβ抗体试剂盒说明书及文献报道分布一致,并能分析各TCR Vβ亚群细胞活化及凋亡状态。 结论 建立的九色流式方案可检测人外周血中TCR Vβ淋巴细胞亚群活化及凋亡状态,操作简便,结果可靠。     

胃癌患者外周血中CD45^–CD44^+CD54^+细胞亚群含量及其临床意义

目的以胃癌肿瘤干细胞标志物CD44和CD54为靶点,利用流式细胞术检测胃癌患者外周血中CD45~–CD44^+CD54^+细胞亚群含量,并结合临床病理学特征分析其临床意义。方法纳入2016年12月至2017年9月期间四川大学华西医院胃肠外科38例胃癌患者作为研究对象,利用流式细胞术检测其外周血中CD45~–CD44^+CD54^+细胞亚群含量,并分析其临床意义。结果 38例患者的CD45~–CD44^+CD54^+细胞中位数为541.9个/mL(71.7~8 057.0个/mL),其中R0组为555.9个/mL(71.7~8 057.0)个/mL。CD45~–CD44^+CD54^+细胞中位数TNMⅠ–Ⅱ期患者为858.6个/mL(183.5~8 057.0个/mL),高于TNMⅢ–Ⅳ期患者的364.6个/mL(71.7~2 269.7个/mL),P=0.015;N0组为941.4个/mL(183.5~8 057.0个/mL,高于N^+组的379.3个/mL(71.7~2 269.7个/mL),P=0.002。T3–4期(P=0.025)、N^+期(P=0.009)和TNMⅢ–Ⅳ期(P=0.012)的患者中CD45~–CD44^+CD54^+高细胞量亚组所占比例较低。联合CD45~–CD44^+CD54^+细胞量和肿瘤大小可以对N分期和TNM分期做出更准确的判断,但其与其他临床病理学特征和预后无显著相关。结论 CD45~–CD44^+CD54^+细胞亚群数量与肿瘤进展之间有相关性,可能用于判断TNM分期和N分期,但本研究纳入样本较少,仍需扩大样本论证其在胃癌患者中的临床意义。     

4种固定破膜试剂盒检测人调节性T淋巴细胞的结果比较

目的比较4种固定破膜试剂盒检测人调节性T淋巴细胞的效果。方法选择CD4、CD25和叉状头转录因子3(Foxp3)3种抗体建立流式调节性T淋巴细胞检测方案。采集10例健康人的新鲜外周血分离单个核细胞,先标记膜表面抗体CD4与CD25,再分别用BD Pharmingen、eBioscience、Invitrogen及Beckman Coulter 4种的固定破膜试剂盒对细胞固定破膜,最后标记Foxp3抗体上机检测。结果与未固定破膜的相应样品比较,4种试剂盒均对细胞的形态有较明显的影响,但对膜表面抗体CD4和CD25的表达没有明显影响。采用eBioscience固定破膜试剂检测调节性T淋巴细胞(CD4~+CD25~+Foxp3~+)的比例为(8.22±2.75)%;Beckman Coulter为(0.54±0.48)%;BD Pharmingen为(0.69±0.33)%;Invitrogen为(0.41±0.24)%。结论 4种试剂盒的固定效果相近,eBioscience固定破膜试剂盒对胞内Foxp3具有较好的检测效果,更适合用于检测调节性T淋巴细胞。