抗表皮生长因子受体单链抗体联合放化疗治疗裸鼠移植胰腺癌的研究

目的 针对表皮生长因子受体(EGFR)的腺相关病毒(AAV)介导的靶向治疗作为一种新的治疗方式具有广阔的前景.实验通过对胰腺癌细胞株Aspc-1进行抗EGFR抗体的重组腺相关病毒(rAAV-anti EGFR)治疗及联合放疗、吉西他滨(简称化疗)等综合治疗手段,探索rAAV介导抗EGFR单链抗体对胰腺癌治疗的效果.方法 分别通过单纯化疗、单纯放疗、rAAV-anti EGFR治疗,rAAV-anti EGFR治疗联合化疗、rAAV-anti EGFR治疗联合放疗、rAAV-anti EGFR治疗联合放化疗干预胰腺癌细胞株Aspc-1及裸鼠移植瘤,检测细胞或移植瘤的凋亡率以及移植瘤生长情况.结果 体外实验提示,以上处理方式使肿瘤细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.05),rAAV-anti EGFR治疗联合放化疗细胞凋亡率要高于rAAV-anti EGFR治疗、单纯放疗或单纯化疗(P＜0.05).体内实验提示,rAAV-anti EGFR治疗后,肿瘤生长明显受到抑制(P＜0.05),且与放疗和化疗均有协同作用;rAAV-anti EGFR治疗后,组织中凋亡相关Caspase-3活性蛋白表达细胞数要显著高于对照组(P＜0.05),rAAV-anti EGFR治疗联合放疗或化疗其凋亡蛋白表达细胞数要多于单纯治疗组(P＜0.05).结论 rAAV-anti EGFR治疗在体内外均有良好的抗胰腺癌效应,其联合放化疗疗效优于单纯放疗或单纯化疗,且该病毒载体与化疗及放疗具有协同作用.     

抗表皮生长因子受体单抗基因治疗胰腺癌的实验研究

目的EGFR靶向治疗和AAV介导的基因治疗在胰腺癌治疗方面具有广泛前景。本实验将上述两种手段相结合，构建表达人抗EGFR单链可变区抗体的rAAV载体，并筛选出对抗EGFR治疗敏感的胰腺癌细胞株。方法以包含人IX因子基因的rAAV载体中的FIX基因替换成目的基因，转染293细胞，WesternBlot法检测目的蛋白：同时将C225作用于六株胰腺癌细胞，通过CCK一8法测定生长曲线，P1染色法及AnnexinV-FITC试剂盒检测细胞凋亡。结果WesternBlot法检测到目的条带；生长曲线显示C225仅对AsPC-l的生长有明显的抑制作用（P〈0.01），Annexin V-FITC试剂盒可检测C225引起ASPSl细胞的早期凋亡（P〈0.05）。结论rAAV载体构建成功，并在293细胞中获得表达；ASPSl对C225的敏感性明显高于其它五株胰腺癌细胞。     

细胞凋亡显像剂^99mTc-膜联蛋白V的制备与体内分布

将本室改造的毕赤酵母接入100ml BMGY培养基培养24h，离心收集酵母细胞并重悬于100ml BMMY培养基，每12小时加入终浓度为0．5％甲醇诱导表达具有内在金属螯合位点的突变型人膜联蛋白V。48h后离心沉淀培养基，获得的上清经硫酸氨沉淀、分子筛分离纯化蛋白；SDS—PAGE鉴定其相对分子质量为36000，并测定其纯度为95％。纯化后的蛋白加入终浓度为1mmol／L二硫苏糖醇，37℃保温15min恢复活性，     

细胞凋亡显像剂99mTc-膜联蛋白Ⅴ的制备与体内分布

将本室改造的毕赤酵母接入100ml BMGY培养基培养24h,离心收集酵母细胞并重悬于100ml BMMY培养基,每12小时加入终浓度为0.5%甲醇诱导表达具有内在金属螯合位点的突变型人膜联蛋白V。48h后离心沉淀培养基,获得的上清经硫酸氨沉淀、分子筛分离纯化蛋白;SDS-PAGE鉴定其相对分子质量     

川芎哚及其类似物的抗血小板与抗血栓作用

为了研究川芎哚 (PL)及其类似物 (T 1～T 17)的抗血小板和抗血栓作用 ,T 1～T 17按Foye法进行体外血小板聚集实验 ,计算血小板聚集抑制率 ,从中选出T 1,T 2 ,T 3,T 4 ,T 6 ,T 8,T 11,T 12及T 14按Chandler法进行实验性血栓形成实验 ,计算血栓形成抑制率 ,并与川芎嗪 (Lig)进行比较 .结果表明 :所有合成药物均有一定程度的抗血小板作用 ,其中T 4和T 6的抗血小板作用强于Lig ;各试验药物均有一定程度的抗血栓作用 ,其中T 4 ,T 6 ,T 11,T 12及T 14抗血栓作用强度大于Lig .由此可见 ,PL及其类似物具有抗血小板和抗血栓作用 ,其中T 4和T 6的作用强于Lig ,但PL的作用弱于Lig     

基因重组人表皮生长因子在兔体、眼内的分布与排泄实验研究

表皮生长因子(ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＥＧＦ)是相对分子量6040的小肽,生物作用极广,具有诱导上皮生长、刺激血管形成、抑制胃酸的分泌、调节内分泌、促进发育、加速伤口及溃疡愈合等作用,它的临床治疗学潜力正在研究。近年来已通过基因工程在大肠杆菌或酵母中制备大量ＥＧＦ,目前有关ＥＧＦ的基础与临床研究国外报道较多,但有关ＥＧＦ在体内的分布、代谢、排泄及其药代动力学过程研究较少,国内尚未见报道。本文对国产ＥＧＦ在动物体内及眼内的分布、排泄等做了较为系统的研究,为今后的临床应用提供必要的参考资料。1…     

气相色谱—质谱法测定川芎哚血药浓度

目的 :建立测定大鼠血浆样品中川芎哚浓度的气相色谱 -质谱 (GC -MS)定量分析方法。方法 :血浆样品经乙醚 -异丙醇 (10∶1)提取、硅烷化处理后 ,选择GC -MS选择性离子和辅助定量离子监测。结果 :本法线性范围为 2～ 6 0ng·mL-1,灵敏度为 1ng·mL-1,回收率达 82 % ,日内日间RSD均小于 9 0 %。结论 :本法为川芎哚临床药代动力学研究提供了准确、可靠的方法。     

川芎哚大鼠体内代谢转化研究

目的　研究川芎有效成分川芎哚在大鼠体内的代谢转化。方法　分别ig川芎哚和［2-¹⁵N］川芎哚后,尿样经酶水解、碱化、有机溶剂提取。有机相(碱性和中性部分)经浓缩并硅烷化;水相经酸化、提取(提取物为酸性水溶部分)并硅烷化,用GC-MS测定。结果　在碱性和中性提取物中,检出原型川芎哚及其一种代谢物;在酸性水溶性提取物中,检出川芎哚的另两种代谢物。结论　川芎哚体内代谢途径可能是川芎哚羟基化和川芎哚羟甲基的氧化。     

川芎哚药代动力学参数的稳定同位素法测定

目的　测定川芎哚 (川芎III号碱 ,perlolyrine)的药动学参数。方法　以氘标川芎哚为内标准及GC MS的SIM(选择性离子监测 )为检测手段 ,定量测定大鼠体内川芎哚的含量及其药代动力学参数。结果　川芎哚在大鼠体内呈二室模型分布 ,其药代动力学参数为 :T1/ 2α=0 34h ,T1/ 2 β=4 5 9h ,T1/ 2 (Ka) =0 12h ,Tmax=0 36h ,Cmax=18 86μg·L-1,K12 =0 87h-1,K2 1=0 40h-1,K10 =0 31h-1,VB=10 7 86L·kg-1,AUC =99 6 8μg·h·L-1。结论　本法灵敏度高、特异性强和准确性好 ,为临床应用提供了科学依据。