雷公藤的免疫抑制活性及毒性的谱效关系研究

目的:通过谱效分析探讨雷公藤药材提取物高效液相色谱图中免疫抑制活性及肾毒性相关色谱峰,为确定雷公藤免疫抑制活性及毒性物质基础提供依据。方法:对8个产地雷公藤药材分别进行提取纯化,采用高效液相色谱法(HPLC)建立各产地雷公藤提取物的指纹图谱。利用密度梯度离心法分离新鲜人外周血单个核细胞(PBMC),给予凝集素(PHA)和脂多糖(LPS)共刺激造模,分为空白组、模型组(PHA+LPS)、雷公藤处理组。给予雷公藤处理48 h后检测上清中IFN-γ和IL-2的含量,并计算IC₅₀值。以小鼠肾小球系膜细胞(GNM-SV40)为模型利用CCK 8法考察雷公藤的肾毒性,计算IC₅₀值。将各产地雷公藤的指纹图谱信息及免疫抑制药效、细胞毒性数据进行标准化处理后利用偏最小二乘法进行谱效关系分析。结果:免疫抑制药效试验中,雷公藤提取物可显著抑制PHA和LPS诱导PBMC免疫细胞因子IFN-γ和IL-2的分泌(P<0.05),不同产地雷公藤免疫抑制药效差异较大,其中以福建、湖南和云南产雷公藤药效最强。体外肾毒性研究结果显示,福建、湖南和云南产雷公藤毒性较大,但其IC₅₀值要远远高于免疫抑制IC₅₀值(90倍以上)。根据基于偏最小二乘法的谱效分析结果显示,以IFN-γ IC₅₀值为毒性指标时,1,8,5,3,2号峰为主要贡献峰(回归系数绝对值>0.3);当以IL-2 IC₅₀值为毒性指标时,1,8,3,5号峰为主要贡献峰(回归系数绝对值>0.3),16~29号峰为次要贡献峰(回归系数绝对值<0.3);当以体外肾毒性GNM-SV40细胞IC₅₀值为毒性指标时,1,8,3号峰为主要贡献峰(回归系数绝对值>0.3),15~29号峰为次要贡献峰(回归系数绝对值<0.3)。结论:1,3,8号峰既是主要的药效峰又是主要的毒性峰,2和5号峰为主要药效无毒峰,15~29号峰对药效和毒性都有一定的贡献,但都较小。     

雷公藤毒性作用机制研究进展

目的:介绍近年来对雷公藤毒性作用机制的研究进展,探讨雷公藤成分与毒性的关系,为临床合理使用雷公藤及其制剂提供指导。方法:系统查阅近年来的国内外文献, 综述关于雷公藤毒性作用机制的研究进展情况。结果:雷公藤毒性涉及多器官多系统,其毒性成分同时也是药效成分,雷公藤毒性作用机制的研究对雷公藤高效低毒制剂研发有指导意义,并为指导临床合理用药提供理论依据。结论:雷公藤毒性作用机制的研究已逐渐成为雷公藤研究的热点并取得了很多进展,但由于化学成分的复杂性及中药药理的整体性目前关于雷公藤毒性作用机制的研究还不够完善和系统,尚需进一步研究。     

雷公藤不同乙醇提取物指纹图谱及与大鼠肾小球系膜细胞的谱效关系研究

摘 要 目的：探讨雷公藤不同乙醇提取物中对大鼠肾小球系膜细胞（GMC）有增殖影响的活性成分。方法: 采用HPLC法建立5个不同乙醇浓度雷公藤提取物的指纹图谱,选择大鼠肾小球系膜细胞模型进行药效学研究,考察不同乙醇浓度雷公藤提取物对大鼠肾小球系膜细胞的增殖影响。采用偏最小二乘回归分析法分析谱效关系。结果: 建立了5个不同乙醇浓度雷公藤提取物的HPLC指纹图谱,并从HPLC指纹图谱中提取出32个能够表征含量差异的特征峰。药效研究结果表明,60 %、70 %、95 %乙醇提取物和雷公藤多苷片组均呈现一定的量效关系,随着给药量增加,细胞增殖的抑制作用越大。中、高剂量的60%提取物组的吸光度值均低于同剂量其他各提取物。采用偏最小二乘回归分析法以大鼠肾小球系膜细胞增殖抑制率为“药效”指标时,高剂量（40 μg·L^-1）下有20个峰为药效峰;中剂量（20 μg·L^-1）下有17个峰为药效峰;低剂量（10 μg·L^-1）下有15个峰为药效峰。结论:部分药效峰随着给药剂量的变化,呈现一定规律的量效关系。     

白子草多糖的分离、纯化及初步分析

对白子草中的多糖进行分离纯化,并对得到的多糖组分的理化性质进行分析。将脱脂后的白子草药材经热水提取,乙醇沉淀,木瓜蛋白酶-Sevag法去蛋白后,再经DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱色谱分离,透析除盐纯化得白子草多糖,采用高效液相色谱法,红外光谱和¹H-NMR对其进行组成研究和分析。白子草多糖中的GDPs-2的纯度为87.3%,相对分子质量为2.03×10⁴ Da;GDPs-3的纯度为90.9%,相对分子质量为4.29×10⁴ Da。红外光谱无法确定GDPs-2是否有α构型的呋喃糖苷,但提示GDPs-3可能有α构型的呋喃糖苷键,¹H-NMR分析初步判断GDPs-2和GDPs-3的糖苷键连接方式均为α型。GDPs-2由葡萄糖醛酸和木糖组成,摩尔比为1.1:0.63;GDPs-3由鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖、木糖和半乳糖醛酸组成,摩尔比为0.32:6.0:0.21:1.75:4.3。