从电鳐电器官中提取N2-AchR纯品建立EAMG模型

目的从厦门海域单鳍电鳐的电器官中提取烟碱型乙酰胆碱受体（N2-AchR）纯品,用纯化的N2-AchR免疫Lewis大鼠,建立实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）动物模型。方法参照文献报道从电鳐电器官提取N2-AchR纯品,并采用SDS凝胶电泳蛋白定性鉴定及考马斯亮兰定蛋白含量;以纯提的蛋白主动免疫Lewis大鼠,共免疫3次,于末次免疫后第3日进行EAMG大鼠临床评分及攀网时间、肌电图、血清N2-AchRab含量、突触后膜上N2-AchR数目的检测。结果纯化的蛋白含量为1.097mg/ml（标准品为1mg/ml）;EAMG模型组与佐剂组比较,攀网时间明显降低（P〈0.01）;临床评分及肌电图第五个反应幅度衰减百分率显著升高（P〈0.01）;血清N2-AchRab含量明显增加（P〈0.01）;突触后膜上N2-AchR数目显著减少（P〈0.01）。结论从单鳍电鳐电器官纯提的N2-AchR蛋白成功诱导EAMG模型,为进一步研究重症肌无力创造了良好条件。     

脓毒性肺栓塞3例报告并文献复习

目的 提高临床医师对脓毒性肺栓塞的认识及争取早期诊断和治疗.方法 对3例脓毒性肺栓塞病例的临床表现、影像学特征、基础疾病、并发症、实验室检查等方面进行病例分析及文献复习.结果 3例脓毒性肺栓塞均有发热、咳嗽、咯痰等症状.影像学上表现为双肺靠近胸膜处结节状、斑片状阴影等改变,2例伴有空洞,其中1例伴有气囊肿,2例伴有胸腔积液.基础疾病方面3例患者均通过心脏彩色多普勒确诊伴有感染性心内膜炎.并发症方面1例患者出现肾脏、眼底受损,2例患者伴有贫血.血培养仅有1例为阳性.结论 脓毒性肺栓塞是一种少见但严重的疾病,无特征性的临床表现,影像学上常有靠近胸膜多发结节状斑片状影,伴或不伴空洞形成.多有感染性心内膜炎等基础疾病,可出现肾脏、眼底等栓塞并发症,血培养阳性率较低.早期诊断及治疗对提高患者预后具有重要意义.     

猪到猕猴异种心脏移植超急性排斥反应的免疫学及病理学变化

目的观察猪到猕猴异种心脏移植超急性排斥反应时的免疫学及病理学变化。方法采用猪到猕猴腹腔内异位心脏移植模型,检测发生超急性排斥反应者的血液中补体、天然抗体及T淋巴细胞亚群的变化,并对移植心脏进行免疫组化(测定C3、C4、C5b9、IgG及IgM的沉积)及病理学分析。结果发生超急性排斥反应时,血清补体C3、C4的含量、总补体活性及抗猪内皮细胞天然抗体均有一定程度的下降;CD4 /CD8 T淋巴细胞的比率也有所下降;移植心脏中均有补体C3、C4、C5b9的沉积,IgG及IgM也均有沉积,但IgG和IgM沉积强度的差异无统计学意义;病理学改变主要为心肌间质弥漫性出血、水肿,毛细血管内普遍淤血。结论补体通过经典途径激活参与猪到猕猴异种心脏移植超急性排斥反应;超急性排斥反应时受者血中天然抗体水平明显下降;CD4 T淋巴细胞可能参与异种移植超急性排斥反应过程并有所消耗;发生超急性排斥反应的移植物突出病理表现为间质出血。     

蛇毒Ⅱ类磷脂酶A2功能分化的分析研究

目的：研究蛇毒Ⅱ类磷脂酶A2(PLA2)中D49 PLA2和K49 PLA2的功能分化及其功能分化决定位点的鉴定。方法：运用序列比较分析，进化树构建和DIVERGE v1．04软件计算研究D49 PLA2和K49 PLA2的功能分化情况及其分化位点。结果：序列比较分析，进化树构建和DIVERGE v1．04软件计算结果表明蛇毒Ⅱ类PLA2中D49 PLA2和K49 PLA2的确发生了功能分化，对于K49 PLA2来说，1S，7K，11Q，E12，R34，T56，N88，L92，E108，K116，K128可能为功能分化决定位点。对于D49 PLA2，L2，G33，G35，F46和Y118可能为功能分化决定位点。结论：我们首次通过序列比较分析，进化树构建和DIVERGE v1．04软件计算鉴定出蛇毒Ⅱ类PLA2中D49 PLA2和K49 PLA2可能的功能分化位点，为今后通过基因重组和定点突变方法研究蛇毒Ⅱ类PLA2结构功能关系提供了线索。     

7种蛇毒小肽对临床分离耐（多）药结核分枝杆菌的体外活性研究

 目的检测7种从蛇毒分离的小肽是否对临床分离的耐药性结核分枝杆菌菌株具有活性。方法放射性方法检测蛇毒小肽对结核分枝杆菌的最小抑制浓度，细菌存活计数确证放射性方法的结果。结果7种蛇毒小肽对耐药性结核分枝杆菌菌株都有活性。其MIC值分别为(μg·mL_-1)：Opiophagus hannah 5.4，Naja atra 8.6，Bungarus fasciatus 6.4，Trimeresurus stejnegri 12.6，Protobothrops mucrosquamatus 11.8，Protobothrops jerdonii 7，Agksistrodon halys 4.2。结论这些结果是首次报道，为进一步设计和开发新来源的抗结核病新药提供了依据。     

眼镜蛇毒高活性抗补体因子的体外溶血活性研究

目的　了解云南孟加拉眼镜蛇毒高活性抗补体因子的体外溶血活性。方法　采用由豚鼠血清、豚鼠红细胞和该抗补体因子组成的体外溶血体系 ,对其溶血活性、溶血活性稳定性以及多种二价金属离子、EDTA对其溶血活性的影响进行研究。结果　该抗补体因子溶血活性的比活力为 1 391KU·g- 1 ,其溶血活性对温度、酸碱表现出较好的稳定性 ,1、2、5mmol·L- 1 的Ca2 + 、Mg2 + 、Mn2 + 能促进抗补体因子的溶血活性 ,1、2mmol·L- 1 的Zn2 + 、Co2 + 能促进抗补体因子的溶血活性 ,而 5mmol·L- 1 的Zn2 + 、Co2 + 则抑制抗补体因子的溶血活性 ,Cu2 + 在 1、2、5mmol·L- 1 时则强烈抑制抗补体因子的溶血活性 ,EDTA能强烈抑制抗补体因子的溶血活性。结论　云南孟加拉眼镜蛇毒高活性抗补体因子具有一定的溶血活性 ,并且具有较好的温度耐受性及酸碱稳定性。多种二价金属离子及EDTA能促进或抑制这种溶血活性     

中华眼镜蛇毒膜毒素对人类膀胱癌细胞EJ-m3作用的体外研究

目的 研究中华眼镜蛇毒膜毒素(MT-12)对人膀胱癌细胞株EJ-m3的作用,并探讨其作用机制.方法 以穿透人工基底膜能力为依据筛选具有体外高侵袭能力的膀胱癌细胞;采用四氮唑蓝(MTY)法检测MT-12不同浓度对EJ-m3细胞的生长抑制率;同时流式细胞仪检测不同浓度MT-12作用24h后细胞中趋化因子受体CXCR4的表达.结果 经过反复筛选获得膀胱癌细胞EJ的体外高侵袭力亚系,EJ-m3.MT-12可有效抑制FJ-m3细胞的生长,具有浓度依赖性特点.MT-12对EJ-m3作用72h的ICSO是0.66ug/mL;流式细胞仪检测结果 显示,在0.125～0.5ug/mL,MT-12组随着药物浓度的增加Cx-CR4的表达逐渐减弱(P=0.020).结论 MT-12可有效抑制膀胱癌细胞生长,其作用机制可能与CXCR4在膀胱癌细胞中高表达有关.MT-12有潜力成为新的抗膀胱癌药物.     

中华眼镜蛇毒膜毒素诱导膀胱癌细胞凋亡的检测

目的研究中华眼镜蛇毒膜毒素（MT-12）诱导膀胱癌细胞的凋亡作用，比较检测凋亡的几种方法。方法MT-12作用于体外培养的人膀胱癌（BIU-87）细胞，HE染色、Hoechest 33342荧光染色、透射电镜观察凋亡细胞的形态变化，DNA琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段，Annexin V—FITC／PI双染流式细胞术定量检测凋亡率。结果3种形态学检测方法均能观察到细胞凋亡的形态学变化。3μg／ml。MT作用2、4、8、12、24h和36h，双染法流式细胞术检测的细胞凋亡率分别是46．94％、51．2％、28．85％、20．43％、6．03％和5．19％，阴性对照组凋亡率为0．77％。DNA电泳未能检测到细胞凋亡的DNA ladder。结论MT-12能诱导体外培养的BIU-87细胞凋亡，且具有时间依赖性。透射电镜观察凋亡细胞的形态特征最可靠。Annexin V—FITC／PI双染流式细胞术定量检测细胞凋亡，其特异性、敏感性、重复性和准确性高。     

中华眼镜蛇毒膜毒素诱导人膀胱癌细胞凋亡的实验研究

目的 研究中华眼镜蛇毒膜毒素12(MT-12诱导人膀胱癌细胞凋亡的作用.方法 不同浓度的MT作用于体外培养的BIU-87和E-J细胞,分别在12、24和36h用HE染色、透射电镜观察细胞的形态变化,Annexin'V-FITC/PI双染流式细胞术定量榆测凋亡率.结果 倒置显微镜和透射电镜下观察到凋亡细胞的核固缩、染色体边集、核碎裂和凋亡小体等形态学变化.MT-12浓度分别为1、2和3μg/mL时,双染法流式细胞术均检测到2株细胞凋亡率,实验组凋亡率和对照组比较有统计学意义(P<0.05).MT-12剂量和作用时间相同时,BIU-87细胞的凋亡率明显高于E-J细胞(P<0.01.结论 MT-12能诱导体外培养的BIU-87和E-J细胞凋亡,2株细胞凋亡率存在差异,可能与肿瘤细胞的生物学行为、MT-12诱导2株细胞凋亡机制的不同有关.