基于核磁共振氢谱的组学技术在中药制药过程研究中的应用与展望

中药制药过程工艺复杂,过程控制水平与产品质量直接相关。进行制药过程质量评价与质量控制研究,提高制药过程理解,对保证中药制剂的安全性与有效性具有重要的意义。随着核磁共振技术的发展,核磁共振氢谱已在中药质量评价与代谢组学研究等领域得到广泛应用。本文主要介绍了氢核磁共振组学技术应用于中药炮制、提取等制药过程研究时,在辨识过程化学标志物、研究代谢物在过程中的转化转移规律等方面的应用进展,同时展望了基于氢核磁共振技术的过程组学研究在中药制药领域的应用前景。     

基于1H-NMR指纹图谱分区相似度的丹参注射剂质量评价方法

目的 以丹参注射液为研究对象,建立基于¹H-NMR指纹图谱分区相似度的质量一致性评价方法。方法 采集81批丹参注射液的¹H-NMR光谱,根据代谢物信号的分布规律,将光谱分为氨基酸区、糖类区和酚酸区,分别计算各区光谱的夹角余弦与标准化欧氏距离2种相似度指标,并评价丹参注射液批次质量一致性的性能,并与基于全¹H-NMR谱的相似度计算结果进行对比。结果 不同批次丹参注射液间氨基酸、糖类及酚酸的组成均存在一定差异,其中氨基酸、糖类的批间差异较大;同时,欧式距离对成分的批间波动更为敏感。此外,基于全谱的相似度分析结果受糖区特征峰影响极大,对酚酸及氨基酸类成分的批间差异辨识能力较差。结论 基于¹H-NMR光谱分区相似度计算法可以更好地辨识不同类别成分的批间波动,较全谱相似度计算法更适用于丹参注射液的一致性评价,为进一步提升中药制剂的质量一致性提供参考。     

基于QbD理念的生血宝合剂HPLC-UV-MS定量分析方法研究

该研究基于质量源于设计理念,通过逐步优化的策略建立了定量分析生血宝合剂中8种指标成分的HPLC-UV-MS方法。首先确定分析目标概貌,选择指标成分为芍药内酯苷、芍药苷、二苯乙烯苷、特女贞苷、旱莲苷D、大黄素、毛蕊异黄酮苷和黄芪甲苷;接着以指标成分的分离度及信噪比为关键方法属性(CMA),采用部分析因实验进行第一步优化,通过多元线性回归分析筛选出关键方法参数(CMP)为流动相加酸量、柱温、梯度和波长;然后通过单因素优化确定了检测波长和流动相加酸量,提高了分离度和信噪比;再以特女贞苷和大黄素的峰对称因子为CMA进行第二步优化,根据中药体系特点,提出经验公式用于估计CMP的范围大小,选择Box-Behnken实验设计进行优化;最后建立数学模型,计算获得设计空间并验证。对优化后的色谱方法进行方法学验证,结果表明建立的HPLC-UV-MS方法具有良好的精密度、准确性和稳定性,可用于生血宝合剂中指标成分含量的定量测定。     

丹参素大鼠体内药代动力学及生物利用度研究

目的:研究丹参素在大鼠体内药动学和口服生物利用度。方法:以随机分组组间对照实验设计方法,用超高压液相色谱三重四级杆质谱联用法测定丹参素血药浓度,用topfit软件计算药动学参数,在12只SD大鼠(两组)体内研究单剂量灌胃或静脉注射46 mg.kg^-1丹参素后的药动学参数和口服生物利用度。结果:灌胃组大鼠的C_max为(1 419±439)ng.mL^-1,t_max为(60.1±19.0)min,t_1/2为(138.9±42.2)min,AUC为(2.01±0.40)×10⁵ng.min.mL^-1,静脉注射组大鼠的t1/2为(159.9±77.2)min,AUC为(2.11±0.55)×106ng.min.mL^-1。结论:丹参素的口服生物利用度为9.53%,口服生物利用度较差,其半衰期无明显差异。     

基于定量核磁共振技术的人参皂苷对照品质量评价方法研究

建立基于定量核磁共振(quantitative nuclear magnetic resonance,qNMR)技术的人参皂苷对照品质量评价方法.采用Bruker Avance Ⅲ 500 MHz核磁共振仪,配备5 mm BBO探头,采集定量氢谱,30°脉冲,弛豫延迟时间D1为20s,探头温度为303 K,采样次数为3...     

HPLC测定三七提取液中三七皂苷R2(S)、七叶胆苷XVII和人参皂苷F2的含量

目的 建立同时测定三七提取液中三七皂苷R₂(S)、七叶胆苷XVII及人参皂苷F₂含量的高效液相色谱法。方法 色谱柱为Waters Acquity UPLC CSH-C₁₈(50 mm×2.1 mm,1.7 μm),流动相为0.01%甲酸-水(A)和0.01%甲酸-乙腈(B),梯度洗脱,检测波长为203 nm,进样量为5 μL,流速为0.35 mL·min^-1,柱温为40 ℃。结果 在43 min内可完成三七皂苷R₂(S)、七叶胆苷XVII和人参皂苷F₂的分离测定。3种皂苷峰面积和浓度线性关系良好(r²>0.999 8);日内和日间精密度RSD<3.4%;回收率为98.4%~102.1%。结论 该方法简便、准确,重复性好,可用于三七提取液中皂苷成分的测定。     

丹参素和原儿茶醛对丹酚酸B降解规律的影响研究

目的建立定量测定多种丹参酚酸的高效液相色谱(HPLC)分析方法,考察丹参素和原儿茶醛对丹酚酸B降解规律的影响。方法应用HPLC技术对丹酚酸B降解样品中的4种酚酸进行定量分析,应用LC-MS技术剖析样品的化学物质基础,对加入丹参素和原儿茶醛前后的丹酚酸B样品进行研究。结果丹酚酸B降解产物主要有9种,包括丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B的多种异构体、紫草酸以及多种紫草酸异构体。加入相同质量浓度的丹参素和原儿茶醛,原儿茶醛对丹酚酸B降解的保护作用更明显,紫草酸异构体I和II的峰面积随着初始原儿茶醛质量浓度的增大而有所增加。结论原儿茶醛对丹酚酸B降解的保护作用可能是依赖于其弱酸性,紫草酸异构体I和II的峰面积受原儿茶醛初始质量浓度的影响可能与反应平衡改变有关。     

同时测定丹红注射液中21个化学成分含量的NMR方法研究北大核心CSCD

丹红注射液是由丹参和红花制备得到的一种复方中药注射剂,临床上用于冠心病、脑血栓、心肌梗死、心绞痛等心脑血管疾病的治疗。丹红注射液化学成分复杂,目前报道的相关化学成分分析方法多为高专属性方法,其全面化学成分并未得到充分研究,可能给用药安全带来隐患。该研究基于^(1)H-qNMR技术开发了一种丹红注射液中多类成分的定量方法,以氘代水配制样品,以TSP为内标,选择合适的定量峰,优化了分析参数,并进行了方法学验证,结果证明方法学指标均较好。该方法可同时对丹红注射液中的21个化学成分进行含量测定,包括6种氨基酸、4种小分子有机酸、5种糖及其衍生物、1种核苷和5种芳香化合物,其含量总和占总固体质量分数约85%,体现出^(1)H-qNMR在中药注射液分析中的较大优势。该研究开发的丹红注射液多类成分^(1)H-qNMR方法操作简单、分析时间短、分析范围广,对丹红注射液的质量评价具有实际意义,为中药注射液质量控制方法的开发提供借鉴。     

同时测定复方阿胶浆中间体中17种化学成分的定量核磁方法

目的 建立定量核磁方法,同时测定复方阿胶浆（Compound E’jiao Jiang,CEJ）的药材提取液中多类成分的含量,为中间体的质量评价提供可靠的分析手段。方法 采用水信号预饱和脉冲序列Noesygppr1d采集样品的1H-NMR图谱。通过文献调研、数据库检索以及加标实验的方式进行核磁谱峰归属。进一步确定各化合物的定量峰,采用内标法定量。开展方法学考察,考察项包括线性、精密度、稳定性、重复性、耐用性、准确度。另基于核磁共振氢谱的信噪比确定方法的检测限和定量限,并对3批中间体样本进行分析。结果 共指认22种化合物,其中17种可同时定量分析,包括缬氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、焦谷氨酸、γ-氨基丁酸5种氨基酸,乙酸根、富马酸根、丙酮酸根、琥珀酸根、甲酸根、乳酸6种小分子有机酸根,葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖4种糖类以及尿苷、胆碱。线性考察结果得出相关系数均不小于0.999 5,精密度考察结果显示,RSD均小于2.7%,重复性考察RSD均小于2.5%,耐用性及稳定性考察RSD均小于2.6%,加样回收实验得出平均回收率为90.0%～105.0%、RSD小于2.2%,分析值与参考值平均相对偏差小...     

恤彤注射液中间体丹参提取液的指纹图谱分析及多指标含量测定

目的 建立恤彤注射液中间体丹参提取液的HPLC-UV指纹图谱,并对其中的5-羟甲基糠醛、丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸A及丹酚酸B共7种指标成分进行定量分析。方法 采用Waters Cortecs C₁₈色谱柱（100 mm×4.6 mm,2.7 μm）,流动相0.4%甲酸水溶液（A）-0.4%甲酸乙腈（B）,流速0.8 mL·min^-1,梯度线性程序洗脱,进样量3 μL,柱温25℃,检测波长280 nm。结果 在建立的色谱条件下,指纹图谱峰型对称,分离度较好,能较全面地反映丹参提取液的化学信息。共确定了24个共有峰,10批丹参提取液的指纹图谱相似度均>0.960;在一定质量范围内,7种指标成分的峰面积与质量浓度均呈良好的线性关系,加样回收率为96.49%~100.18%,RSD为1.24%~2.27%（n=9）,所测定的7种指标成分总量为8 202.2~12 078.7 μg·g^-1。结论 建立的分析方法准确、简单、重复性好,HPLC-UV指纹图谱结合定量测定能更全面地反映丹参提取液的质量,可用于恤彤注射液中间体丹参提取液的质量评价。