利用凝集素芯片检测多囊肾病特异iPS细胞表面糖谱的研究

目的:建立一套凝集素芯片检测活体iPS细胞表面糖谱的方法。方法:以ADPKD-iPS为对象,运用不同活细胞染料,尝试不同的染色时间,找到最佳的iPS细胞与凝集素芯片结合的实验方案。结果:利用SYBR green,染色30min可以获得最佳的信号强度和信噪比。结论:已成功建立了一套利用凝集素芯片对活体iPS细胞进行表面糖谱检测的方法。     

基因治疗进展与展望—磁性转染

基因输送是基因治疗中非常关键的技术,作为运载工具,非病毒载体可避免病毒载体的安全性等问题.近年来非病毒基因载体的开发颇受关注,许多新的物理化学技术应运而生,磁性纳米颗粒介导的基因转染即磁性转染(magnetofection)是其中极具运用前景的技术之一.     

稀土化合物氯化镧影响神经干细胞增殖的探讨

目的初步探讨稀土化合物氯化镧（Lanthanum chloride，LaCl3）对体外培养的NSCs增殖状况的影响。方法采用成球悬浮法分离培养小鼠神经干细胞（mNSCs）；将生长状态良好的第3代mNSCs分为空白对照组、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）组、LaCl3组，分别采用常规NSCs培养液、含10ng／ml TNF-α的NSCs培养液、含2.5μmol／L LaCl3的NSCs培养液培养NSCs 1-3天。采用神经球计数、神经球体积测量方法以及采用免疫荧光细胞化学方法检测与细胞增殖相关的指标（CyclinD1）来观察NSCs的增殖状况。结果神经球计数和神经球体积测量结果显示，TNF-α组和LaCl3组神经球数量分别为[（74.56±2.6）个／瓶]和[（62.32±2.8）个／瓶]，较空白对照组[（42.28±3.5）个／瓶]明显增多，P〈0.05；神经球体积分别为[（0.82±0.16）×10^6（μm^3）]和[（0.66±0.12）×10^6（μm^3）]，较对照组[（0.26±0.0.08）×10^6（μm^3）]明显增大，P〈0.05。免疫细胞荧光检测细胞增殖结果显示，TNF-α组和LaCl3组中，Cyclin D1阳性细胞率分别为（68.6±4.2）％和（51.2±2.8）％，明显高于空白对照组的（35.6±2.6）％，P〈0.01。结论一定浓度的Lacl3具有促进NSCs增殖的作用。     

颅脑损伤后海马区notch信号分子及其相关miRNA的表达变化

目的 观察颅脑损伤后海马区notch1相关微小RNA(miRNA)、notch1及nestin的表达变化,探讨颅脑损伤后神经干细胞增殖机制.方法 采用自由落体法复制闭合性颅脑损伤小鼠模型,于伤后4 h、1 d和3 d处死动物.(1)实时聚合酶链反应(Real-time PCR)检测伤后4 h、1 d和3d伤侧海马区mir-326、mir-34a和notch1 mRNA的表达变化.(2)免疫荧光染色检测伤后3 d伤侧海马齿状回区notch1和nestin蛋白表达变化.结果 (1)颅脑损伤后4 h、1 d和3 d组海马区mir-326和mir-34a表达水平分别为假手术组的(0.36±0.16)、(0.16±0.04)、(0.36±0.17)倍和(0.48±0.15)、(0.50±0.04)、(0.25±0.14)倍,均低于假手术组(P＜0.01);(2)颅脑损伤后4 h、1 d和3 d组海马区notch1 mRNA表达水平分别为假手术组的(1.77±0.17)、(2.55±0.48)和(2.44±0.58)倍,均高于假手术组(P＜0.05);颅脑损伤后3 d组海马齿状回区notch1阳性细胞明显多于假手术组[(18.20±3.56)个比(0.40±0.55)个,P＜0.01].(3)颅脑损伤后3 d组海马齿状回区nestin阳性细胞数明显高于假手术组[(21.80±5.07)个比(0.80±0.45)个,P＜0.01].结论 在颅脑损伤后海马区神经干细胞增殖过程中,mir-326和mir-34a表达明显降低,其靶基因notch1 mRNA和蛋白表达明显升高,提示mir-326和mir-34a可靶向抑制notch信号分子,调控伤后神经干细胞增殖过程.

Abstract：

Objective To observe the expression of notch1-related miRNA, notch1 and nestin,and explore the regulatory mechanism of neural stem cells proliferation in hippocampus of mice after traumatic brain injury (TBI). Methods Mice were suffered closed head injury, and then sacrificed at 4th h,1st day and 3rd day post-injury. Real-time polymerase chain reaction (PCR) was used to detect the expression levels of mir-326, mir-34a and notch1 mRNA in mice hippocampus at 4th h, 1st day and 3rd day post TBI. Immunofluorescence was conducted to determine protein expression levels of notch1 and nestin in mice hippocampus at 3rd day post TBI. Results ( 1 ) Relative to sham group, the levels of mir-326 and mir-34a at 4th h, 1st day and 3rd day after TBI in the hippocampus were respectively (0. 36 ± 0. 16),(0. 16±0.04), (0.36±0. 17) and (0.48±0. 15), (0.50±0.04), (0.25 ±0. 14) fold (P＜0.01);(2) Relative to sham group, the levels of notch1 mRNA at 4th h, 1st day and 3rd day post TBI injury in the hippocampus were respectively (1.77 ±0. 17), (2.55 ±0.48) and (2.44±0.58) fold (P＜0.05).Notch1 + cells in the DG at 3rd day post TBI were significantly increased compared to sham group ( 18.20± 3.56 vs 0. 40 ±0. 55 ,P ＜0. 01 ); (3) Nestin + cells in the DG at 3rd day post TBI were increased apparently compared to sham group (21.80 ± 5. 07 vs 0.80 ± 0. 45, P ＜ 0. 01 ). Conclusion mir-326 and mir-34a may play a key role in trauma-induced neural stem cells proliferation in hippocampus in vivo by targeting notch1 signaling.     

芳香/脂肪共聚酯生物材料与大鼠骨髓间充质干细胞的相容性实验*

背景：芳香族聚酯生物降解性很差,不能单独作为降解材料使用,南昌大学材料科学与工程学院通过对苯二甲酰氯、双酚A、己二醇和低聚乳酸通过熔融共缩聚和酯交换的方法合成出一种新型生物可降解材料——芳香/脂肪共聚酯,已申请专利。 目的：观察芳香/脂肪共聚酯生物材料与大鼠骨髓间充质干细胞的相容性。 设计、时间及地点：细胞-材料学体外实验,于2006-04/2007-04在南昌大学第一附属医院泌外研究所完成。 材料：健康雄性SD大鼠5只,由江西中医学院实验动物中心提供。生物可降解聚酯材料为本项目小组正在研制的一种新的脂肪族/芳香族共聚脂。 方法：通过溶液浇铸法将可降解聚酯(聚对苯二甲酸双酚A酯-co-对苯二甲酸己二酯-co-乳酸)材料制备成共聚酯生物膜,同法制备聚氯乙烯生物膜。将共聚酯生物膜消毒后浸于细胞培养基中,收集材料浸提液,过滤灭菌保存,同法制备聚氯乙烯浸提液。取第三四代大鼠骨髓间充质干细胞,以2×107 L-1密度接种于96孔板中,以1.3×105个/孔接种于含上述制备的无菌共聚脂生物膜的24孔板内。分为3组：①阴性对照组,单纯加入DMEM培养基。②实验组,在加入DMEM培养基的基础上,分别加入12.5%,25%,50%,100%的材料浸提液。③阳性对照组,在加入DMEM培养基的基础上,加入聚氯乙烯浸提液。 主要观察指标：通过中性红摄取法、碱性品红染色法、MTT还原检测法,对材料毒性进行评价,电镜观察细胞在生物膜上的生长情况。 结果：培养1,3,5,7 d后,阳性对照组细胞活力及代谢能力有不同程度的下降(11%~16%);实验组与阳性对照组吸光度值比较差异有显著性意义(P < 0.001),随培养时间延长,细胞活力、数量及代谢能力均稍有增强(1%~4%);实验组与阴性对照组吸光度值比较无明显差异(P > 0.05)。电镜扫描及吖啶橙/溴化乙啶染色结果显示,接种第1天骨髓间充质干细胞即可附着在共聚酯生物膜表面呈梭形生长,随时间的延长细胞逐渐增多,表现出良好的附着性,凋亡及坏死率较低。 结论：初步证明芳香/脂肪共聚酯生物材料对细胞生长无毒性作用,且具有较好的细胞相容性,基本符合生物材料的应用要求。 关键词：芳香/脂肪共聚酯;生物材料;组织工程;细胞相容性     

内皮细胞缺氧后miR-210、miR-92a、miR-126表达及意义

目的进一步探讨缺氧后血管新生的调控机制。方法常规方法培养人微血管内皮细胞,低氧培养箱制备内皮细胞缺氧模型（观察组）,正常细胞作为对照组。采用real time PCR法检测两组内皮特异性microRNA（miR-210、miR-92a、miR-126）表达变化。结果与对照组比较,miR-210、miR-92a、miR-126分别上调了（5.19±0.99）、（3.02±0.88）、（3.87±0.83）倍,P均〈0.05。结论缺氧可促使内皮细胞特异性microRNA表达改变,此可能为缺氧后血管新生的主要调控机制。     

内皮祖细胞与缺血性脑血管病的细胞治疗

内皮祖细胞(EPC)是血管内皮细胞的前体细胞,存在于骨髓、外周血和脐血中,并参与出生后的血管发生过程.内源性和外源性因素刺激可动员骨髓EPC进入外周血,参与缺血组织的血管重建和损伤血管的再内皮化过程.血液循环中的EPC数量或质量下降是缺血性卒中预后不良的重要原因之一.EPC移植有可能为缺血性脑血管病的治疗提供一种全新的治疗策略.