骨髓基质细胞移植对大鼠局灶性脑缺血区血运重建的作用

作为较理想的细胞移植治疗的种子细胞来源,骨髓基质细胞(BMSC)日益受到重视。有研究证实给大鼠心肌缺血区进行自体骨髓细胞移植能促进新生血管的形成。本研究初步观察了经颈动脉移植的BMSC在脑缺血区中的分布及对缺血区新生血管形成的影响。 一、材料与方法 1.复制局灶性脑缺血模型:雄性SD大鼠,体重250～300 g,参照文献[2]以线栓法复制局灶性脑缺血模型。 2.5-溴脱氧尿嘧陡(BrdU)标记的骨     

烧伤患者外周血单个核细胞TLR2和TLR4表达的变化

目的观察烧伤患者外周血单个核细胞表面TLR2、TLR4表达的变化。方法选取深II度以上烧伤30%~50%TBSA烧伤患者23例,伤后48 h取外周血20 mL,同时抽取健康献血者(设为对照组)12例,外周血20 mL。常规方法分离出单个核细胞,用异硫氢酸荧光素(FITC)标记的小鼠抗人TLR2抗体和藻红蛋白(PE)标记的小鼠抗人TLR4抗体对外周血单个核细胞进行免疫染色,流式细胞仪(FCM)测定FITC、PE阳性细胞率及其平均荧光强度(MFI)。结果烧伤后48 h,患者外周血单个核细胞TLR2-FITC阳性细胞数量上升,为(57.57±18.56)%,与对照组的(26.32±10.31)%相比,P<0.05;细胞表面TLR2-FITC荧光强度下降,TLR2-FITC MFI为58.5±18.76,低于对照组(69.79±23.42);TLR4-PE阳性率为(29.84±13.28)%,与对照组的(12.75±5.18)%相比,P<0.05;TLR4-PE MFI减弱,与对照组相比,P<0.05。结论烧伤患者外周血单个核细胞TLR2/4阳性数量均升高,而TLR2/4表达强度降低。     

免疫酶联染色法检测衣原体感染的研究

本文报告了快速免疫酶联染色法检测衣原体感染方法的建立,并以衣原体单克隆抗体免疫荧光染色法为基准和对照,对该法的敏感性、特异性进行了比较。该法对临床疑为非淋球菌性尿道炎的尿道细胞涂片的阳性检出率为20.83％,略低于衣原体单克隆抗体免疫荧光法(23.08％),而远高于Giemsa染色法(9.48％)。该法的敏感性为80.95％,特异性为98.57％,阳性符合率为94.44％,阴性符合率为94 52％。实验证明,该法具有特异、敏感、简便、快速、无需特殊仪器设备等优点。本文还讨论了该法用于直接检测临床标本的前景。     

β干扰素基因修饰的人骨髓间充质干细胞治疗前列腺癌小鼠移植瘤的实验研究

目的 探讨人β干扰素(interferon-beta,IFN-β)基因修饰的人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cell,hMSC)对人前列腺癌小鼠移植瘤的治疗作用.方法 构建人IFN-β基因腺病毒表达载体Ad-IFN-β,体外转染hMSC,使用4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记表达IFN-β的hMSC( IFN-β-hMSC).应用人前列腺癌PC-3细胞株皮下种植建立小鼠前列腺癌动物模型,将IFN-β-hMSC经尾静脉注射入小鼠模型体内,收集肿瘤和肝、肺、脾、肾等脏器作冰冻切片和石蜡切片,荧光显微镜下观察肿瘤及各脏器中IFN-β-hMSC的分布情况.42只小鼠随机分为治疗组:IFN-β-hMSC(2×106,2×105)组;对照组:Ad-hMSC组、hMSC组、Ad-IFN-β组、重组IFN-β组、生理盐水组,每组6只.记录各组尾静脉注射后荷瘤小鼠肿瘤大小及生存期.结果 IFN-β-hMSC注射后14 d,荷瘤小鼠前列腺癌组织冰冻切片和石蜡切片中均可见DAPI标记的IFN-β-hMSC,而肝、肺、脾、肾等脏器的切片中均未见IFN-β-hMSC的存在.肿瘤质量:IFN-β-hMSC(2 × 106)治疗组(1.35±0.28)g、IFN-β-hMSC(2×105)组(1.43±0.41)g,与对照Ad-hMSC组(3.49±0.25)g、hMSC组(3.58±0.30)g、AdIFN-β组(3.30±0.24)g、重组IFN-β组(3.32±0.25)g、生理盐水组(3.32±0.47)g比较差异均有统计学意义(P ＜0.05);IFN-β-hMSC(2 × 106)治疗组中位生存时间91 d、IFN-β-hMSC(2×105)组87 d,与对照Ad-hMSC组57 d、hMSC组59 d、Ad-IFN-β组62 d、重组IFN-β组61 d、生理盐水组61 d比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IFN-β-hMSC在体内具有向前列腺癌微环境聚集转移的特性,且能够抑制前列腺癌移植瘤的生长,延长荷瘤鼠的生存期.     

初级纤毛在骨组织力学信号传导中的作用

骨组织不断接受力学刺激并保持骨形成和骨吸收的动态平衡。目前,人们仍不清楚骨组织如何感知力学刺激。越来越多的研究表明初级纤毛可能是骨组织力学刺激感受器,并将细胞外的力学刺激信号转化为细胞内的生化信息,最终骨组织实现其结构的重塑。在此,本文将对初级纤毛研究现状进行综述,并预测初级纤毛未来的研究趋势, 为利用初级纤毛来防治骨质疏松症打下基础。     

骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注肾损伤的保护作用

目的探讨外源性骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对缺血再灌注肾损伤的可能保护作用。方法取SD雄性大鼠骨髓,梯度离心法分离MSCs,采用4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记。32只雌性SD大鼠建立缺血再灌注肾损伤模型后随机分为移植组和对照组,移植组于缺血45min后经下腔静脉注入用DAPI标记的MSCs,对照组注入等量生理盐水。术后每天经腹腔注射5-溴脱氧尿苷嘧啶(BrdU),并分别于术后1、2、3、4d处死大鼠,留取血标本,观察血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平。留取肾组织,荧光显微镜及免疫组化染色方法观察移植MSCs在肾组织中的分布及肾细胞增殖状况,并采用蓖麻血凝素(RCA)对迁移入肾脏的MSCs分化状况进行鉴定。结果术后第1、2天,移植组大鼠血清BUN水平(31.93±1.49、19.58±1.58mmol/L)明显低于对照组(41.03±2.14、26.45±1.74mmol/L,P<0.05);第3、4天2组间BUN水平差异无统计学意义(P>0.05);第1、2、3天移植组大鼠血清Cr水平(77.47±4.77、57.45±2.41、44.93±3.97μmol/L)均显著低于对照组(102.37±3.59、67.50±2.92、53.25±2.73μmol/L),差异有统计学意义(P<0.05)。细胞增殖状况:术后第1天偶见BrdU阳性细胞,第2天2组大鼠肾组织中均可见较多BrdU阳性细胞,并随时间延长阳性细胞逐渐增多,且移植组阳性细胞数(33.71±8.50、57.60±4.88、116.29±6.99)明显多于对照组(19.67±5.20、26.88±5.89、71.71±8.44),差异有统计学意义(P<0.05)。移植组术后第3天肾组织内可见DAPI标记细胞,第4天DAPI标记细胞明显增多,且多数标记细胞能结合RCA。结论移植的外源性骨髓MSCs能够迁移、定居于缺血再灌注损伤后的肾组织中并分化为肾小管上皮细胞;MSCs移植可促进损伤肾组织的细胞再生,对缺血再灌注肾损伤具有一定的保护作用。     

氯化镧对内毒素攻击后小鼠胸腺细胞凋亡的影响

目的 探讨氯化镧对内毒素(LPS)攻击后小鼠胸腺细胞凋亡的影响。方法 通过观察氯化镧对LPS(12．5mg／kg)攻击后小鼠胸腺细胞DNA片段百分率、胸腺细胞凋亡百分率和胸腺细胞DNA片段琼脂糖凝胶电泳结果的影响，探讨其对小鼠胸腺细胞凋亡状况可能作用。结果 10mg／kg氯化镧能显降低内毒素血症小鼠胸腺细胞DNA片段百分率、胸腺细胞凋亡百分率．抑制胸腺细胞的凋亡。结论 LPS攻击后，可导致小鼠胸腺细胞发生凋亡．而氯化镧对LPS诱导的小鼠胸腺细胞凋亡具有一定的抑制作用。     

内毒素/脂多糖对小鼠腹腔巨噬细胞膜Toll样受体2及4表达的影响

内毒素／脂多糖（1ipopolysaccharide，LPS）是革兰阴性菌内毒素的主要成分，是导致感染和中毒性休克乃至患死亡的重要原因之一。目前临床上尚无既能杀菌又能中和LPS的有效手段。因此加强对LPS致病机制的深入研究，将有助于寻找新的治疗中毒性休克的途径。本研究采用双荧光抗体标记法，通过流式细胞仪观察LPS刺激后小鼠腹腔巨噬细胞（M书）胞膜上Toll样受体（TLR）2和TLR4表达的变化，以探讨其致病机制。     

兔正常膀胱移行上皮细胞的体外培养和鉴定

目的：摸索膀胱移行上皮细胞的合适培养条件，为建立满足组织工程需要的尿路上皮细胞体培养体系提供实验基础。方法：采用无血清培养系统，以组织块法原代培养兔正常膀胱移行上皮细胞并传代。动态观察细胞形态变化和生长增殖状况，进行免疫细胞化学染色鉴定细胞来源。结果：原代第4开始有上皮样细胞自组织块边缘长出，第10-14天汇合，呈典型铺路石样外观。2代超细胞生长4-7d后汇合，未发现成纤维样细胞混杂生长。细胞可传至6代以上。细胞角蛋白AE1/AE3单抗染色各代细胞均呈阳性反应。结论：分离培养的是单一的膀胱移行上皮细胞，细胞具有一定的增殖传代能力。     

无精症或严重少精症患者Y染色体微缺失的检测

目的探讨不育男性无精子症或严重少精子症与Y染色体微缺失之间的关系。方法利用多重PCR法检测无精子症或严重少精子症患者的Y染色体微缺失情况。结果52例无精子症或严重少精子症患者中共检出Y染色体微缺失4例,缺失率为7.69%。精液正常者（对照组）12例未发现Y染色体微缺失。4例Y染色体微缺失的无精子症患者睾丸细胞学检查均未发现精子。结论Y染色体微缺失是造成男性精子发生障碍的常见病因之一。