生物导向药物TGFα-SAP的联结与生物学鉴定

目的观察半毒素Saporin联结导向因子TGFα后细胞毒性作用的改变及其生物学鉴定。方法用SPDP化学联结的方法合成了TGFα-SAP,通过细胞计数观察TGFα-SAP对培养中的增殖平滑肌细胞的细胞毒性作用,并用3H-leucine掺入法进一步探讨了TGFα-SAP对平滑肌细胞的蛋白质合成的影响。结果发现Saporin对于真核细胞的细胞毒性作用很弱,联结TGFα后构建的TGFα-SAP可明显抑制平滑肌细胞的增殖,而过量的TGFα可通过竞争抑制逆转TGFα-SAP对平滑肌细胞3H-TdR掺入量的明显抑制作用。结论细胞毒性药物Saporin联结导向因子TGFα构建的TGFα-SAP通过TGFα的介导已具有较Saporin明显增强的细胞毒性作用。     

血管成形术后再狭窄与平滑肌细胞转化和迁移及转化生长因子α表达上调有关

目的为探讨血管成形术后再狭窄形成与平滑肌细胞(Smooth muscle cells,即SMCs)的迁移和表型转化,以及转化生长因子α(Transforming growth factor-α,即TGFα)在内膜增生过程中的表达变化的关系。方法取40只Sprague-Dawle大鼠行右颈总动脉球囊内膜剥脱术建立再狭窄动物模型,于第1,3,9,28天和2月取实验动脉段和对侧正常动脉段行光镜观察及计算机图像分析,同时在透射电镜下观察SMCs亚微结构变化。并以放免测定内膜增生时损伤血管组织中TGFα表达的变化。结果图像分析显示在球囊损伤第3天即见损伤血管中膜出现明显增厚,而后恢复正常厚度。与此同时球囊损伤第3天内膜明显增厚,而在第9～28天逐渐达到高峰;在透射电镜下观察可见:术后第3天损伤血管增生内膜中近腔面的SMCs就已主要表现为合成表型,在28d和2个月时大部分SMCs又恢复收缩表型的形态特征。而通过放免测定发现球囊损伤后第3天对血管组织TGFα表达明显增加,与对侧正常颈总动脉标本中的TGFα含量有统计学意义的差异。结论故认为大鼠再狭窄模型的内膜增生过程具有明显的时相特征,SMCs从中膜向内膜的迁移,而SMCs的表型转化在这过程中显示出明显的双向转化特点,而TGFα在损伤血管的表达明显增加,可能参与了内膜过度增生过程的SMCs的表型转化和迁移的机制。     

SO2对2型糖尿病大鼠心肌纤维化的改善作用及其机制

目的 探讨二氧化硫（SO₂）对链脲佐菌素（STZ）和高糖高脂饮食诱导的2型糖尿病（T2DM）大鼠心肌纤维化的改善作用及对细胞凋亡和转化生长因子β1（TGF-β1）/Smad同源物2/3（Smad2/3）通路的影响,阐明SO₂改善糖尿病心肌纤维化可能的分子机制。 方法 40只雄性SD大鼠随机分为对照组、T2DM组、T2DM+SO₂组和SO₂组。除对照组和SO₂组外,T2DM组和T2DM+SO₂组大鼠采用腹腔注射STZ（35 mg·kg^－1）和高糖高脂饮食建立T2DM大鼠模型,T2DM+SO₂组和SO₂组大鼠腹腔注射外源性SO₂供体［亚硫酸钠（Na₂SO₃）/亚硫酸氢钠（NaHSO₃）,85 mg·kg^－1·d^－1］,共8周,采用Masson染色观察各组大鼠心肌组织纤维化病理形态表现,并计算各组大鼠心肌胶原容积分数,采用Western blotting法检测各组大鼠心肌组织中相关蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,T2DM组大鼠心肌组织形态结构紊乱,心肌胶原纤维形成明显增加,心肌胶原容积分数明显升高（P<0.01）,心肌组织中α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅲ型胶原（ColⅢ）、B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、TGF-β1、Smad2和Smad3蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.01）;与T2DM组比较,T2DM+SO₂组大鼠心肌组织形态结构有所改善,心肌胶原纤维形成明显减少,心肌胶原容积分数明显降低（P<0.01）,心肌组织中α-SMA、Col Ⅲ、Bax、TGF-β1、Smad2和Smad3蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。与对照组比较,SO₂组大鼠上述各项指标差异均无统计学意义（P>0.05）。 结论 SO₂可通过抑制促凋亡相关蛋白和TGF-β1/Smad2/3通路蛋白表达,缓解T2DM大鼠心肌纤维化。     

Vasostatin-1上调脐静脉内皮细胞表达HO-1减轻软脂酸所致炎症反应

目的研究vasostatin-1(VS-1)对软脂酸诱导调脐静脉内皮细胞所致炎症反应和氧化应激的影响,并探讨其潜在的机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),用100 nmol/L VS-1预孵育2 h,Western blot检测HUVECs中血红素氧合酶-1(HO-1)的表达,酶学法测定其活性的变化。随后检测VS-1处理前后Nrf2的核转位情况,并采用siRNA沉默其表达观察其对HO-1表达的影响。在研究VS-1对软脂酸所致的炎症反应时,首先以VS-1孵育细胞2 h,随后加入100μmol/L软脂酸作用12 h。ELISA测定IL-6和TNF-α的分泌;荧光探针测定胞内活性氧类(ROS)的产生;DNA结合实验测定NF-κB活性的变化。结果 100 nmol/L VS-1孵育HUVECs细胞6 h即可诱导HO-1的表达并上调其酶活性,并持续至18 h。同时,VS-1也能上调细胞核内Nrf2的水平并增加其DNA结合活性;采用Nrf2 siRNA沉默其表达后,HO-1的表达水平和酶活性显著下降;软脂酸处理细胞后,细胞核内p65水平显著增高,细胞培养上清中IL-6和TNF-α含量以及胞内ROS含量明显增多,NF-κB的DNA结合活性也明显增强。而经100 nmol/L VS-1孵育后,NF-κB的活性有所降低,IL-6、TNF-α和ROS含量均有所减少;采用HO-1抑制剂SnPP共同孵育细胞后,VS-1对细胞因子以及ROS的抑制效应有所减弱。结论 VS-1上调脐静脉内皮细胞表达HO-1,从而减轻软脂酸所致炎症反应。     

血清Fractalkine在不同类型冠心病患者中的表达及意义

目的 观察血清Fractalkine （FKN）在不同类型冠心病（CHD）患者中的表达,并评估其水平对CHD危险分层的价值.方法 选取CHD患者81例,根据冠状动脉造影结果将其分为稳定型心绞痛（SAP）患者22例（SAP组）、不稳定型心绞痛（UAP）患者32例（UAP组）、急性心肌梗死（AMI）患者27例（AMI组）,同期选择非CHD患者62例作为对照组.采用ELISA法检测各组血清FKN水平,Gensini评分系统评定冠状动脉狭窄程度.结果 AMI组及UAP组血清FKN水平明显高于对照组和SAP组（P均＜0.05）,AMI组与UAP组、SAP组与对照组比较差异均无统计学意义（P均＞0.05）.Pearson相关分析显示,CHD患者血清FKN水平与Gensini积分无相关性（r=0.19,P＞0.05）.结论 随着CHD患者病情的加重,血清FKN水平明显升高;血清FKN水平可以作为CHD危险分层的指标.     

急性冠脉综合征患者外周血NT-proBNP水平明显上调

目的探讨急性冠脉综合征、稳定型心绞痛及非冠心患者群中外周血血清NT-proBNP水平的差异,评估在冠心病危险分层中外周血血清NT-proBNP浓度的预测价值。方法研究对象选取176例行冠状动脉造影术的住院患者,将患者分成急性冠脉综合征患者94例,稳定型心绞痛(SAP)组患者62例,20例非冠心病对照组,分别测定外周血血清NT-proBNP水平。结果急性冠脉综合征患者组的NT-proBNP水平明显高于对照组,亦显著高于SAP组。SAP组与非冠心病对照组比较有升高趋势,但两组间差异未显示出统计学差异。结论急性心肌梗死患者外周血血清NT-proBNP水平明显升高,可考虑作为预测和早期诊断急性冠脉综合征的的主要参考指标之一。     

冠心病患者血管性血友病因子裂解酶水平与GRACE评分及Gensini积分的相关性分析

目的：检测冠心病患者外周血血管性血友病因子裂解酶（von Willebrand factor-cleaving protease,vWF-cp）的水平变化以及联合全球急性冠脉注册事件（Global Registry of Acute Coronary Events,GRACE）评分观察对冠心病危险分层的评估价值。方法：选取冠心病患者96例,其中稳定性心绞痛组（stable angina pectoris,SAP）47例,急性冠脉综合征组（acute coronary syn－drome,ACS）49例;同时选取同期无血管病变的非冠心病患者49例作为对照组,采用GRACE系统进行评分及分层,同时利用Gensini评分系统评定冠状动脉狭窄程度,用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA）测定外周血vWF-cp的浓度。结果：对照组的vWF-CP水平明显高于ACS组（P=0.000）,亦明显高于SAP组（P=0.000）,ACS组与SAP组相比,差异有统计学意义（P=0.023）;ACS组GRACE评分明显高于对照组（P=0.000）,SAP组亦明显高于对照组（P=0.008）,ACS组与SAP组相比,ACS组明显升高,差异有统计学意义（P=0.033）;不同Gensini积分的冠心病患者的vWF-cp水平比较,差异无统计学意义（P >0.05）。冠心病患者Gensini积分等级与vWF-cp水平无明显相关性（r=0.060,P＝0.６１６）（采用Spearman’s rho法）。GRACE评分等级与vWF-cp水平呈负相关（r=-0.672,P=0.000）（采用Spearman’s rho法）。结论：GRACE评分联合vWF-cp可以在临床上更准确、有效的预测冠心病患者的风险及预后。     

冠心病患者血浆血管性血友病因子裂解酶、生长分化因子15水平变化及相关性分析

目的 观察冠心病患者血浆血管性血友病因子裂解酶（vWF-CP）及生长分化因子（GDF15）水平的变化,探讨两者的相关性.方法 选取冠心病患者96例,其中稳定性心绞痛组（SAP组）47例,急性冠脉综合征组（ACS组）49例,选取同期无血管病变的非冠心病患者49例作为对照组,入组患者均在入院后采血.用ELISA法测定血浆vWF-CP、GDF15.结果 ACS组vWF-CP为（286.22±21.75） pg/mL、SAP组为（357.47±21.98） pg/mL、对照组为（581.85±21.52） pg/mL,组间相比,P均＜0.05;ACS组GDF15为（11.30±0.51） ng/mL、SAP组为（8.37±0.54） ng/mL、对照组为（1.35 ±0.45） ng/mL,组间相比,P均＜0.01.vWF-CP水平与GDF15水平呈负相关（r=-0.558,P＜0.01）.结论 冠心病患者病情不稳定时血浆vWF-CP水平降低、GDF15水平升高,两者存在显著的相关性,都与冠心病的病情有关,两者的联合检测可以更好预测冠心病患者血栓事件的发生.     

冠心病患者外周血血管性假血友病因子裂解酶水平的变化及临床意义

目的 探讨不同危险分层的冠心病患者外周血血管性假血友病因子裂解酶（ADAMTS-13）水平的变化及与高敏C反应蛋白（hs-CRP）、氨基末端利钠肽前体（NT-proBNP）、超敏肌钙蛋白 （hs-cTn）水平和左心室射血分数（LVEF）的相关性。方法 选取冠心病患者96例,稳定型心绞痛（SAP）47例,急性冠状动脉综合征（ACS）49例,其中包括不稳定型心绞痛（UAP）26例和急性心肌梗死（AMI）23例;同时选取冠状动脉无狭窄的患者49例作为对照组,所有入选患者均在入院后即刻采血,而急性心肌梗死患者均为发病6 h内,并在入院10～14天后再次采血。用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血浆ADAMTS-13的浓度。结果 ACS组患者外周血ADAMTS-13水平（286.22±21.75 ng/L）明显低于SAP组（357.47±21.98 ng/L）和对照组（581.85±21.52 ng/L）,AMI组与UAP组的外周血ADAMTS-13水平比较差异无统计学意义（256.21±29.43 ng/L比258.55±31.56 ng/L）,AMI组10～14天后ADAMTS-13水平明显高于其急性期 （619.91±30.80 ng/L比256.21±29.43 ng/L）。ACS组hs-CRP、NT-proBNP、hs-cTn均明显高于对照组及SAP组,而LVEF低于对照组及SAP组,冠心病患者外周血ADAMTS-13水平的变化与其他血清学指标hs-CRP、NT-proBNP、hs-cTn等存在明显负相关,与LVEF存在明显正相关。结论 外周血ADAMTS-13水平变化与冠心病患者的危险分层密切相关,联合其他血清学指标和LVEF可能可以更好的预测冠心病患者急性心脏事件的发生。