胸腺体液因子(THF-γ2)的合成和活性测定

 目的化学合成胸腺体液因子(THF-γ2),并建立纯化、分析和活性测定的方法。方法采用Fmoc固相合成法(SPPS)合成了胸腺体液因子,用中压液相(MPLC)反相柱一步纯化,经HPLC分析纯度,通过质谱和氨基酸序列测定鉴定合成产物。根据THF-γ2促进T细胞产生IL-2的特性检测合成产物的体外活性。结果化学合成胸腺体液因子的产率为95.8%。纯化后其纯度达到95.92%。质谱测定其相对分子质量为918,与理论相对分子质量相符。氨基酸序列测定为NH₂/Leu-Glu-Asp-Gly-Pro-Lys-Phe-Leu,与设计序列一致。当THF-γ2浓度为300μg·L^-1时,小鼠脾细胞产生IL-2的浓度最高,为空白对照的1.9倍。结论在国内首次建立了胸腺体液因子(THF-γ2)从合成、纯化、分析到活性测定的方法,为胸腺体液因子的进一步研究和应用打下了基础。     

胸腺体液因子THF-γ2固相合成方法优化

采用Fmoc固相肽合成法合成胸腺体液因子THF-γ2。通过逐步检测确定了手工合成的反应时间，从多肽C端到N端依次为60、120、30、60、45、90和60min。以正交试验优化了仪器合成条件，最佳条件下产物的收率为95．8％，纯度为84％。     

金属螯合亲和层析分离纯化重组人锰超氧化物歧化酶

以金属铜螯合的亲和层析方法分离纯化重组人锰超氧化物歧化酶，采用3种不同的洗脱方法都可以对重组酶进行分离纯化，但是通过鉴别比较，采用方法1即逐步降低洗脱液的pH和固定洗脱液的NH4^ 的浓度可以获得较好的结果，SDS－和丙烯酸胺凝胶电泳得到一条分子质量约为2200u的蛋白条带，证明所得到的为纯度高的重组人锰氧化物歧化酶（rhMn-SOD）。     

血清胸腺因子对放化疗保护作用的实验研究

目的:观察血清胸腺因子在对抗辐射和抗化疗副作用方面的作用。方法:抗辐射实验:KM小鼠,共6组,除空白组外,其它小鼠接受钴(Co)60照射后,模型组皮下(S.C.)注射0.1 ml生理盐水,FTS低、中、高剂量组分别S.C.注射FTS 0.025、0.25、2.5mg.kg-1,每天一次,连续7 d;阳性药组于实验d 1一次性口服灌胃尼尔雌醇2.5 mg.kg-1,检测免疫活性;对分别接受Co60的600或700拉德辐射小鼠,记录30 d内存活率。抗化疗副作用实验:对肝癌H22细胞的荷瘤小鼠,当日腹腔注射环磷酰胺100mg.kg-1,同时各组给药,每天一次,连续19 d,记录20 d内小鼠存活率。结果:小鼠经辐射后,与模型组比较,FTS各剂量组白细胞总数、对碳粒的吞噬速率和吞噬指数、胸腺系数显著提高(P<0.05);脾脏系数比尼尔雌醇组的脾脏系数略高(P>0.05);对700拉德的辐射小鼠,与模型组比,FTS 0.25 mg.kg-1组30 d内存活率显著增加(P<0.05)、平均存活天数明显延长(P<0.01),与阳性药组一致。荷瘤小鼠接受环磷酰胺化疗,皮下注射FTS给予荷瘤小鼠经化疗后的20 d内存活率增加。结论:血清胸腺因子具有抗辐射、抗化疗副作用,前景广阔。     

重组人锰超氧化物歧化酶工程菌高效表达培养工艺的研究

目的　确定重组人锰超氧化物歧化酶 (rhMn SOD)工程菌高效表达的最适培养工艺条件。方法　通过摇瓶培养研究了包括接种量、诱导时机、Mn2 + 浓度、诱导后培养时间、发酵过程中 pH变化以及初始 pH值对发酵的影响。 结果　该工程菌的最佳接种量为 3%,最佳诱导时机为接种后 3h ,确定Mn2 + 浓度为 6 0 0 0 μmol·L-1,诱导后培养 5h ,在培养过程中当pH为6 .83时外源蛋白可获得高效表达 ,初始 pH确定为 8.0。 结论 :诱导和培养基的 pH是影响工程菌发酵的主要因素 ,尤其是Mn2 + 的加入表达有活性的rhMn SOD是必需的。     

合成胸腺体液因子（TIHF-γ2）的纯度及结构鉴定

目的：对合成胸腺体液因子（thymus humoral factor，简称THF-γ2）进行纯度及结构鉴定。方法：用HPLC、毛细管区带电泳、质谱、氨基酸组成分析、序列测定和紫外扫描的方法鉴定THF-γ2的纯度和结构。结果：HPLC分析表明其纯度达到95．9％；毛细管区带电泳鉴定纯度为95．1％；质谱测定产物相对分子质量为917．7，与理论值918相符；氨基酸组成分析表明其氨基酸摩尔比与理论值一致；氨基酸序列测定结果为NH2／Leu—Glu—Asp-Gly—Pro—Lys-Phe—Leu，与设计序列相同；紫外扫描除在252nm有Phe的微弱吸收，整体为一光滑曲线。结论：经检测合成THF-γ2纯度高于95％，鉴定了其结构与理论的一致性。     

血清胸腺因子(FTS)的合成和活性测定

采用芴甲氧羰基（Fmoc）固相肽合成法（Fmoc～SPPS）合成了血清胸腺因子（FTS），用中压液相阴离子柱一步纯化，经HPLC分析纯度，通过质谱和氨基酸序列测定鉴定合成产物。根据FTS恢复胸腺切除小鼠的脾细胞对免疫抑制荆AZ敏感的特性测定合成FTS的活性。结果表明：化学合成血清胸腺因子的产率为94．7％；纯化后其纯度达到93．7％；质谱测定其相对分子质量为876．6，与理论分子量相符。氨基酸序列测定为NH2／Glu—Ala—Lys—Ser—Gin—Gly—Gly—Ser—Asn，与设计序列一致。实验显示在合成FTS的浓度为10^-14mol／L时尚有部分活力，在10^-13mol／L时能够完全恢复胸腺切除小鼠的脾细胞对AZ的敏感性。     

诱导剂对重组人锰超氧化物歧化酶表达的影响

用异丙基－β－D－硫代半乳糖苷（IPTG）、乳糖、巯基乙醇对重组人锰超氧化物歧化酶（rhMn-SOD)工程菌进行诱导，结果表明3种物质都可以诱导rhMn-SOD外源蛋白的表述。通过酶活力、比活测定及电泳的结果显示，以乳糖作为诱导剂的表达效果明显好于IPTG和疏基乙醇，进一步的实验结果表明乳糖诱导的最佳浓度在80mmol/L。     

入锰超氧化物歧化酶(hMn-SOD)的研究进展

人锰超氧化物歧化酶(hMn-SOD)是线粒体基质酶,其基因是诱导表达的.作为细胞内氧自由基的清除剂,具有抗衰老、提高细胞对氧应激反应的耐受性及抑制肿瘤发生等方面的作用.文章从hMn-SOD的结构、理化性质、分子生物学研究、与衰老、肿瘤的相关性及其临床应用等方面对其进行近期研究成果和未来发展趋势进行了综述.