液相色谱串联质谱法检测人血清雌酮、雌二醇

目的建立同时测定人血清中雌酮(E1)及雌二醇(E2)水平的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法,并初步应用于临床血清样品的雌激素检测。方法血清样品经乙酸乙酯提取,丹磺酰氯衍生化后进行LC-MS/MS分析。用Agilent ZORBAX SBC18色谱柱进行线性梯度洗脱,流动相为乙腈(0.05%甲酸)-水(0.05%甲酸),流速为0.3 m L/min。用多重反应离子监测(MRM)正离子模式对血清中的E1、E2进行质谱检测,并根据"生物样品定量分析方法验证指导原则(中国药典,2015)"对该方法的特异性、线性范围、灵敏度、精密度、提取回收率和稳定性等进行评价。用本法对172例健康成年女性血清标本进行E1、E2检测,用百分位数法计算不同月经周期E1、E2的浓度区间。结果 LC-MS/MS法可同时检测人血清中E1、E2的含量,在0.05~10 nmol/L范围内线性关系良好。该法的定量限为0.05 nmol/L,日内与日间不精密度均小于15%,稳定性良好。初步临床应用显示,用LC-MS/MS法计算所得的E1、E2浓度区间符合女性月经周期生理性变化规律。结论 LC-MS/MS法能有效分离并定量检测人血清中E1、E2的浓度水平,其线性范围广、灵敏度高、精密度好,有望作为临床血清雌激素检测的参考方法。     

银杏叶提取物对大鼠高血压、高血糖合并高脂血症的治疗作用

目的:观察银杏叶提取物对大鼠高血压、高血糖合并高脂血症的治疗作用。方法:成年雄性自发性高血压大鼠(SHR)高糖高脂饲料喂养4周后,给予小剂量链脲佐菌素35 mg·kg-1腹腔注射诱导制备高血压、高血糖合并高脂血症大鼠模型。给予银杏叶提取物治疗,8周后测定大鼠血压、血糖、糖化血红蛋白、血脂及血清中抗氧化指标及丙二醛水平。结果:银杏叶提取物治疗后,大鼠血压、空腹血糖、糖化血红蛋白、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白及丙二醛水平均较模型组显著下降,高密度脂蛋白和抗氧化酶活性则显著升高。结论:银杏叶提取物能够降低高血压、高血糖合并高脂血症大鼠的血压、血糖和血脂,并增强其机体抗氧化能力,对高血压、高血糖合并高脂血症具有一定的治疗作用。     

江苏地产白首乌C21甾苷抗衰老作用研究

目的研究江苏地产白首乌C21甾苷(C21 steroidal glycoside,CSG)抗氧化、耐缺氧、抗疲劳等抗衰老作用。方法以维生素E[VE,100mg/(kg.d)]为对照,观察CSG低、中、高剂量组[10mg/(kg.d)、20mg/(kg.d)、40mg/(kg.d),即CL、CM、CH组]对小鼠常压耐缺氧试验,负重游泳试验和D-半乳糖(D-gal)亚急性衰老模型小鼠的影响。测定小鼠常压耐缺氧和负重游泳时间,取血清、心、肝、脑组织,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,ELISA法检测端粒酶活性。结果与正常对照组相比,CSG和VE能够延长健康小鼠常压耐缺氧和负重游泳时间,提高D-gal模型小鼠血清、心、肝、脑SOD活性,降低MDA含量;中、高剂量CSG组小鼠血清端粒酶活性升高;CSG低、中、高剂量组及VE组小鼠心脏端粒酶活性均升高(P<0.01);CSG及VE对小鼠肝及脑组织端粒酶活性无影响。结论CSG能拮抗自由基损伤,提高健康小鼠常压耐缺氧和负重游泳时间,提高D-gal衰老模型小鼠血清、心、肝、脑组织SOD活性,减少MDA含量,提高心脏组织中端粒酶活性。具有抗氧化、延缓衰老、抗疲劳作用。     

过氧化物酶增殖体激活受体-δ基因多态性与淮海地区2型糖尿病的相关研究

目的 探讨过氧化物酶增殖体激活受体-δ(PPAR-δ)基因多态性与淮海地区汉族人群2型糖尿病(T2DM)及代谢指标的相关性,以期进一步了解T2DM发病的遗传学机制.方法 采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCRRFLP)方法对200例T2DM患者(病例组)和200例健康人群(对照组)进行基因多态性检测.同时测定两组人群的身高、体重、腰围、臀围、收缩压(SBP)、舒张压(DBP),空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等临床指标,计算体质指数(BMI)和腰臀比.结果 PPAR-δ-87T/C位点基因型和等位基因频率在病例组和对照组间差异均无统计学意义(P＞0.05).此位点不同基因型T2DM患者的体重和BMI差异有统计学意义(P＜0.05);两两比较结果显示,CC型的体重[(76.75±11.10) kg]显著高于TT型[(68.43±13.10) kg],CC型的BMI[(27.99±3.62) kg/m2]显著高于TT和TC型[分别为(25.10±3.71)、(25.69±3.40) kg/m2],差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).其他指标如年龄、身高、腰围、臀围、腰臀比、SBP、DBP、FPG、TC、TG、HDL-C、LDL-C在3组基因型患者中差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 PPAR-δ-87T/C多态性可能与中国淮海地区汉族人群2型糖尿病的发病无关,其多态性可能与2型糖尿病患者的肥胖发生有一定相关性.     

柑橘类黄酮诺必擂停对K562裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:观察柑橘类黄酮诺必擂停对K562裸鼠移植瘤的抑制作用,探讨其在抑制肿瘤血管生成方面的作用与机制.方法:构建l(562裸鼠移植瘤模型,25只裸鼠分为模型组、诺必擂停低、中、高剂量组和阳性对照组(n=5).造模24 h后分别给与1%羧甲基纤维素钠溶剂、诺必擂停(12.5,25,50 mg·kg~(-1))和环磷酰胺(20 mg·kg~(-1)),连续给药18 d,处死,取肿瘤称重计算抑瘤率;免疫组化法检测药物对肿瘤组织VEGF表达及MVD的影响;鸡胚绒毛尿囊膜实验测定药物对血管新生的作用.结果:诺必擂停可显著抑制K562裸鼠移植瘤的生长,抑瘤率达36%～58%,与模型组比较有显著差异(P<0.01);能显著降低肿瘤组织内微血管生成:诺必擂停低、中、高剂量组CD34表达均低于模型组(中、高剂量组分别P<0.05,P<0.01);抑制VEGF的表达:诺必擂停低、中、高剂量组VEGF均低于模型组(分别P<0.05,P<0.01和P<0.01);抑制CAM血管新生:2,4 μg作用下CAM微血管数显著低于对照组(P<0.01).结论:诺必擂停可以抑制K562裸鼠移植瘤的生长以及肿瘤血管的生成,其作用机制可能与下调肿瘤组织VEGF的表达有关.     

银杏叶提取物对大鼠糖尿病性白内障防治作用的研究

目的探讨银杏叶提取物(extract of ginkgo biloba,GBE)对大鼠糖尿病性白内障(diabetic cataract,DC)的防治作用及可能机制。方法 60只♂SD大鼠随机分为正常对照组、DC模型组、GBE低、中、高剂量组和苄达赖氨酸组。给药12周后,裂隙灯观察大鼠晶状体变化并对其混浊度进行分级;可见光分光光度法测定晶状体中过氧化氢酶(cata-lase,CAT)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)和总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)水平;ELISA法测定糖基化终末产物(advanced glycosylation end products,AGEs)含量;Western blot法测定醛糖还原酶(aldose reductase,AR)相对表达水平。结果 DC组大鼠晶状体明显混浊;GBE中高剂量组较DC组大鼠晶状体混浊程度减轻。DC组大鼠与NS组相比,晶状体中CAT、T-SOD活性降低,GSH含量减少(P<0.01);中高剂量GBE可提高CAT、T-SOD活性及GSH含量(P<0.05或P<0.01)。与NS组相比,DC组大鼠晶状体中的AGEs含量及AR表达明显升高(P<0.01);中高剂量GBE治疗后,AGEs含量与AR表达明显下调(P<0.01)。结论 GBE可能通过增强抗氧化能力、抑制AGEs产生及AR表达,从而减轻大鼠晶状体混浊度,对DC的防治具有积极作用。     

萘普生微囊栓的制备及其质量控制

目的:制备萘普生微囊栓并对其进行质量控制。方法:取萘普生微囊和混合脂肪酸甘油酯,以热熔法制成微囊栓,并按2010年版《中国药典》有关要求进行外观、重量差异、含量测定、体外释放等质量评价,并与萘普生微囊及普通栓比较体外累积释药率。结果:萘普生微囊栓的外观、重量差异、含量测定均符合《中国药典》规定。微囊栓在48h时体外累积释药率为90.87%,微囊36h达到91.02%,普通栓3h达到94.51%。结论:萘普生微囊栓制备工艺简单、质量可控,具有较好的缓释作用。     

白首乌C21甾体酯苷对小鼠急性四氯化碳肝损伤的保护作用

目的 研究白首乌C21甾体酯苷对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤的保护作用.方法 以CCl4灌胃(ig.)小鼠制备急性肝损伤模型.测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性、肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)含量,并做肝脏形态组织学观察.结果 白首乌C21甾体酯苷高、中、低剂量(40、20、10 mg·kg-1·d-1)均能明显抑制肝损伤小鼠血清中ALT和AST活性(P＜0.01)及肝组织中MDA含量的升高(P＜0.05),增强SOD活力(P＜0.05),减轻肝细胞的损伤程度.结论 白首乌C21甾体酯苷对CCl4引起的小鼠急性肝损伤具有保护作用,其机制可能与抗脂质过氧化有关.