党参HPLC指纹图谱研究

目的 优化党参高效液相色谱指纹图谱分析方法.方法 采用ZORBAX SB-Aq色谱柱;流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液(梯度洗脱);检测波长为267nm;柱温为30℃;流速为1.0mL·min-1.结果 不同来源的14批党参样品均标示出13个共有峰;利用中药色谱指纹图谱相似度评价软件进行相似度评价,14批样品的相似度为0.883～0.980,提示党参指纹图谱差异相对较大.结论 方法准确可靠,重复性好,为党参质量控制提供了方法依据.     

美花石斛的质量研究及其与近似种石斛的比较

目的建立美花石斛生物碱、联苄类、黄酮类成分的TLC鉴别方法,以及石斛酚、甘露糖与葡萄糖含量测定方法,并与霍山石斛、金钗石斛、流苏石斛、铁皮石斛进行比较,为其质量控制提供科学依据。方法采用TLC法鉴别生物碱、联苄类、黄酮类成分;石斛酚含量测定:采用HPLC法,色谱柱为Kromasil 100-5C_(18);流动相为乙腈-水(36∶64);检测波长为210 nm;流速为0.5 m L·min~(-1);柱温为30℃。甘露糖与葡萄糖的含量测定:采用酸水解柱前衍生HPLC方法,色谱柱为Kromasil 100-5 C_(18);流动相为乙腈-0.02 mol·L~(-1)乙酸铵溶液(20∶80);检测波长为250 nm;流速为1.0 m L·min~(-1);柱温为30℃。结果 TLC鉴别中美花石斛分别检出2个生物碱主斑点、包括石斛酚在内的2个联苄类成分主斑点、包括柚皮素在内的5个荧光主斑点,与霍山石斛、金钗石斛、流苏石斛或铁皮石斛有一定区别。石斛酚、甘露糖、葡萄糖线的性关系良好(r=0.999 9);平均加样回收率分别为101.5%(RSD为1.95%)、97.9%(RSD为1.94%)、100.0%(RSD为1.36%);10批美花石斛的石斛酚含量为0.0739~0.171 mg·g~(-1);7批美花石斛的甘露糖与葡萄糖含量分别为5.07%~9.42%、8.43%~13.71%,甘露糖和葡萄糖含量之和为13.50%~22.61%。结论 TLC鉴别方法具有一定专属性,可作为美花石斛的鉴别方法之一;含量测定方法准确可靠,重复性好,可作为美花石斛的定量指标。     

铁皮石斛与霍山石斛中甘露糖、葡萄糖及柚皮素的含量比较

目的:优化铁皮石斛中甘露糖与葡萄糖的柱前衍生HPLC含量测定方法以及柚皮素HPLC含量测定方法,比较铁皮石斛与霍山石斛中这3种成分的含量差异。方法:在2015年版《中国药典》铁皮石斛甘露糖柱前衍生HPLC含量测定项下色谱条件基础上,选择乙腈-0. 02 mol·L~(-1)乙酸铵溶液为流动相系统梯度洗脱,同时测定甘露糖与葡萄糖的含量,并分析甘露糖与葡萄糖的峰面积比值;采用Kromasil 100-5 C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm);检测波长250 nm;流速1. 0 mL·min~(-1);柱温30℃。柚皮素HPLC含量测定采用Kromasil 100-5 C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-甲醇-0. 4%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长290 nm;流速0. 8 mL·min~(-1);柱温40℃。结果:甘露糖与葡萄糖在0. 15~3. 0,0. 075~2. 25μg线性关系良好(r=0. 999 9),平均加样回收率分别为99. 01%(RSD 2. 1%),101. 69%(RSD 2. 0%),重复性、耐用性等其他方法学研究符合要求。43批不同产区铁皮石斛中甘露糖、葡萄糖以及两者的含量之和分别在12. 75%~36. 40%,2. 93%~18. 39%,19. 23%~54. 58%,除极少数样品外,基本符合2015年版《中国药典》甘露糖含量限度要求,甘露糖与葡萄糖含量之和也接近总多糖含量限度要求;含量与产区相关性不显著。12批霍山石斛的总糖则分别在14. 33%~29. 47%,6. 64%~15. 20%,25. 73%~44. 37%,其含量以及峰面积比值基本落在铁皮石斛范围期间,多批次的平均含量也基本与铁皮石斛一致(约33%左右)。柚皮素在0. 020 8~0. 832 0μg线性关系良好(r=0. 999 9),平均加样回收率为101. 96%(RSD 1. 8%)。11批铁皮石斛与7批霍山石斛的柚皮素含量分别为0. 053 2~0. 122 4 mg·g~(-1)(均值为0. 081 0 mg·g~(-1)),0. 040 3~0. 090 0 mg·g~(-1)(均值为0. 068 3 mg·g~(-1)),铁皮石斛含量稍高于霍山石斛,但含量均亦未达到0. 02%的质量标准下限的常规要求。结论:铁皮石斛中甘露糖与葡萄糖HPLC含量测定方法重复性较好,用两者含量之和替代具有较大误差的总多糖含量作为测定指标具有可行性;单糖含量测定可应用于霍山石斛的定量质控指标;但依据2种石斛的总多糖含量、水解后的单糖含量与峰面积比值以及柚皮素含量,无法区分铁皮石斛与霍山石斛,需结合其他专属性方法方能对两种石斛进行区别。     

有瓜石斛水煎液HPLC特征图谱研究及其与药材的相关性分析

目的 建立有瓜石斛水煎液HPLC特征图谱,并与药材进行相关性分析.方法 采用ZORBAX SB C18色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱);检测波长分别为220nm、340nm;柱温为35℃;流速为1.0mL·min-1.结果 在220nm检测波长下,11批有瓜石斛共标示出21~25个特征峰,可分为3类,均检出17个特征共同峰.其中第Ⅰ类5批有21个共有峰,相似度为0.906~0.972;第Ⅱ类3批有25个峰,相似度为0.955~0.986;第Ⅲ类3批有21个峰,相似度为0.979~0.989;同类样品的相似度为0.906~0.989;不同类样品共有模式间的相似度仅为0.481~0.763,有明显差异.在340nm检测波长下,11批有瓜石斛共标示出7个黄酮类特征峰,相似度达0.909~0.985.两种检测波长条件下,有瓜石斛煎液基本能检出原药材相应特征峰,但相对峰面积比值有一定差异;每批药材与其煎液之间的相似度为0.733~0.919.结论 方法准确可靠,重复性好,提示常规水煎煮工艺能保留有瓜石斛的主要特征成分,为评价有瓜石斛水煎液物质基础提供参考依据.     

铁皮石斛黄酮苷类成分HPLC特征图谱优化及不同种源特征性分析

目的:优化铁皮石斛黄酮苷类成分HPLC特征图谱分析方法,明确不同种源的共性成分与特异性成分。方法:色谱条件采用Kromasil 100-5 C18色谱柱;流动相四氢呋喃-乙腈-甲醇(10∶22∶5)-0. 05%磷酸水溶液梯度洗脱;检测波长340 nm;柱温30℃;流速1. 0 mL·min~(-1)。结果:27批铁皮石斛共标示出13个黄酮类特征峰,鉴别了6个黄酮碳苷(新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ,夏佛塔苷,异夏佛塔苷,佛莱心苷,异佛莱心苷)与1个黄酮氧苷(芦丁)共7个特征峰。不同批次样品检出7~11个特征峰,其中新西兰牡荆苷Ⅱ为不同来源样品相对稳定的共有峰,芦丁、佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰差异较大。根据特征峰的相对丰度,可将样品分为3大类,其中第Ⅰ类10批样品主要来源于广东、江西、福建、浙江(武义)等丹霞地貌(即"丹霞种"),以检出明显的芦丁强峰为特征;第Ⅱ类11批样品主要来源于云南、广西等地(包括了"云南广南种""广西铁皮兰种"),以能检出佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰为特征;而第Ⅲ类6批样品主要来源于浙江(即"浙江本地种"),以难以检出佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰,检出不同程度的芦丁峰为特征。比较"丹霞种"与"广西铁皮兰种"的仿野生和大棚栽培铁皮石斛HPLC特征图谱,结果仿野生铁皮石斛中的特征峰在大棚栽培石斛中也能稳定检出,验证了铁皮石斛种源的可靠性。结论:所建立的分析方法能对铁皮石斛黄酮类特征峰达到较好的分离效果,重复性好,基本明确了不同种源铁皮石斛的共性及特异性黄酮苷类成分。提示新西兰牡荆苷Ⅱ适合作为特征图谱的参照物峰;可根据芦丁相对丰度或佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰的检出及相对丰度作为铁皮石斛"丹霞种""云南广南与广西铁皮兰种"与"浙江本地种"的判断依据。     

金莲花颗粒的高效液相指纹图谱研究

目的建立金莲花颗粒的高效液相色谱(HPLC)特征图谱分析方法,控制不同批次金莲花颗粒的质量。方法以10批次金莲花颗粒为研究对象,采用HPLC法,色谱柱为Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm,4.0μm),流动相为0.1%HAc水-乙腈(梯度洗脱),检测波长为254 nm,流速为0.6 mL/min,柱温为30℃,进样量为10μL。采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件系统(2004 A版)对10批次样品的指纹图谱进行相似度评价。结果金莲花颗粒HPLC特征图谱共标示出21个特征共有峰,10批次金莲花颗粒的特征图谱与对照图谱相似度均超过0.994。结论建立了金莲花颗粒的HPLC特征图谱,该方法稳定,重复性好,可用于金莲花颗粒的质量控制。     

建立适用于联合用药多的患者万古霉素血药浓度监测的HPLC-DAD法

目的建立适用于联合用药多的患者万古霉素血药浓度监测的HPLC-DAD法。方法采用高氯酸蛋白沉淀法对血样进行预处理。色谱条件:Agilent 5 TC-C18(2)色谱柱(4.6 mm×150 mm,4.6μm);流动相:磷酸二氢钾(0.05 mol·L^-1)-乙腈(92∶8);流速:0.6 m L·min^-1;检测波长:200,236,283 nm;柱温:40℃;进样量:20μL。并对60例重症感染患者的万古霉素血药浓度进行检测和分析。结果万古霉素在2.85~91.20μg·m L^-1范围内与峰面积呈良好线性关系,最小定量下限浓度:1.0μg·m L^-1,日内、日间RSD均<6.7%。60例患者3组波长的血药浓度差异有统计意义,P=0.01(P<0.05)。结论该方法可用于重症感染患者万古霉素的血药浓度检测,并为临床评估疗效、调整给药剂量提供方法学基础。