基层疾病预防控制中心标准物质的期间核查方法探讨

<正>标准物质是一种或多种足够均匀、很好的被确定了特性值的物质,在基层实验室常作为参照物用于检测样品、质量控制和方法的确认,具有量值溯源的功能,分为有证和非有证两类。《实验室资质认定评审准则》规定:当需要利用期间核查以保持设备校准状态的可信度时,应按照规定的程序进行。实验室应1次或多次使用适当的技术和方法检查在用的标准物质。主要的核查方法有购买标准物质(或标准质控样品)或采用质控图核查标准物质[1-2]。     

浙江省首例人感染H7N9禽流感病例的实验室检测与分析

目的 通过对杭州市萧山区1例疑似人感染禽流感病人咽拭子和鼻腔冲洗液样本进行检测和分析,加深对A型流感病毒抗原变异特性的认识,进一步提高实验室相应的检测能力.方法 以实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测流感病毒核酸,对未能分型的HA、NA和M基因通过逆转录PCR(RT-PCR)扩增而后克隆测定;同时接种狗肾细胞(MDCK)进行病毒培养.结果 样本A型流感病毒核酸检测为阳性,但未能分型;HA、NA、M基因测序结果表明与禽源H7、N9、M基因相似性最高;同时A型流感病毒培养也呈阳性.结论 经过浙江省CDC与中国CDC证实,该患者感染H7N9禽流感病毒,为浙江省首个病例.     

金黄色葡萄球菌肠毒素基因的检测与分型

目的:了解不同来源的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)分离株产肠毒素的情况,以及主要肠毒素SEA、SEB、SEC、SED、SEE基因携带状况。方法:采用小型VIDAS全自动荧光酶标免疫法对46株分别从医院消毒监测样品、公共场所监测样品、食品监测样品以及食物中毒病人粪便和呕吐物中分离到的SA菌株进行肠毒素检测,再采用PCR技术对产肠毒素的菌株进行基因分型。结果:46株SA菌株中,携带肠毒素的为22株,检出率为47.83%。其中以SEA、SEB检出率较高,分别为31.82%和27.27%。不同来源SA分离株携带肠毒素基因的比例不同,24株来自医院消毒监测样品分离株中检出率为41.67%(10/24);4株来自公共场所监测样品分离株中检出率为50.00%(2/4);12株来自食品监测样品分离株中检出率为33.33%(4/12);6株食物中毒样本分离株中检出率为100%(6/6)。结论:46株SA分离株中产肠毒素为22株,比例较高,而且携带肠毒素基因的类型较多。试验表明,VIDAS与PCR技术应用于检测SA分离株中肠毒素基因简单、快速,适合基层疾控部门应用。     

应用实时荧光PCR技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素基因

目的:建立一种简便、特异的荧光PCR检测方法,用于金黄色葡萄球菌肠毒素的检测。方法:按金黄色葡萄球菌SEA～SEE型肠毒素基因序列设计引物,在普通PCR检测体系中,加入SYBR Green I荧光染料,建立荧光PCR检测体系。结果:46株金黄色葡萄球菌中检出22株携带肠毒素基因,阳性率为47.83%。以SEA、SEB检出率较高,分别为31.82%和27.27%;不同来源的分离株携带肠毒素基因的比例不同,同时携带2种及以上毒素基因的菌株占27.27%。结论:荧光PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素的方法具有快速、敏感、特异性高的特点,适用于肠毒素基因的分型与分布的研究,适合基层疾控部门使用。     

1株少见贪铜菌的分离鉴定及耐药性分析

目的对从桶装饮用纯净水中分离出的疑似铜绿假单胞菌菌株进行后续分析。方法分离株依次进行生化鉴定、16S rRNA基因测序与药敏试验。结果该分离株生化鉴定为少见贪铜菌;16S rRNA基因的BLAST序列比对结果与少见贪铜菌LMG 3413T的16S rRNA基因序列同源性为99%;药敏试验显示分离株对阿米卡星、庆大霉素、氨曲南、美罗培南、氨苄西林、磷霉素和妥布霉素耐药,对头孢菌类、内酰胺酶抑制剂、喹诺酮类等抗生素敏感。结论少见贪铜菌是比较罕见的菌血症致病菌之一,免疫力低下患者感染较多。此次研究结果可作为少见贪铜菌相关疾病检测、鉴别、诊断和治疗的依据。     

金黄色葡萄球菌食物中毒菌株肠毒素检测及基因分析

目的:了解一起食物中毒中分离到的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)的生物学特性及其肠毒素基因检测。方法:采用VITEK-32全自动微生物鉴定/药敏分析系统对分离到的金黄色葡萄球菌菌株进行生化鉴定和药敏试验,并采用mini-VIDAS全自动荧光酶标免疫仪对菌株进行肠毒素检测,再采用PCR技术对产肠毒素的菌株进行基因分型。结果:总共分离到的19株金黄色葡萄球菌,所有分离株均对青霉素G耐药,均分泌β-内酰胺酶,肠毒素基因分型检测均为SEA与SEE。结论:19株分离株均携带肠毒素,经鉴定均为SEA与SEE肠毒素混合型,由此对食物中毒的原因有一个较圆满的解释。