流产鼠Caspase-3与laminin B和PAI-1的表达及对妊娠结局的影响

目的:研究阻断CD86协同刺激分子对自然流产模型孕鼠母胎界面Caspase-3、laminin B和PAI-1的表达及对妊娠结局的影响。方法:实验组于妊娠第4.5天腹腔注射大鼠抗小鼠CD86单抗,实验对照组注射大鼠同型IgG2b,正常妊娠组不作任何处理。于妊娠第13.5天计算胚胎吸收率,用免疫组化测定Caspase-3、laminin B和PAI-1的表达,并进行图像分析、检测免疫组化染色灰度值(A)。结果:①实验组的胚胎吸收率显著低于实验对照组(P<0.05);②实验组中Caspase-3蛋白灰度值明显高于实验对照组(P<0.05),实验组中laminin B和PAI-1蛋白灰度值均明显低于实验对照组(P<0.05)。结论:妊娠早期阻断CD86协同刺激分子可使母胎界面中的Caspase-3、laminin B和PAI-1分别通过各自不同的途径发挥免疫耐受作用并且使自然流产模型孕鼠的胚胎吸收率降低至正常妊娠水平。     

Significance of cyclin E, pl6ink4a and ki67 Overexpression in Cervical Exfoliated-cell Specimens for Primary Screening of HPV-related Cervical Carcinoma

The aim of this study is to investigate cyclin E, pl6inkda and ki67 as possible diagnostic biomarkers for cervical preneoplasia using cervical exfoliated-cell specimens, and evaluate the significance for screening patients at high risk of developing cervical carcinoma. The expression of cyclin E, pl6inkda and ki67 was examinated in 78 cervical exfoliated epithelial specimens diagnosed as atypical squamous cells of undetermined significance (ASCUS) (12 cases), cervical intraepithelial neoplasia (CIN) of type 1 (17 cases), CIN2_3 (38 cases) and invasive carcinoma (11 cases) using immunohistochemical analysis, and simultaneously, the DNA status of human papillomavims (HPY) type 16/18 was detected by polymerase chain reaction (PCR) using type specific primers, cyclin E, pl6inkda and ki67 were all overexpressed in CINs and invasive carcinoma, compared with little expression in ASCUS ( P &lt;0.005). Overexpression of cyclin E was observed in CIN1(94.1%, X^2 = 21.16, P &lt; 0.01), and p16inkda and ki67 were overexpressed in invasive carcinoma (100% and 90.9% respectively). The degree of pl6inkda and ki67 expression correlated well with that of epithelial lesions ( P &lt; 0.005). HPV16/18 infection was assessed in C1Ns and invasive carcinoma samples, and revealed a significant relationship with the degree of cervical epithelial lession. The expression level of pl6inkda and ki67 seemed more closely associated with HPVI6 infection than that of cyclin E (rs= 1.0 vs rs=0.4). Only 1 case in CINI and d cases in CIN2-3 of HPV18 positive samples were detected. Therefore no statistical significance was found by statistical analysis. Overexpression of cyclin E, pl6inkda and ki67 in CINs and invasive carcinoma cells demonstrates the potential use of cyclin E, pl6inkda and ki67 as diagnostic biomarkers for HPV-related cervical neoplastic lesions. In addition, this technique can be used for screening patients at high risk of developing cervical carcinoma.     

HPSE和Syndecan-1与人类早期复发性自然流产关系

目的 探讨乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)和蛋白聚糖1(syndecan-1)在人类早期复发性自然流产绒毛组织中的表达及两者与复发性自然流产的关系.方法 采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测山西大同地区非意愿性正常妊娠者(35例)和早期复发性自然流产者(28例)绒毛组织中HPSE和syndecan-1的mRNA表达水平,分析探讨两者与自然流产关系.结果 HPSE mRNA在正常妊娠组表达的阳性率为85.71％(30/35),明显高于复发性自然流产组的57.14％(16/28),差异有统计学意义(P＜0.05);而在正常妊娠组syndecan-1 mRNA的阳性表达率为54.28％(19/35),明显低于复发性自然流产组的82.14％ (23/28),差异亦有统计学意义(P＜0.05);HPSE和syndecan-1蛋白表达呈负相关(r=-0.386,P＜0.01).结论 在复发性自然流产中HPSE的表达降低,导致降解细胞外基质能力下降,syndecan-1表达增高,影响胚泡植入,导致自然流产的发生.     

宫颈癌组织中MCM4、CDC6的表达及其与HPV16/18感染的相关性

目的:研究微小染色体维持蛋白4(minichromosome maintenance proteins 4,MCM4)、细胞分裂周期蛋白(cell division cycle 6,CDC6)在宫颈癌组织中的表达及其与人乳头状瘤病毒16/18型(human papilloma virus 16/18 type,HPV16/18)感染的相关性及其临床意义.方法:收集2006-2007年间山西大同市第五人民医院病理科经病理证实的50例宫颈癌、20例宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)Ⅰ、20例CINⅡ-Ⅲ、20例正常宫颈组织石蜡标本,以免疫组织化学法检测这些组织标本中MCM4、CDC6的表达,同时采用PCR技术检测HPV16/18的感染情况.结果:(1)在宫颈癌组织中MCM4、CDC6表达的阳性率显著高于CIN和正常宫颈组织(均P<0.05),且MCM4、CDC6阳性表达率与宫颈癌病理分级和淋巴转移相关(均P<0.05),而与年龄分组、临床分期无关(均P>0.05).(2)HPV16/18 感染在正常宫颈组织、CIN和宫颈癌组织中的阳性率依次升高(P<0.05),但与宫颈癌患者年龄、临床分期、病理分级、淋巴转移无关(均P>0.05).(3)宫颈癌组织中MCM4和CDC6的表达呈正相关(r= 0.390;P<0.05);MCM4和CDC6表达均与HPV16/18感染相关(r=0.634, P<0.05; r=0.386, P<0.05).结论:宫颈癌及CIN组织中MCM4、CDC6表达的改变与HPV16/18感染密切相关,共同影响CIN的发展及宫颈癌的发生与发展.     

宫颈癌组织中CDC6、CDK1的表达及其与HPV16／18感染的相关性研究

目的：研究CDC6、CDK1在宫颈癌组织中的表达及其与HPV16/18感染的相关性，以探讨宫颈癌的发生机制，进一步寻找宫颈癌诊断的新的分子标志物。方法：采用免疫组织化学方法对50例宫颈癌石蜡标本、宫颈上皮内瘤样病变CINI20例、CINⅡ-Ⅲ20例、正常宫颈组织20例进行CDC6、CDK1的检测，同时采用PCR技术检测HPV16/18感染情况。结果：在宫颈癌组织中CDC6、CDK1的阳性率高于CIN和正常宫颈组织，差异有显著性（均P〈0．05），且CDC6、CDKl阳性表达率与病理分级有关，差异有显著性（均P〈0．05），CDC6阳性表达率均与淋巴结转移有关（P〈0．05）；CDK1阳性表达率均与淋巴结转移无关（P〉0．05）；在宫颈癌组织中CDC6和CDK1的阳性表达率与年龄、临床分期无关（均P〉0．05）。HPV16/18在正常宫颈组织、CIN和宫颈癌中的阳性率逐渐升高，差异有显著性（P〈0．05），但与临床分期、病理分级、淋巴转移、年龄无关（均P〉0．05）。CDK1和CDC6的表达有正相关性（L=0．529，P〈0．05）；CDC6与HPV16/18感染有关（r=0．386，P〈0．05）；CDK1与HPV16/18感染无关（rs=0．145，P〉0．05）。结论：宫颈上皮内瘤样病变及宫颈癌组织中CDC6表达的改变可能与HPV16/18感染有关，且互相作用，共同影响CIN的发展及宫颈癌的发生。这些指标综合分析可能为阐明HPV16/18的恶性转化机制以及为提高宫颈癌及其癌前病变诊断率提供参考依据。CDC6、CDK1的异常表达与宫颈癌的恶变程度有关，可作为宫颈癌筛查、预后判断的有用指标。     

宫颈癌中RASSF1A基因高度甲基化及微卫星变异的研究进展

新近克隆出来的Ras相关区域家族1A基因(RASSF1A)已被确认为一种候选抑癌基因(TSGs),位于人类染色体3p21.3上。RASSF1A基因失表达见于多种人类肿瘤中,如肺癌、乳腺癌、肝癌、宫颈癌、肾癌等,表明了其在致癌作用中的重要性。高度甲基化和微卫星变异(mic-rosatellite alterations)是导致RASSF1A基因失活的主要机制,其参与了细胞凋亡信号的转导、微管的稳定作用和有丝分裂的进程,作为一种Ras负向调节因子阻止细胞生长,诱导细胞凋亡,促进肿瘤的发生和发展。宫颈癌中存在RASSF1A基因的表达缺失,且与人乳头状瘤病毒(HPV)感染之间存在一定的相关关系。     

宫颈癌组织中CDK1、TFF2的表达及其与HPV16/18感染的相关性研究

目的研究细胞周期依赖性蛋白激酶1（CDK1）、三叶因子2（TFF2）在宫颈癌中的表达与人乳头瘤病毒16／18（HPV16/18）感染的相关性及其临床意义，探讨宫颈癌的发生机制。方法采用免疫组织化学检测50例宫颈癌石蜡标本、宫颈上皮内瘤变I级（CIN1）20例、CINⅡ-Ⅷ20例、正常宫颈组织20例进行CDK1、TFF2的检测，同时采用PCR技术检测HPV16/18感染情况。结果宫颈癌组织中CDK1的阳性率高于CIN和正常宫颈组织（P〈0．05），CDK1阳性表达率与病理分级有关（P〈0．05）。宫颈癌组织中TFF2的阳性率低于CIN和正常宫颈组织（P〈0．05），TFF2的阳性表达率与年龄分组有关（P〈0．05）。HPV16/18在正常宫颈组织、CIN和宫颈癌中的阳性率逐渐升高（P〈0．05），但与年龄、临床分期、病理分级、淋巴转移等均无关（P〉0．05）。CDK1和TFF2、HPV16/18的表达无相关（P〉0．05）；TFF2与HPV16/18感染呈负相关（rs=-0．500，P〈0．05）。结论宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中CDK1、TFF2表达的改变和HPV16/18感染共同影响CIN的发展及宫颈癌的发生和发展。     

FHIT基因杂合性丢失与宫颈癌关系

目的探讨脆性组氨酸三联体基因（Fragile histidine triad，FHIT）杂合性丢失（Loss of heterozygosity，LOH）及人乳头瘤病毒（Human Papillomavirus，HPV）感染与宫颈癌的关系。方法选取FHIT基因的2个微卫星多态标记，采用聚合酶链反应（Polymerase chain reaction，PCR）法对50例宫颈癌及40例宫颈上皮内瘤样病变（Cervical intraepithelial neoplasia，CIN）组织进行杂合性丢失及HPV16感染的检测。结果在D3S1234和D3S4103位点上宫颈癌的杂合性丢失发生率分别为46％（23／50）、40％（20／50）；宫颈上皮内瘤样病变的杂合性丢失发生率分别为40％（16／40），37．5％（15／40）。宫颈癌与CIN在D3S1234位点上的LOH差异无统计学意义（P〉0．05）；在D3S4103位点上也无统计学意义（P〉0．05）。但宫颈癌在2位点上LOH发生频率均高于CIN，且高级别CIN发生率高于低级别CIN。HPV16感染的阳性组中LOH发生率为79．5％（35／44）；阴性组LOH发生率为33．3％（2／6），组间LOH的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论FHIT基因的变异可能发生在宫颈癌变的晚期；FHIT基因的LOH对于宫颈癌的筛查、早期诊断及判断预后可能具有临床实用价值。