山东省HCV分离株C 区及NS5 区核苷酸序列分析

①目的 探讨山东省丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）分离株Ｃ区、ＮＳ５区的核苷酸序列及其基因型别。②方法 以ＲＴ－ｎｅｓｔ－ＰＣＲ方法从１例临床ＨＣＶ感染者血清中分别扩增出ＨＣＶＣ区（４３２ｂｐ）及ＮＳ５区（３１９ｂｐ）的基因片段,将其克隆于Ｔ载体上,以双脱氧末端终止法自动测序并进行序列分析。③结果 该分离株与ＧｅｎＢａｎｋ中５０多个１ｂ型分离株同源性均在９０％以上,其中Ｃ区与中国北京的１ｂ型株ＨＣＵ６３３７     

EBV相关胃癌与P53基因异常的研究

[目的]探讨EBV感染和p53基因异常在胃癌发生发展中的病因学作用.[方法]应用免疫组化技术检测13例EBV相关胃癌(EBV associated gastric carcinoma,EBVaGC),45例临床指标与之匹配的EBV阴性胃癌(EBV negative gastric carcinoma,EBVnGC)以及58例相应癌旁组织中p53蛋白的表达;PCR-SSCP银染技术检测p53基因exon 5～8突变情况.[结果]①胃癌组p53蛋白阳性率为86.2%(50/58),而相应癌旁组织均为阴性,胃癌组p53蛋白的阳性率明显高于癌旁组织组,两组间有极显著性差异(P=0.0000).②EBVnGC p53蛋白阳性率为86.7%(39/45),过表达率为57.8%(26/45);EBVaGC p53蛋白阳性率为84.6%(11/13),过表达率仅为15.4%(2/13).两组间p53蛋白的阳性检出率无明显差异(P=0.7912),但EBVaGC组p53蛋白过表达率明显低于EBVnGC组,两组间有显著性差异(P=0.0085).③2例EBVnGC检测到p53基因突变,突变均位于exon 5,13例EBVaGC和58例相应癌旁组织均未检测到p53基因突变.[结论]p53基因异常与胃癌的发生密切相关,EBVaGC组织中存在p53蛋白的表达和过表达,但p53蛋白的异常累积可能并非p53基因突变所致.     

胃癌组织中EB病毒的检测及其增殖期基因的表达

目的；探讨EB病毒(Epsteirt-Barr virus．EBV)感染与胃癌发生的关系及其增殖期基因在EBV阳性胃癌发生中的作用。方法：应用聚合酶链反应（PCR）-Southern杂交检测185例胃瘟组织和相应癌旁组织中特异性EBVDNA片段．PER阳性标本用原位杂交(ISH)技术检测石蜡切片组织中EBV犏码小RNA1(EBER1）的表达．以确定EBV阳性胃癌一再应用RT-PCR和Southern杂交技术检测EBV增殖期基因(即刻早期基困BZLF1、BRLF1，早期基因BARF1、BHRF1．晚期基冈BcLF1、BLLF1)的表达．结果：13例胃癌组织EBV阳性(7．03％)，癌旁组织未检测到EBV感染．胃癌和癌旁组织中EBV阳性纺有显著性差异(X^2=11.0769．P=0．0009)。EBV阳性和阴性胃癌在年龄、病理类型、临床分期、淋巴结转移和发生部位的差别均无显著性(P=0．973，0．141，0．259，0．586，0．062)．但性别之间的差异有显著性，男性EBV阳性率高于女性（X^2=52317．P=0．021)。增殖期基因中即刻早期基因BZLF1有6例表达阳性．而BRLF1均为阴性；早期基因中有6铡BARF1表达阳性．2例BHRF1表达阳性；晚期基因BcLF1有7倒表达阳性．而BLLF1均为阴性。结论：EBV感染与胃癌的发生有一定的相关性．部分EBV阳性胃癌组织中存在EBV增殖性感染．早期基因BARF1和BHRF1在EBV阳性胃癌发生过程中可能有重要作用。     

人疱疹病毒6型和7型感染与风湿性关节炎相关性的研究

[目的]探讨人疱疹病毒6型(Human herpes virus 6，HHV6)和7型(HHV7)感染与风湿性关节炎病因有无相关性。[方法]2003年采用巢式PCR技术检测40例风湿性关节炎病人和138名健康献血员外周血单个核细胞和血浆中HHV6 DNA与HHV7 DNA。[结果]风湿性关节炎病人外周血单个核细胞的HHV6 DNA和HHV7 DNA阳性率与对照组的差异均无统计学意义(P＞0．05)；部分风湿性关节炎病人血浆中可检出HHV6 DNA与HHV7 DNA，对照组则为阴性。[结论]风湿性关节炎病人中可能存在HHV6或HHV7的活动性感染，HHV6、HHV7与风湿性关节炎的发生发展有一定关系。     

TLR9-1486和TLR9-2848基因多态性与胃癌易感性关系

目的 探讨Toll样受体9(TLR9)编码基因TLR9-1486和TLR9-2848位点多态性以及EB病毒(EBV)感染与胃癌易感性的关系。方法 选取131例胃癌病人为研究对象,包括43例EBV相关胃癌(EBVaGC)和88例EBV阴性胃癌(EBVnGC),同时随机抽取66例健康人外周血标本作为对照。采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测TLR9基因-1486位点T/C和-2848位点G/A多态性。结果 TLR9-1486T/C位点多态性分析显示,胃癌组和对照组3种基因型分布和等位基因频率比较差异无显著性(P>0.05);EBVaGC组和EBVnGC组中各基因型分布和等位基因频率差异也无显著性(P>0.05);与携带T等位基因者相比较,C等位基因携带者胃癌和EBVaGC发病风险无明显升高趋势。TLR9-2848G/A位点多态性分析显示,胃癌组和对照组3种基因型分布和等位基因频率差异无显著性(P>0.05);EBVaGC组和EBVnGC组中各基因型分布和等位基因频率差异也无显著性(P>0.05);与G等位基因携带者比较,A等位基因携带者胃癌和EBVaGC易感性无明显升高。结论 TLR9-1486和TLR9-2848位点多态性与胃癌易感性无关,且在EBVaGC发生中与EBV感染无协同关系。     

青少年特发性脊柱侧凸的遗传机制研究现状及基因关系图

作为青少年特发性脊柱侧凸(AIS)发病的研究热点,遗传机制探索经过候选基因及全基因组关联研究(GWAS)时代后,初步鉴定一些相关基因.综述AIS相关基因研究现状,并初步构建AIS基因关系网络图.在NCBI-Pubmed数据库和Web of Science中检索“adolescent idiopathic scoliosis”和“gene”,分类归纳基因.用String-db构建基因关系图.共识别35个AIS相关基因,将其按病因学假设可分为结缔组织、神经系统活性物质、褪黑素合成与代谢、青春期与生长及功能未知.大部分基因呈现网络关系,其中IL6、ESR1、ESR2、VDR、TGFB1、IGF1可能是AIS遗传机制的重要基因.3个GWAS位点有两个在网络之外,提示新通路.AIS易感基因研究尚初步,需要深入研究,解析机制,鉴定新网络.     

新疆哈萨克族原发性高血压患者发病与内皮型一氧化氮合酶基因27 bpVNTR多态性的关联性

目的：探讨新疆哈萨克族高血压患者内皮型一氧化氮合酶基因第4内含子27bpVNTR多态性与原发性高血压关联性.方法：①选择2001-01/2004-03在新疆医科大学第一附属医院高血压科就诊的原发性高血压患者195例（高血压组）,男90例,女105例.选择健康查体者182例（对照组）,男74例,女108例,平均年龄（48&;#177;10）岁.所选人群均为新疆巴里坤县海子沿乡、萨尔乔克乡、黄土厂乡、巴墙子乡的哈萨克族牧民,且均对实验目的知情同意.②应用聚合酶链反应、限制性内切酶方法检测两组内皮型一氧化氮合酶基因第4内含子27 bpVNTR多态性.③计算两组基因型频率以确认符合Hardy-Weinberg平衡.由基因型频率计算等位基因频率.组间等位基因频率和基因频率比较采用x2检验.临床指标比较采用t检验.不同基因型与临床指标间的关系比较采用单因素方差分析.结果：①内皮型一氧化氮合酶基因第4内含子VNTR的4次和5次重复等位基因的聚合酶链反应产物长度分别为393 bp（40a allele）和420 bp（4b allele）.其重复序列分别为108（4&;#215;27 bp）和135（5&;#215;27 bp）.②对照组与高血压组的内皮型一氧化氮合酶基因27 bpVNTR多态性4b/4b,4b/4a,4a/4a基因型频率分布分别为0.83,0.15,0.02和0.81,0.19,0.00;4b和4a等位基因分布频率分别为0.91,0.09和0.90,0.10,符合HardyWeinberg平衡.③群体相关分析结果表明：两组内皮型一氧化氮合酶基因的4b及4a等位基因分布差异不明显（P＞0.05）;基因型频率之间差异也不明显（P＞0.05）.④内皮型一氧化氮合酶27 bpVNTR不同基因型高血压患者收缩压、舒张压、年龄、体质量指数、空腹血糖及胆固醇都比较接近.高血压组内皮型一氧化氮合酶4b/4a基因型男性患者三酰甘油较4b/4b基因型高（P＜0.01）.结论：①内皮型一氧化氮合酶基因27 bpVNTR多态性可能与新疆哈萨克族人原发性高血压无关联性.②内皮型一氧化氮合酶4a/4b基因型可能与新疆哈萨克族高血压患者三酰甘油水平有关.     

靶向LMP1基因siRNA作用对AP-1及其相关因子表达的影响

背景与目的: 潜伏膜蛋白LMP1是EBV基因组BamH I Nhet片段上BNLF1编码的一种跨膜蛋白,它是发现最早的能在体外恶性转化细胞系的EBV潜伏期蛋白.本研究旨在探讨LMP1沉默对AP-1信号转导通路及其下游与细胞转化、增殖和凋亡等相关冈子转录表达的影响.方法: 应用50 nmol/L靶向LMP1功能区编码序列的siRNA649转染EBV阳性的胃癌上皮细胞GT38,分别作用24、48、72、96、120 h,采用RT-PCR检测c-Jun,生存素,CDK4和MMP9 mRNA转录水平:免疫组化法检测细胞生存素蛋白表达;Western印迹法检测c-Jun,JunB和CDK4蛋白表达.结果: 靶向LMP1特异性siRNA作用后,各时间点c-Jun和生存素mRNA水平均明显低于细胞对照组(P＜0.05),c-Jun以24 h时降低最为明显,而生存素以48 h时降低最为明显;CDK4 mRNA水平均明显高于细胞对照组(P＜0.05);转染后24、48、72 h时MMP9 mRNA表达水平均明显低于细胞对照组(P＜0.05),96 h和120 h时MMP9则无明显改变(p＞0.05).与细胞对照比较,c-Jun和JunB蛋白表达均下调,JunB蛋白表达往作用第5天时有所恢复,CDK4蛋白表达均上调.免疫组化检测结果显示转染后细胞质中代表生存素阳性的棕色颗粒明显减少.结论: 靶向LMP1功能区编码序列的siRNA转染可影响EBV阳性胃上皮细胞AP-1及其下游相关因子的表达,进而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡.     

高血压相关基因CAT启动子多态结构对基因转录活性作用初步研究

目的 研究高血压相关基因过氧化氢酶(Catalase,CAT)基因启动子上游区T多态结构对转录活性的影响.方法 将CAT基因启动子T多态片断插入pGFP-1报告载体GFP基因上游的多克隆位点,重组质粒转化E.coli TG1受体细胞,经蛋白电泳和荧光显微镜观察,检测GFP报告基因的表达情况.结果 显示CAT启动子上游T多态不影响GFP报告基因的表达,实验结果与人细胞中分析结果相同.结论 说明从多态遗传结构而言,CAT启动子上游T多态结构不影响转录活性.