结直肠癌患者血清微小RNA-107和微小RNA-34a的表达情况及其诊断结直肠癌的价值

目的 分析结直肠癌患者血清微小RNA-107(miR-107)和微小RNA-34a(miR-34a)的表达情况及其诊断结直肠癌的价值。方法 选取50例经病理诊断为结直肠癌的患者作为结直肠癌组，50例健康人群作为对照组。应用荧光定量PCR法检测两组受试者血清miR-107和miR-34a的相对表达量。比较不同临床病理特征的结直肠癌患者的血清miR-107和miR-34a相对表达量。采用受试者工作特征曲线分析血清miR-107和miR-34a的相对表达量对结直肠癌的诊断价值。结果 (1)结直肠癌组血清miR-107的相对表达量高于对照组，而miR-34a的相对表达量低于对照组(均P<0.05)。(2)Ⅰ期结直肠癌患者的血清miR-107相对表达量低于Ⅳ期患者，而血清miR-34a的相对表达量高于Ⅳ期患者(均P<0.05);高分化结直肠癌患者的血清miR-34a相对表达量高于低分化患者(P<0.05);有淋巴结转移的结直肠癌患者的血清miR-34a相对表达量低于无淋巴结转移患者(P<0.05)。结直肠癌患者的血清miR-107相对表达量与TNM分期呈正相关，血清miR...     

2种开发重组疫苗的原核抗原展示系统

疫苗的研究已进行了很多年,各种新的思维模式都认为需要通过激发免疫反应来避免感染性疾病和肿瘤的发生.这些反应包括细胞毒性T细胞反应(CTLs),辅助性T细胞反应和中和反应.     

弓形虫MIC8基因的克隆及真核表达质粒的构建

目的构建弓形虫微线体MIC8的真核表达重组质粒。方法设计合成弓形虫MIC8引物,运用PCR方法扩增其基因片段克隆至真核表达质粒pCDNA3．1,从而构建重组表达质粒pCDNA3．1-MIC8。结果PCR扩增弓形虫MIC8基因序列正确,构建的重组表达质粒pCDNA3．1-MIC8经PCR、HindⅢ和XbaⅠ双酶切和测序鉴定正确。结论成功获得真核表达重组质粒3-pCDNA3．1－MIC8,为进一步研究弓形虫疫苗的免疫保护性奠定基础。     

2型糖尿病大血管病变患者脂代谢紊乱与ApoE基因多态性及中医证候的研究

目的:研究2型糖尿病大血管病变患者脂质谱与载脂蛋白E(ApoE)基因多态性及中医证候的相关性。方法:60例T2DM大血管病变患者按中医证候分为阴虚燥热、气阴两虚、阴阳两虚3组,每组20例,另设正常对照组20例,用PCR-RFLP对ApoE进行分析,并对患者脂质谱进行分析。结果:糖尿病各组患者血脂较正常对照组均显著改变(P<0.01),其中气阴两虚组患者的TC、LDL-C较阴虚燥热、阴阳两虚组有极显著升高(P<0.05,P<0.01)。等位基因E2组的TG较E3、E4组有极显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:2型糖尿病大血管病变患者的血脂随着病情的加重和病程的延长存在不同程度的异常,各种中医证候之间脂代谢的差异与ApoE基因的多态性有一定关系。     

弓形虫MIC8基因对弓形虫病的免疫保护性研究

目的观察弓形虫MIC8基因对弓形虫病免疫保护性的效果。方法用PCR方法扩增弓形虫MIC8基因,定向克隆到真核表达质粒pEGFP-N1中,构建重组表达载体pEGFP-MIC8;MIC8-EGFP转染293T细胞,荧光显微镜观察表达情况;然后分别用质粒pEGFP-MIC8、pEGFP-N1空载体及生理盐水肌肉注射免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,末次免疫3周后用弓形虫RH株速殖子感染免疫小鼠。结果 PCR扩增弓形虫MIC基因序列正确,构建的重组表达载体pEGFP-MIC8鉴定正确,荧光显微镜下观察到重组质粒能够在293T细胞中表达。弓形虫攻击感染后,质粒pEGFP-MIC8免疫小鼠与对照组相比,小鼠的存活时间有一定的延长。结论构建的真核表达重组质粒pEGFP-MIC8对抗击弓形虫攻击感染能够激发一定的免疫保护性。     

FITC标记葡聚糖粘附定量测定肿瘤组织血管密度

目的:测定肿瘤组织异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-dextran)粘附水平是否可作为肿瘤血管密度的量化指标.方法:用endolgin疫苗免疫小鼠后,在同一只小鼠上同时建立小鼠Meth A纤维肉瘤模型和藻酸盐包被肿瘤细胞试验模型,2周后将FITC-dextran注射入小鼠体内,然后手术完整摘取肿瘤组织和藻酸盐颗粒,取部分肿瘤组织进行免疫组化检测血管密度的同时,将其他组织和藻酸盐颗粒匀桨并离心,取上清检测荧光强度,分析二者之间是否存在直线相关关系.结果:免疫组化和肉眼观察显示2种测定方法均有明显的血管生成效应,用FITC-dextran粘附测定肿瘤组织血管相对密度和藻酸盐包被试验均能较好地量化测定抗血管生成效果,直线相关分析表示二者的疫苗免疫实验组FITC-dextran的测定值之间呈明显的正性相关关系(r = 0.962,P＜0.01).结论:和藻酸盐包被试验相比,FITC-dextran测定肿瘤组织血管相对密度是一种简单有效的量化测定肿瘤组织血管生成水平的方法.     

小鼠FGFR1/MIP3a-Fc融合基因真核表达载体的构建及表达

目的 构建小鼠成纤维细胞生长因子受体1/巨噬细胞炎性蛋白3a-Fc融合基因(FGFR1/MIP3a-Fc)的真核表达质粒,并在293T细胞中的表达。方法 设计合成FGFR1/MIP3a融合基因引物,用PCR方法扩增获得FGFR1/MIP3a基因片段,用内切酶消化后插入pc DNA3.1(+)/Fc(Mouse Ig G2a)质粒中,构建FGFR1/MIP3a-Fc融合基因表达质粒;经PCR鉴定、酶切鉴定以及测序鉴定后,将该融合基因表达质粒瞬时转染293T细胞,用ELISA法检测其在293T细胞的表达。结果 经PCR、酶切鉴定以及测序证实,FGFR1/MIP3a-Fc融合基因表达质粒构建成功;ELISA检测FGFR1/MIP3a-Fc融合基因表达质粒能够在293T细胞中表达。结论 FGFR1/MIP3a-Fc融合基因表达质粒构建成功,该质粒能够在293T细胞中表达。     

大肠埃希菌JM109表面抗原 Ag43基因敲除与鉴定

目的：敲除大肠埃希菌JM109表面抗原43（Ag43）基因并对其进行鉴定。方法采用Sigma公司的TargeTron基因敲除系统和Ag43基因特异设计的PCR引物扩增获得突变Ⅱ组内含子RNA蛋白复合体（RNP）基因序列,然后将这段基因序插入表达RNP的质粒pACD4K‐C中,获得Ag43特异的重组RNP质粒pACD4K‐Ag43。最后将pACD4K‐Ag43转化JM109,经过IPTG诱导表达将Ⅱ组内含子插入Ag43特异的部位。结果通过软件分析发现插入Ⅱ组内含子的最佳位点位于碱基1812和1913之间,琼脂糖凝胶电泳发现PCR扩增的突变Ⅱ组内含子RNP基因序列分子量大小和预期值（350 bp）相一致,用NheⅠ和HindⅢ二种酶切分析重组质粒pACD4K‐Ag43结果和预期值相符,PCR扩增相应产物和基因测序显示Ⅱ组内含子特异地插入Ag43基因碱基序列的1812／1913位点。结论成功地将大肠埃希菌JM109中的基因敲除,为更进一步深入研究Ag43基因的功能和将其作为制备重组Ag43嵌合蛋白的宿主菌奠定了基础。     

以Endoglin为靶点的新型免疫偶联物的抗肿瘤作用

目的 观察抗Endoglin(END)单克隆抗体与阿霉素(ADM)偶联物的抗肿瘤作用.方法 采用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester)为交联剂制备END-ADM偶联物,MTT法测定其在体外对肿瘤细胞增殖的抑制作用,以小鼠肝癌H22细胞皮下移植瘤模型观察其在体内抑制肿瘤生长的效果.结果 等细胞毒性剂量的偶联物END-ADM与ADM对体外培养的肝癌细胞杀伤作用差异不大.动物实验中ADM 0.4 mg/kg对H22肝癌的抑制率为29.33%,而等细胞毒性剂量的END-ADM偶联物的抑瘤率达到86.67%,抑制作用显著增强(P<0.05),与ADM相比,偶联物还可显著延长荷瘤小鼠的中位生存时间(P<0.05).结论 END-ADM偶联物对小鼠肝癌H22细胞皮下移植瘤的抑制作用比ADM显著增强,可能成为新型的抗肿瘤靶向药物.     

弓形虫MIC8基因对弓形虫病的免疫保护性研究

目的观察弓形虫MIC8基因对弓形虫病免疫保护性的效果。方法用PCR方法扩增弓形虫MIC8基因,定向克隆到真核表达质粒pEGFP-N1中,构建重组表达载体pEGFP-MIC8;MIC8-EGFP转染293T细胞,荧光显微镜观察表达情况;然后分别用质粒pEGFP-MIC8、pEGFP-N1空载体及生理盐水肌肉注射免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,末次免疫3周后用弓形虫RH株速殖子感染免疫小鼠。结果 PCR扩增弓形虫MIC基因序列正确,构建的重组表达载体pEGFP-MIC8鉴定正确,荧光显微镜下观察到重组质粒能够在293T细胞中表达。弓形虫攻击感染后,质粒pEGFP-MIC8免疫小鼠与对照组相比,小鼠的存活时间有一定的延长。结论构建的真核表达重组质粒pEGFP-MIC8对抗击弓形虫攻击感染能够激发一定的免疫保护性。