PTZ点燃癫痫大鼠海马BMP4的表达研究

目的观察骨形成蛋白4（BMP4）基因在戊四氯（PTZ）点燃癫痫大鼠海马中的表达，并探讨其与癫痫发病机制的关系。方法将40只成年雄性SD大鼠随机分为对照组和实验组。实验组采用PTZ点燃癫痫大鼠，按点燃进程，又随机分为Ⅰ级组、Ⅲ级组、Ⅳ级组和Ⅴ级组。用地高辛标记特异性寡核苷酸探针原位杂交组织化学技术和图像分析技术，观察海马BMP4表达的变化。结果发现应用PTZ点燃后，Ⅱ级以上大鼠海马区BMP4的表达增加。Ⅲ和Ⅳ级大鼠海马CA3及DGBMP4的表达明显高于对照组（P〈0．01）；Ⅴ级大鼠在发作后海马CA3及DGBMP4的表达呈逐渐下降。结论BMP4可能参与了癫痫的发生、发展过程。     

Noggin参与海人酸损伤后成年大鼠海马颗粒下区颗粒细胞增殖

目的 探讨侧脑室注射海人酸(KA)致大鼠海马损伤后Noggin的表达变化及其与颗粒细胞增殖的关系.方法 健康雄性SD大鼠32只采用随机数字表法分为实验组(16只)及对照组(16只).对照组又分为生理盐水对照组和空白对照组,各8只.实验组大鼠侧脑室注射KA,生理盐水对照组注射等剂量生理盐水.空白对照组不作处理.侧脑室注射KA 1周内,尼氏染色检测海马神经元的丢失.免疫荧光染色与原位杂交的方法检测海马齿状回BrdU标记细胞与Noggin mRNA阳性细胞的变化.结果 在侧脑室注射KA致海马损伤后1周,海马CA3、CA4区神经元丢失明显.与生理盐水对照组比较,实验组海马齿状回BrdU阳性细胞升高,差异有统计学意义(P=0.006),其中注射侧较对侧更为明显.海马Noggin mRNA阳性细胞在第3天时升高,第7天时下降.结论 侧脑室注射KA致海马损伤后.成年大鼠海马齿状回颗粒细胞异常增殖可能与Noggin表达波动有关.     

TH基因修饰的神经干细胞脑内移植对帕金森病模型动物的旋转行为及神经生化的影响

背景:神经干细胞(neuronalstemcells,NSCs)能提供多巴胺能神经元来治疗帕金森病(Parkinsondisease,PD),但脑内移植NSCs治疗PD的疗效目前观察结果欠佳。研究显示酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase,TH)基因脑内移植能缓解PD的症状,TH基因修饰的NSCs脑内移植可能使PD的治疗效果出现新的结局。目的:探讨TH基因修饰的NSCs脑内移植对PD模型动物旋转行为和神经生化的影响。设计:完全随机对照实验。地点和对象:本实验选择105只大鼠,在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。干预:构建pN2ATH反转录病毒载体质粒,用PA317细胞包装,G418筛选阳性克隆,病毒上清感染NSCs,将NSCs和表达TH的NSCs植入PD大鼠纹状体内,测定移植后不同时间PD大鼠旋转行为改善以及多巴胺和3,4-二羟基苯乙酸(dihydroxy-phenylaceticacid,DOPAC)含量变化。主要观察指标:PD大鼠旋转行为改善以及多巴胺和DOPAC含量变化。结果:TH基因修饰的NSCs移植8周后能显著降低PD大鼠旋转行为,增加纹状体多巴胺和DOPAC含量,疗效好于单纯NSCs移植组和对照组。结论:TH基因修饰的NSCs脑内移植能增加纹状体多巴胺和DOPAC含量,降低PD大鼠旋转行为,从而对PD大鼠有明显的治疗作用。     

TH基因修饰的神经干细胞脑内移植对帕金森病模型动物的旋转行为及神经生化的影响

背景：神经干细胞(neuronal stem cells，NSCs)能提供多巴胺能神经元来治疗帕金森病(Parldnson disease，PD)，但脑内移植NSCs治疗PD的疗效目前观察结果欠佳。研究显示酪氨酸羟化酶(tyrosine hydIDxylase，TH)基因脑内移植能缓解PD的症状，TH基因修饰的NSCs脑内移植可能使PD的治疗效果出现新的结局。目的：探讨TH基因修饰的NSCs脑内移植对PD模型动物旋转行为和神经生化的影响。设计：完全随机对照实验。地点和对象：本实验选择105只大鼠，在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。干预：构建pN2ATH反转录病毒载体质粒，用PA317细胞包装，G418筛选阳性克隆，病毒上清感染NSCs，将NSCs和表达TH的NSCs植入PD大鼠皱状体内，测定移植后不同时间PD大鼠旋转行为改善以及多巴胺和3，4-二羟基苯乙酸(dihydroxy-phenyl acetlc acid，OOPAC)含量变化。主要观察指标：PD大鼠旋转行为改善以及多巴胺和DOPAC含量变化。结果：TH基因修饰的NSCs移植8周后能显降低PD大鼠旋转行为。增加纹状体多巴胺和DOPAC含量，疗效好于单纯NSCs移植组和对照组。结论：TH基因修饰的NSCs脑内移植能增加纹状体多巴胺和DOPAC含量，降低PD大鼠旋转行为，从而对PD大鼠有明显的治疗作用。     

BMP-2对室管膜前下区神经干细胞向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响

目的 探讨骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对室管膜前下区(anterior subventricular zone,SVZa)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响.方法 体外培养SVZa NSCs,分为对照组、BMP-2组、BMP-2+Noggin组和Noggin组,通过免疫荧光染色和流式细胞术,观察其分化为酪氨酸羟化酶阳性(TH+)神经元的情况;用RT-PCR检测DIX5 mRNA表达水平.结果 BMP-2组SVZa NSCs向TH+神经元分化的比例和DLX5 mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.05),且这种效应能被其拮抗剂Noggin特异性抑制.结论 BMP-2可能通过上调DLX5表达水平从而促进SVZa NSCs向多巴胺能神经元分化.     

血管内治疗后循环动脉瘤（附24例分析）

目的总结后循环动脉瘤的血管内治疗经验。方法回顾性分析采用血管内栓塞治疗24例后循环动脉瘤的临床资料。入院时Hunt-Hess分级：0级3例,Ⅰ级8例,Ⅱ级6例,Ⅲ级5例,Ⅳ级2例。支架辅助弹簧圈栓塞4例,单纯弹簧圈栓塞20例。结果动脉瘤达致密栓塞（99%～100%）13例,大部分栓塞（90%～98%）8例,部分栓塞（〈90%）3例。随访6～22个月,平均9.2个月;GOS5分16例,4分5例,3分2例,2分1例,无再出血发生。结论血管内栓塞是后循环动脉瘤安全而有效的治疗方法。     

TH基因修饰的神经干细胞移植治疗帕金森病的实验研究

目的 探讨TH基因修饰的神经干细胞脑内移植对帕金森病(PD)的治疗作用。方法 构建pN：ATH逆转录病毒载体质粒，用PA317细胞包装，G418筛选阳性克隆，病毒上清感染神经干细胞，将表达TH的神经干细胞植入：PD大鼠纹状体内，测定：PD大鼠旋转行为改善，DA和DOPAC含量变化，以及TH在纹状体的表达。结果 TH基因修饰的神经干细胞移植8周时能显著降低PD大鼠旋转行为，增加纹状体DA和DOPAC含量，TH在纹状体内的表达增加，疗效好于单纯神经干细胞移植组。结论 TH基因修饰的神经干细胞移植对PD大鼠有明显的治疗作用，可望为PD治疗提供新的途径。     

神经内镜下第三脑室造瘘及活检在小儿松果体区肿瘤诊治中的应用

目的 探讨神经内镜下第三脑室造瘘及活检在小儿松果体肿瘤诊治中的应用效果。方法 在去除松果体病变之前运用神经内镜第三脑室造瘘既可以达到永久解除梗阻性脑积水、治疗颅内压增高，同时在内镜下行活体组织检查以明确肿瘤的性质，为进一步治疗提供参考。结果 9例梗阻性脑积水儿童运用此方法均进行了第三脑室造瘘，后经MRI证实成功，所有病人没有发生严重并发症。结论 神经内镜第三脑室造瘘并取活检是松果体区肿瘤确实而有效的微侵袭诊疗手段。     

BMP4参与海人酸损伤后成年大鼠海马齿状回颗粒细胞增殖及胶质增生

目的探讨海人酸（KA）侧脑室注射致大鼠海马损伤后骨形成蛋白-4（BMP4）的表达变化及其与颗粒细胞增殖和胶质细胞增生的关系。方法将成年大鼠分为对照组与实验组。侧脑室注射KA7d后,用尼氏染色检测海马神经元丢失,用免疫组织化学与原位杂交的方法检测海马齿状回BMP4mRNA阳性细胞与BrdU标记细胞、GFAP阳性细胞数的变化。结果正常成年大鼠BMP4mRNA阳性细胞主要分布于海马齿状回的门区、颗粒下层、CA3、CAI区。BrdU标记细胞主要分布在齿状回颗粒下层。GFAP阳性细胞主要分布在齿状回、CA3区。在KA侧脑室注射致海马损伤后7d,海马CA3、CA4区神经元丢失明显,BMP4mRNA阳性细胞与BrdU、GFAP阳性细胞均明显增加。结论KA侧脑室注射致海马损伤后,成年大鼠海马齿状回颗粒细胞增殖增强和胶质增生可能与BMP4表达增加有关。     

少突胶质细胞祖细胞高效分离培养及EGFP基因转染

目的：建立高效分离少突胶质细胞祖细胞（oligodendrocyte precursor cells，OPCs）的方法，并转染增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）基因。方法：采用2次接种培养和差速振荡分离，结合使用神经营养因子（bFGF、PDGF-AA），体外分离纯化和扩增培养OPCs，用抗A285、GFAP、CNPase免疫荧光抗体鉴定细胞类型。采用脂质体介导EGFP基因转染OPCs，筛选获得稳定表达EGFP的OPCs细胞。结果：分离培养的OPCs细胞呈A2B5阳性，纯度达到99％，具有增殖和双向分化的潜能（GFAP阳性的2型星形胶质细胞和CNPase阳性的少突胶质细胞），传代培养1个月仍具有增殖能力。EGFP基因转染后OPCS细胞能发出绿色荧光，并继续保持增殖分化特性。结论：二次接种培养和差速振荡分离法可获得高纯度OPCs细胞；EGFP基因转染可作为示踪OPCs迁移的有效方法。