低氘水抑制宫颈癌 Hela 细胞增殖和侵袭能力的研究

目的 探讨培养基中氘浓度的下降对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 用含不同氘浓度的培养基培养Hela细胞,分为150×10-6、100×10-6、75×10-6和50×10-6共4组,其中,氘浓度为150×10-6的培养基为对照组,其他为实验组;用四甲基噻唑蓝（MTT）法、划痕实验检测随着培养基中氘浓度下降,Hela细胞增殖和迁移侵袭力的变化;流式细胞术检测含不同氘浓度的培养基对Hela细胞周期的影响;蛋白免疫印迹和免疫组化实验检测含不同氘浓度的培养基对Hela细胞肿瘤相关蛋白p21、Na＋/K＋-ATPase表达的影响.结果 MTT实验结果显示,随着培养基中氘浓度的降低Hela细胞增殖得到明显的抑制,其中氘浓度为50×10-6的培养基抑制效果最明显,相同条件下与对照组相比在72 h抑制率达到39.54％（P＜ 0.01）;划痕实验可观察到Hela细胞在氘浓度为75×10-6、50×10-6的培养基中细胞迁移能力得到明显抑制（P＜ 0.05）;Hela细胞在氘浓度为75×10-6、50×10-6的培养基中培养24 h后,流式细胞术检测S期明显低于对照组（P＜0.01）;Hela细胞肿瘤相关蛋白p21在氘浓度为100×10-6、75×10-6和50×10-6的培养基中的表达与对照组比较,差异均有高度统计学意义（P＜0.01）.结论 培养基中氘浓度的下降对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭能力有明显的抑制作用.     

Kruppel样因子6对肝癌HepG2细胞的作用及其缺失对斑马鱼肝脏发育的影响

目的 探讨Kruppel样因子6（KLF6）低表达对肝癌细胞凋亡及迁移能力的影响,并以斑马鱼作为动物模型,研究klf6基因沉默对肝脏发育的作用。方法 构建敲除KLF6基因质粒,转染肝癌细胞（HepG2）及正常人肝细胞（L-02）,通过免疫印迹（WB）、凋亡及细胞周期测定、划痕实验检测KLF6基因敲除后对HepG2细胞的影响;设计合成沉默KLF6基因的吗啉代寡核苷酸（Morpholino）,显微注射入转基因斑马鱼Tg（lfabp：eGFP）胚胎中,通过免疫荧光法观察KLF6蛋白表达的变化以及对转基因斑马鱼胚胎肝脏发育表型的影响。结果 体外实验表明,L-02细胞中的KLF6蛋白的表达量明显高于HepG2细胞;敲除KLF6基因后,HepG2细胞KLF6蛋白表达明显减少、凋亡减弱、细胞周期主要集中于S期、迁移能力增强;体内实验表明,klf6基因沉默后,斑马鱼胚胎肝脏中的KLF6蛋白表达量减少,肝脏发育明显迟缓。结论 KLF6基因低表达促进肝癌细胞的增殖和迁移能力,减少凋亡;且影响斑马鱼肝脏的正常发育。探讨KLF6基因低表达及其功能,可为以后斑马鱼肝癌模型建立及药物筛选提供理论基础。