使用高灵敏ELISA测定血清胰岛素

<正> 虽然ELISA已被广泛应用于测定激素。但是至今临床上还是使用放射免疫法测定血清胰岛素。其主要原因是目前一般使用的ELISA灵敏度难以达到足以测定空腹血清胰岛素的水平。作者通过使用抗胰岛素抗体包被的聚苯乙烯球(直径3.2mm)与50μl的胰岛素或待测血清在一小试管中反应。继之与使用N-(ε-马来酰亚胺已酰)琥珀酰亚胺酯(EMCS)作为双功能试剂制备的抗胰岛素Fab′-辣根过氧化酶(HRP)交联物     

蜂毒素对大鼠血小板内钙浓度的影响

应用Ｆｕｒａ－２作为荧光试剂，测定大鼠血小板细胞内Ｃａ~（２＋）浓度变化。蜂毒素１．５ｍｇ／Ｌ使血小板细胞内Ｃａ~（２＋）浓度增加；悬液中加入ＣａＣｌ＿２１ｍｍｏｌ／Ｌ，血小板细胞内Ｃａ~（２＋）继续增加。维拉帕米３．１２５ｍｇ／Ｌ作用５ｍｉｎ后，蜂毒素仍可使血小板内Ｃａ~（２＋）增加．但加入ＣａＣｌ２血小板Ｃａ~（２＋）的浓度不再增加。提示蜂毒素促进大鼠血小板细胞内Ｃａ~（２＋）的释放和细胞外Ｃａ~（２＋）进入细胞内。     

急性脑血管病患者血小板胞浆游离钙浓度测定的意义

采用钙荧光指示剂Fura-2AM,对32名健康对照组和53例急性脑血管病患者血小板静息状态胞浆游离钙浓度([Ca~(2 )i]进行测定。结果显示:脑出血和脑梗塞急性期患者血小板[Ca~(2 )]i明显高于恢复期和健康对照组(P<0.01);脑出血和脑梗塞急性期患者血小板[Ca~(2 )]i分别与平均动脉压和梗塞灶体积呈高度正相关(r=0.926和0.906,P<0.01)。提示脑出血患者的血压升高和维持可能与血小板[Ca~(2 )]升高有关;脑梗塞患者存在血小板的活化过程,降低血小板[Ca~(2 )]i可能有利于控制梗塞灶的发生和发展。     

抗生物素的提取和高效率交联抗生物素与辣根过氧化酶

蛋清经过丙酮、硫酸铵沉淀、离子交换提取抗生物素。抗生物素使用 S—乙酰巯基琥珀酸酐处理以导入巯基。使用 N-(ε-马来酰亚胺已酰)琥珀酰亚胺酯将马来酰亚胺基导入辣根过氧化酶(HRP),然后与经化学修饰的抗生物素上巯基反应,高效率制备抗生物素—辣根过氧化酶交联物。这种交联方法不影响酶活力,抗生物素和 HRP 的回收率分别高达61.5%和79.3%。抗生物素—HRP 交联物可用于建立高灵敏度酶免疫测定法和免疫组织化学染色。     

蜂毒素对大鼠血小板内钙浓度的影响

应用Ｆｕｒａ－２作为荧光试剂，测定大鼠血小板细胞内Ｃａ＾２＋浓度变化，蜂毒素１．５ｍｇ／Ｌ使血小板细胞内Ｃａ＾２＋浓度增加，悬液中加入ＣａＣｌ２１ｍｍｏｌ／Ｌ，血小板细胞内Ｃａ＾２＋继续增加，维拉帕米３．１２５ｍｇ／Ｌ作用５ｍｉｎ后，蜂毒素仍可使血小板Ｃａ＾２＋增加，但加入ＣａＣｌ２血小板Ｃａ＾２＋的浓度不再增加。提示蜂毒素促进大鼠血小板细胞内Ｃａ＾２＋的释放和细胞外Ｃａ＾２＋进入细胞内。     

高血压,冠心病和心功能不全患者血小板内游离钙的变化

测定３２例原性高血压、２１例冠心病、２２例高血压合并冠心病和１６例心功能不全患者治疗前后血小板内静鼻游离钙浓度，经及经凝血酶刺激后的最大细胞内钙浓度。发现患者静息血小板内游离钙无明显高于正常。硝苯地平和卡托普利治疗２周后静息血小板板内游离钙均明显高于正常。     

重症急性胆管炎血小板的活化

动态观察２５例重症急性胆管炎（ＡＣＳＴ）手术前后２周内血小板内游离钙浓度、血小板聚集率、血小板数量等变化。结果显示，血小板在ＡＣＳＴ发病过程中明显活化，血小板细胞内钙离子浓度升高（２３０．５７±４８．３７ｎｍｏｌ／Ｌ），血小板聚集功能下降（１２．８０±３．０４％），血小板数量减少［（２４±５１）×１０９／Ｌ］，且与病情程度和胆道梗阻程度成正比。病情转归后，上述变化恢复正常。血小板活化持续不恢复静息状态，提示病情更严重和预后不良。