结核病专业研究生科研能力培养的思考

结核病是重大的传染性疾病,中国疫情非常严重。结核病预防、诊断和治疗都面临着非常大的挑战,很多医学问题有待解决。结核病专业研究生的培养目的不应局限于熟练掌握临床技能,更应该把重点放在培养创新性科研能力上,为结核病专业提供复合型高素质医务人才。建议从发现临床科学问题、阅读文献和写作、设计科研课题、掌握基本实验原理和技能以及培养科研诚信等5个方面来加强培养结核病专业研究生的科研能力。     

不同细菌学与病理学检查技术对骨关节结核诊断的效能研究

目的:回顾性分析脓液标本细菌学检测技术和组织标本病理学检测技术诊断骨关节结核的检测效能。方法:以2016年1月至2018年12月在北京胸科医院住院治疗的213例送检同部位脓液和组织标本进行检测的疑似骨关节结核患者作为研究对象,取新鲜脓液标本进行涂片染色镜检、GeneXpert MTB/RIF(GeneXpert)检测、实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测和BACTEC MGIT 960液体培养(MGIT 960液体培养);组织标本经石蜡包埋后进行抗酸染色镜检和FQ-PCR检测。结果:根据骨结核临床诊断综合参考标准(CRS),186例纳入患者诊断为骨关节结核,其中124例为确诊结核患者,23例为高度疑似结核患者,39例为疑似结核患者;27例患者排除骨关节结核。与CRS比较,脓液标本涂片镜检、MGIT 960液体培养、FQ-PCR、GeneXpert以及组织标本抗酸染色和FQ-PCR检测的敏感度分别为28.7%(49/171)、49.0%(48/98)、58.1%(25/43)、87.5%(161/184)、48.6%(90/185)和85.4%(146/171);特异度分别为100.0...     

结核分枝杆菌对氧氟沙星的耐受程度与gyrA基因突变的相关性分析

目的以氧氟沙星为例,探讨阈值的划分对实验室早期检测出耐氧氟沙星结核分枝杆菌的影响。结合DNA序列分析探讨gyrA基因点突变与结核分枝杆菌对氧氟沙星耐受程度的相关性。方法 （1）在含氧氟沙星改良罗氏培养基上检测101株结核分枝杆菌临床分离株对氧氟沙星的敏感性。（2）测序以检测耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因点突变的特征。结果 （1）52株耐氧氟沙星5.0μg/ml的临床分离株中,17株能在含氧氟沙星10.0μg/ml的改良罗氏培养基上生长（约占32.69%）,49株对氧氟沙星5.0μg/ml敏感的临床分离株中,有2株能在含氧氟沙星2.0μg/ml的改良罗氏培养基上生长（约占4.08%）。（2）基因扩增产物测序发现;耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因点突变主要发生第90、91和94位点上,有10株在不同的gyrA基因位点上发生了碱基缺失或插入的变异,101株被检测的结核分枝杆菌临床分离株中,发生在第95位点的碱基突变率为100%。结论 （1）判定耐药结核分枝杆菌上、下限的阈值对耐药结核菌的早期检出具有重要的作用。（2）发生在耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因上的点突变是多变的,但与结核分枝杆菌对氧氟沙星的耐受程度没有明显的相关性。     

中国汉族人群Toll样受体2基因多态性与肺结核易感性之间关系

目的 检测中国汉族人群特异TLR2基因多态性,并分析与结核病易感性之间关系。 方法 在小样本中测序检测TLR2基因中可能存在的基因多态性,再用连接酶特异检测技术在大样本进行SNP分型,并通过统计学方法分析基因多态性与结核病易感性之间相关性。 结果 共检测到6个基因多态性,它们在结核病患者与健康人之间等位基因、基因型以及单配体型上差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 TLR2基因多态性并不是中国汉族人群结核病发病的重要危险因素。     

结核分枝杆菌特异基因MPT64-Rv1985c融合蛋白的免疫诊断价值研究

目的表达和纯化结核分枝杆菌特异蛋白MPT64、Rv1985c及其融合蛋白MPT64-Rv1985c,探讨3种抗原在结核病免疫诊断中的价值。方法通过PCR获得基因MPT64、Rv1985c及其融合基因,并克隆到pET32a(+)表达载体,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后用镍柱进行纯化,再用SDS-PAGE及Western blot方法检测并鉴定目的产物。采用ELISA方法检测3种抗原在血清及胸腔积液样本中的结核病诊断效率。结果 3种目的蛋白均以包涵体形式表达。经过纯化及复性获得纯度较高的可溶性蛋白。血清及胸腔积液样本中特异性IgG抗体检测结果显示,融合蛋白MPT64-Rv1985c在诊断肺结核、肺外结核的敏感性为87.1%和88.9%,特异性为75.6%;诊断结核性胸膜炎的敏感性为91.2%,特异性为84.6%,敏感性较单一抗原MPT64及Rv1985c有显著提高(P﹤0.05)。结论融合蛋白MPT64-Rv1985c诊断效果显著高于单一抗原,在结核病诊断中具有重要的研究价值。     

结核病分子病理学诊断技术临床应用进展

病理学是诊断结核病的重要途径,尤其在痰菌阴性的肺结核及肺外结核等疑难患者的诊断中发挥了重要作用。2017年公布的《中国结核病病理学诊断专家共识》提出病理学确诊结核病必须同时满足两个条件:(1)组织形态学符合结核病病理基本变化;(2)通过分子病理学检测获得明确的病原学依据。近年来,分子病理学诊断技术在结核病的诊断和鉴别诊断中起到越来越重要的作用。作者对分子病理学技术在诊断结核病、非结核分枝杆菌病,以及耐药结核病中的应用进展进行了综述。     

免疫组织化学及PCR技术在淋巴结结核病理诊断中的应用价值

目的 探讨免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)及PCR技术在淋巴结结核病理学诊断中的应用价值。方法 收集首都医科大学附属北京胸科医院病理科保存的2012年1月至2013年7月之间的48例手术根治切除淋巴结结核患者(结核组)和21例非淋巴结结核患者(非结核组)的石蜡包埋组织标本,分别应用IHC染色、荧光定量PCR和抗酸染色法对标本进行检测,以临床最后诊断为金标准,比较各方法的检测效能。结果 IHC染色、荧光定量PCR及抗酸染色检测的敏感度分别为52.1%(25/48)、60.4%(29/48)及27.1%(13/48);IHC染色和荧光定量PCR检测敏感度均高于抗酸染色,差异均有统计学意义(χ ²值分别为 6.27、10.84,P值分别为0.012、0.001);而IHC染色与荧光定量PCR比较,敏感度差异无统计学意义(χ ²=0.68,P=0.411)。IHC染色、荧光定量PCR及抗酸染色法检测非结核组结果均为阴性,特异度均为100%(21/21)。IHC染色、荧光定量PCR及抗酸染色法的阴性预测值分别为47.7%(21/44)、52.5%(21/40)、37.5%(21/56);符合率分别为66.7%(46/69)、72.5%(50/69)、49.3%(34/69),IHC染色、荧光定量PCR均优于抗酸染色法。 结论 IHC染色、荧光定量PCR与抗酸染色法相比,可提高阳性检出率,在淋巴结结核的病理学诊断中具有良好应用价值。