应用RT-PCR法分析人脂肪细胞载脂蛋白E基因表达

目的　建立人脂肪细胞载脂蛋白E基因表达检测方法。方法　采用竞争性逆转录 -聚合酶链式反应 (RT -PCR)方法分析儿童脂肪细胞的载脂蛋白E基因表达。结果　载脂蛋白E基因能在儿童脂肪细胞表达 ,儿童载脂蛋白E基因表达量为( 0 41± 0 12 )。结论　采用竞争性逆转录 -聚合酶链式反应方法检测人脂肪细胞载脂蛋白E基因表达方法快速、简便、灵敏、实用、可靠 ,且能准确定量 ,值得推荐     

皮肤成纤维细胞体外培养的安全性实验研究

目的：对所建立的人皮肤成纤维细胞系进行安全性检测。方法：对人皮肤成纤维细胞进行形态学观察、染色体核型分析、软琼脂试验、裸鼠致瘤试验、内毒素试验、支原体检测、病毒因子检测、细菌、真菌检测、异常毒性试验。结果：结果均为阴性。结论：所获取的皮肤成纤维细胞可作为一种安全、可靠的靶细胞用于基因治疗研究。     

斯奇康治疗抗精子抗体及抗子宫内膜抗体的临床体会

斯奇康(卡介菌多糖核酸)是将卡介菌经热酚法去掉菌蛋白质,再用乙醇沉淀提取菌体脂多糖等有效成分而制成,是一种具有较低活性的诱导鼠脾淋巴细胞产生IFN-γ,是既抗病毒又有免疫调节活性的淋巴因子。我院生殖科和妇产科门诊2005年9月~2006年6月使用斯奇康治疗抗精子抗体和/或抗子宫内膜抗体阳性患者52例,其中39例得到随访。现将39例病例资料及治疗体会报告如下。资料与方法1.一般资料39例患者,女性,年龄23~38岁,平均28岁。因不孕症来就诊,治疗前检查血清抗精子抗体(AsAb)和/或抗内膜抗体(EmAb)阳性,且使用3~6个月避孕套后复查仍为阳性者。…     

人类淋巴母细胞建株方法的改进

目的探讨有效的淋巴细胞建株技术。方法用EB病毒转染对53例标本进行建株,Ⅰ组：开放培养＋早期分离活细胞;Ⅱ组：开放培养;Ⅲ组：密闭培养。结果成功率分别是：Ⅰ组96.2%、Ⅱ组75.5%、Ⅲ组50.9%。结论开放培养＋早期分离活细胞能提高建株成功率和缩短建株时间。     

老年不稳定型心绞痛患者P2Y12受体基因多态性对氯吡格雷抑制血小板聚集率的影响

目的:探讨老年不稳定心绞痛患者P2Y12受体基因多态性对氯吡格雷抑制血小板聚集率的影响。方法:筛选255名老年不稳定型心绞痛患者,检测P2Y12外显子C34T和G52T多态性。测定服氯吡格雷前及服该药300mg后6 h血小板聚集率。结果:P2Y12外显子C34T、G52T的位点基因突变频率分别为16.01%和25.00%,其频率分布符合Hardy-Weinberg平衡。在5μmol/LADP诱导血小板聚集实验中,34T突变型组血小板聚集率降低的程度显著大于34C野生型组;52T突变型组血小板聚集率降低的程度显著小于52G野生型组。结论:老年不稳定心绞痛患者存在P2Y12受体基因多态性,P2Y12受体外显子C34T突变增强氯吡格雷抑制血小板聚集的作用,G52T突变减弱氯吡格雷抑制血小板聚集作用。     

直接消化法分离单克隆贴壁细胞

目的 :建立一种高效的贴壁细胞单克隆分离法。方法 :将细胞悬液稀释成 4个密度梯度后接种于分隔开的血纤维蛋白膜层的皿上生长 ,克隆形成后吸 0 .2 5 %的胰酶消化 ,用移液器头直接挑取。结果 :永生细胞系和正常二倍体细胞在 10·cm- 2 ,5·cm- 2 两种接种密度时可分离到较多的单克隆 ,分离的单克隆永生细胞培养 1个月左右 ,细胞总数可达 10 6 个 ;但分离的正常二倍体细胞需培养 1个半月左右 ,细胞总数才达 10 6 个。结论 :细胞接种于被分隔成不同区域的血纤维蛋白膜层的皿上 ,采用直接消化法可有效获得单细胞克隆 ,接种密度以 10·cm- 2 ,5·cm- 2 两种为最佳     

脐血间充质干细胞治疗大鼠脑缺血性损伤的实验研究

目的探讨脐血间充质干细胞(UCB-MSCs)移植对大脑中动脉闭塞(MCAO)模型大鼠神经功能恢复的治疗效果及其作用机制。方法 MCAO模型大鼠随机分为实验组(n=20)和对照组(n=10),实验组大鼠经尾静脉输入经BrdU(5-溴脱氧核苷尿嘧啶)标记的UCB-MSCs,对照组尾静脉注射等量PBS,分别对大鼠神经功能缺损情况进行评分,并测定大鼠梗死灶体积,计数脑组织中BrdU阳性细胞、BrdU/NSE(神经元特异性烯醇化酶)、BrdU/GFAP(胶质纤维酸性蛋白)双阳性细胞。结果移植UCB-MSCs可有效降低MCAO大鼠神经功能缺损评分,减少大鼠脑梗死灶体积,并且实验组大鼠脑缺血区及周围组织中可检测到BrdU阳性细胞,及少量BrdU/NSE、BrdU/GFAP双阳性细胞。结论移植的UCB-MSCs能逐渐向MCAO大鼠脑缺血区及周围迁移,并可分化为神经元细胞及神经胶质细胞,促进脑缺血性大鼠神经功能恢复。