联合应用SSH和cDNA Microarray筛选肺癌相关基因

目的 利用抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization，SSH)和cDNA Microarray 筛选肺癌组织、肺癌旁组织和其它肿瘤组织中相互差异表达的基因。方法 将利用SSH构建的BEP2D细胞永生化阶段、恶性转化前阶段和恶性转化阶段三个cDNA文库中的克隆制作在一张芯片上，筛选了15例肺癌组织、5例肺癌旁组织和其他癌组织24例(肝癌、胃癌、食管癌、乳腺癌、白血病、子宫内膜癌、脑神经胶质瘤和结肠癌各3例)中mRNA的表达差异。结果 获得肺癌组织高于肺癌旁组织表达的cDNA26个，肺癌旁组织高于肺癌组织表达的31个。二者高于其它8种癌组织的分别为：肺癌旁组织中63个，肺癌组织中87个。结论 联合应用SSH和cDNA Microarray是筛选和鉴定不同样本中差异表达基因的快速和有效的方法；肺癌旁组织和肺癌组织中差异表达的基因，以及这二者与其它组织差异表达的基因．不仅可能是肺癌发生发展机制中的重要基因，而且可能是用于肺癌诊断的候选基因。     

311例SARS患者康复后一年内血清IgG抗体变化分析

目的了解严重急性呼吸综合征(SARS)患者康复后一年内血清中SARS冠状病毒(SARS-CoV)特异性抗体IgG的产生水平及动态变化。方法SARS患者康复后,每隔2-4周抽取IgG抗体阳性的SARS康复期患者血液,经病毒灭活后分离血清,用酶联免疫吸附试验检测SARS-CoV特异性抗体IgG;利用Stata 7.0统计学软件对各月份的检测结果进行分析。结果各康复期患者的各次检测结果均为阳性,出院后约35天时抗体平均水平最高。一年内,IgG抗体平均水平呈逐渐下降趋势,下降幅度约为35.8%。结论SARS康复期患者康复后短期内具有较高水平的IgG抗体,但随着康复时间的推移,该抗体呈逐渐下降趋势。提示应对该抗体进行长期监测,直至该抗体消失。     

LD-RTPCR:A NEW METHOD FOR LABELLING TRACE cDNA MICROARRAY PROBE

cDNA microarrays are now being employed formRNA expression analysis in cancer cell lines[1] orexcised surgical specimens[2]. However, broaderapplication of cDNA microarrays is limited by theamount of RNA required: 50-200 mg of total RNA or 2-5 mg of poly A+ RNA. To broaden the use of cDNAmicroarrays, methods aiming at intensifying fluorescence signal[3-5] have been tried and resulted in modest improvement. LD-RTPCR (SMARTTM PCR cDNA Synthesis Kit, Clontech) is a PCR-based …     

肺鳞癌组织中208个肺癌相关基因的表达

目的 病理学上诊断同样为肺鳞癌的患者,其治疗疗效和愈后往往存在一定差异,本研究利用本实验室制作的 208个肺癌相关基因芯片,探讨了 7例肺鳞癌组织中基因表达的异质性,试图为患者的治疗和预后提供分子依据. 方法 提取 7例男性肺鳞癌患者(年龄在 55～ 65岁之间)癌组织的总 RNA并用 LD- PCR标记成探针,然后与含有 208个肺癌相关基因的 cDNA Microarray杂交,芯片用 ImaGene软件分析和处理数据. 结果 7例肺鳞癌组织之间 208个肺癌相关基因表达的相似性在 60.65% ～ 82.69%之间. 结论 本研究首次对肺鳞癌患者不同个体之间基因的表达进行研究并发现存在一定的差异,提示应注意癌症患者的个体化诊断和治疗.     

肺保护性通气对肺内源性/肺外源性急性呼吸窘迫综合征模型犬呼吸力学和炎性反应的影响

目的　观察在肺保护性通气条件下急性呼吸窘迫综合征 (ARDS)模型犬呼吸力学、血气交换和外周血中炎性介质的变化。方法　健康雄性杂种犬 12只 ,随机分为肺内源性ARDS模型组和肺外源性ARDS模型组 ,每组 6只。采用静脉注射油酸形成肺外源性ARDS动物模型 ,应用十六烷磺基丁二酸钠盐气管内吸入形成肺内源性ARDS动物模型。动态观察肺保护性通气条件下ARDS模型犬动脉血氧合指数、二氧化碳分压、气道压力和外周血中炎性介质 (TNF α、IL 1β、IL 6及IL 10 )的变化。结果　肺损伤后ARDS模型犬氧合指数明显降低 ,外周血中炎性介质水平均明显升高 ;肺保护性通气治疗改善氧合指数和抑制炎性介质释放的效果在肺内源性ARDS犬不如肺外源性ARDS犬。结论　肺保护性通气模式对肺外源性ARDS具有良好的治疗效果 ,但对肺内源性ARDS疗效较差。     

血、便、痰和尿标本中SARS冠状病毒核酸的检测和病毒基因谱的初步建立

目的：利用冠状病毒全基因组芯片检测SARS患者血、便、痰和尿标本中的冠状病毒核酸并试图建立其基因谱。方法：提取SARS患者血、便、痰和尿样本中的冠状病毒RNA，经全基因组随机反转录和PCR扩增标记成荧光探针，与SARS病毒全基因组芯片进行杂交，同时用体外培养的病毒RNA和从健康人血液中提取的RNA做对照。结果：SARS患者的4种标本中都能检测到冠状病毒核酸的存在，与整个病毒基因组相比，大都为一些不连续的片断。其中尿、痰和便标本中的基因谱较为相似，另外，发现编码S1蛋白的核酸在一些标本中是连续的，具体为23份血标本中有2份是连续的，13份痰标本中有8份是连续的，51份便标本中有48份是连续的，2份尿标本中都是连续的。结论：冠状病毒全基因组芯片能够检测出SARS患者血、便、痰和尿标本中的冠状病毒核酸，并能建立各来源标本中病毒核酸的基因谱。     

严重急性呼吸综合征康复者冠状病毒特异性抗体定量检测与分析

目的　检测SARS患者体内冠状病毒特异性抗体IgG、IgM的含量。方法　抽取 2 2例SARS康复者不同康复时期的血液 ,经病毒灭活后分离血清 ,用ELISA法对SARS病毒特异性抗体IgG、IgM进行检测。结果　IgG类抗体在所有康复者体内都呈阳性 ,且检测到康复 71天的患者该类抗体仍然没有衰减 ;IgM类抗体在康复 5 0天的部分患者 (5 / 2 2 ,2 2 73%)中仍呈阳性 ,而在 6 5天时则全部为阴性。对照组 2 2例 ,两类抗体全部为阴性。结论　可能所有SARS康复者体内都产生了冠状病毒特异的IgG类抗体 ,并且这种抗体可能持续较长时间。     

肺鳞癌组织中208个肺癌相关基因的表达(英)

目的:病理学上诊断同样为肺鳞癌的患者,其治疗疗效和愈后往往存在一定差异,本研究利用本实验室制作的208个肺癌相关基因芯片,探讨了7例肺鳞癌组织中基因表达的异质性,试图为患者的治疗和预后提供分子依据。方法:提取7例男性肺鳞癌患者(年龄在55～65岁之间)癌组织的总RNA并用LD-PCR标记成探针,然后与含有208个肺癌相关基因的cDNAMicroarray杂交,芯片用ImaGene软件分析和处理数据。结果:7例肺鳞癌组织之间208个肺癌相关基因表达的相似性在60.65%～82.69%之间。结论:本研究首次对肺鳞癌患者不同个体之间基因的表达进行研究并发现存在一定的差异,提示应注意癌症患者的个体化诊断和治疗。     

与内皮抑制素相互作用的蛋白及其抑制血管生成作用的分子机制

目的:探讨与内皮抑制素相互作用的蛋白,阐明其抑制血管生成作用的分子机制。方法:实验于2002-01/2004-12在解放军总医院呼吸科实验室、军事医学科学院放射医学和生物工程研究所实验室完成。应用酵母双杂交系统3,以内皮抑制素为诱饵,筛选人肝cDNA文库,寻找与之相互作用的蛋白。再利用一对一酵母回复性杂交、β-GAL实验和生物信息学分析技术筛除假阳性克隆。结果:成功构建稳定表达内皮抑制素基因的载体;酵母双杂交共获得281个克隆,经验证,6个为阳性克隆,测序发现其中一个克隆为未知序列;FASTCAT试验发现阳性克隆中4个克隆可明显的与内皮抑制素相互作用。结论:6个阳性克隆表达的蛋白可能能与内皮抑制素相互作用,并不同程度的参与了内皮抑制素调节的血管生成过程。