体外皮肤移植和TUNEL实验评价猕猴间充质干细胞输注对细胞免疫的影响

目的:通过给猕猴单次无预处理输注猕猴白细胞抗原(RhLA)不相合供者的骨髓来源的间充质干细胞(MSCs),观察能否抑制供受者之间的免疫反应.方法:无菌抽取MSCs供者猕猴骨髓,分离单个核细胞,用2?S的DMEM/F12培养液培养骨髓MSCs,用流式细胞术检测其表型,不同培养条件诱导MSCs多向分化以鉴定;单次无预处理输注MSCs给RhLA不相合受者,分别于MSCs输注前及输注后20、40、60 d取受者外周血淋巴细胞分别与供者及非供者皮肤体外共培养72 h,观察培养皮肤病理损伤情况,同时TUNEL法检测培养皮肤石蜡切片中凋亡细胞的比率.结果:输注MSCs后20 d,受者淋巴细胞与供者皮肤呈现减低的免疫反应,皮肤病理损伤程度较输注前减轻,凋亡细胞比例由(23.0±4.9)%下降到(12.2±1.9)%;MSCs受者与非供者之间体外皮肤病理片中凋亡细胞比例也由输注前的(22.0±2.0)%下降至(11.8±1.4)%,具有显著差异(P<0.05);输注后40 d和60 d,受者淋巴细胞无论对供者还是非供者的皮肤均产生较强的免疫反应,凋亡细胞比例增至(22.0±3.2)%、(22.0±2.5)%(供者)及(23.2±2.4)%、(24.0±2.6)%(非供者).结论:猕猴输注同种异基因MSCs后,通过体外实验可以检测到供受者之间降低的免疫反应,但是这种免疫抑制作用是短期的、可逆的.     

猕猴单倍体相合外周血造血干细胞移植后多种细胞因子mRNA表达的动态分析

本研究分析猕猴单倍体相合造血干细胞移植前后外周血单个核细胞中细胞因子（TGF-β,IL-2,IL-6,IL-10,IFN-γ,TNF-α,FAS-L）mRNA的表达并探讨这些细胞因子在急性移植物抗宿主病（aGVHD）发生和病理变化中的作用,以寻找能够早期预测和鉴别诊断aGVHD的指标.5例猕猴经非清髓预处理后接受单倍体相合外周血造血干细胞移植;半定量逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测移植前后8种细胞因子mRNA的表达,动态观察这些细胞因子在移植后aGVHD中的表达情况.结果表明：5例猕猴均成功获得造血重建.1例移植排斥,长期无病存活;其余4例为混合嵌合和完全嵌合植入,1例低比例嵌合植入经第二次;注供者外周血造血干细胞后获得高比例嵌合植入;1例发生肠道Ⅲ度GVHD.移植前后体内Th1和Th2类细胞因子都有不同程度的变化,在aGVHD期间TGF-β呈下调表达,其余均为上调表达;植入比例减低的猕猴各细胞因子也下降至移植前水平.结论：TGF-β在aGVHD发生前的下降趋势可能是GVHD预测指标,并且能够作为肠道GVHD的鉴别诊断指标.     

猕猴异体间充质干细胞输注安全性评价及异体存活分析

目的:探讨经静脉或骨髓内输注异体猕猴间充质干细胞(MSCs)的安全性以及异体MSCs是否能归巢骨髓并长期存活.方法:用密度梯度离心和贴壁筛选法分离、培养猕猴骨髓中的MSCs,观察其生物学特性.用流式细胞仪检测MSCs的细胞表型,采用不同培养条件诱导多向分化,用特异性染色鉴定;将雄性猕猴的MSCs经静脉输注或骨髓内输注给雌性猴,评价其不良反应和移植物抗宿主病(GVHD)表现,用PCR法检测受者骨髓中的Y特异性序列,评价MSCs在异体存活情况.结果:成功培养了猕猴的MSCs,多向分化实验证明其可分化为脂肪和成骨细胞;输注后未见急、慢性毒性反应和GVHD表现,部分雌性猕猴体内可检出Y特异性序列.结论:猕猴异体静脉或骨髓内输注MSCs未见急、慢性不良反应和GVHD,MSCs可在异体骨髓内存活.     

中西医结合治疗慢性特发性血小板减少性紫癜48例

自2004年1月至2010年6月,笔者采用以八珍汤为主的中西医结合疗法治疗慢性血小板减少性紫癜（CITP）48例,疗效满意,现汇报如下,以期共同交流。1资料与方法1.1一般资料本组48例均为本院血液科住院患者,均符合《血液病诊断及疗效标准》中ITP诊断标准[1],根据其临床分型与病情分度标准,均属慢性型;     

单倍体HLA不相合非清髓性异基因造血干细胞移植治疗血液病临床研究

目的:探讨组织相融抗原(HLA)不相合,主要血型不合的非清髓性异基因外周造血干细胞移植(NASCT)治疗血液病的可行性。方法:对7例血液病患者接受2～3个位点不合,ABO主要血型不合的未去T细胞NASCT,连续接受免疫抑制治疗。其中男3例,女4例,中位年龄41(21～58)岁。7例中,急性白血病第1次完全缓解(CR1)3例,CR2 1例,骨髓增生异常综合征(MDS)1例,极重症再生障碍性贫血(SSAA)1例,再障-阵发性睡眠性血红蛋白尿(AA-PNH)1例。结果:7例患者均取得三系重建造血,移植后粒细胞>0．5×109／L及血小板>20×109／L的中位时间分别为移植后第14天和第21天,植入直接证据检测证实完全供者造血,2例发生急性移植物抗宿主病,2例发生慢性移植物抗宿主病。结论:经粒细胞集落刺激因子动员的外周造血干细胞采用NASCT及持续性免疫抑制剂应用特别是ATG应用于未去T细胞的NASCT成功率高,疗效好,为扩大供者来源治愈血液病提供了新手段。     

扶正固本防治非清髓移植后移植物抗宿主病

目的探讨扶正固本中药防治单倍体相合非清髓造血干细胞移植后移植物抗宿主病(GVHD)。方法我院自2009年9月—2014年10月对32例白血病患者进行非清髓单倍体相合造血干细胞移植,采取随机分组,对照组16例,采用常规GVHD防治方法,中药治疗组16例,在常规GVHD防治基础上给予扶正固本中药;对比两组患者移植后血象恢复、嵌合变化以及GVHD发生情况。结果中药治疗组患者与对照组比较,在移植后造血恢复及移植后供者干细胞植入方面无明显差异(P0.05);中药治疗组重度GVHD的发生率低于对照组(P0.05)。结论扶正固本中药治疗可以改善患者移植后机体免疫状态、减少重度GVHD的发生。     

猕猴造血嵌合体检测方法的建立与应用

在受体内检测到供体细胞嵌合是判断动物移植模型成功建立的关键。为了研究猕猴移植模型中的造血细胞嵌合状态，本研究利用多聚酶链反应（PCR）扩增猕猴Y特异性序列，建立检测性别不同供受者猕猴移植模型嵌合体的方法；用体外雄性、雌性DNA混合稀释实验研究该方法的敏感性；用染色体分析法验证该方法的准确性，并对1例异基因外周血造血干细胞移植的猕猴和1例间充质干细胞（MSC）异体输注的猕猴进行嵌舍监测。结果表明：雄性猕猴DNA扩增产物长度为176bp，雌性无扩增产物，敏感性达0．05％（雄性／雌性DNA比例）。对异基因外周血造血干细胞移植的猕猴，用Y特异性序列分析法和性别染色体检测法于移植后7及14天均检测到雄性供者嵌合。输注非亲缘雄性MSC的雌性猕猴，输注后1小时的外周血和30天的骨髓用本方法检出雄性供体嵌合．结果性别染色体检测未发现雄性供体嵌合。结论：采用PCR法扩增猕猴Y特异性序列检测猕猴移植模型嵌合体方法简便，样本需要量少，敏感性高。该法可用于猕猴各种异体器官移植和细胞输注实验的嵌合状态评价。     

清毒润喉方氧驱动雾化吸入防治咽喉部肿瘤放疗后所致急性放射黏膜损伤的临床观察

目的观察清毒润喉方氧驱动雾化吸入防治咽喉部肿瘤放疗后所致急性放射性黏膜损伤的临床疗效。方法将64例患者随机分为治疗组与对照组各32例。两组均行根治性放疗。治疗组予清毒润喉方氧驱动雾化吸入,对照组予西药氧驱动雾化吸入,两组疗程均从放疗开始至放疗结束。结果出现急性放射性黏膜损伤,治疗组为65.6%,对照组为93.75%;反应出现时的放射剂量,治疗组为（41.12±11.65）Gy,对照组为（30.67±12.48）Gy,两组比较均有统计学意义（P〈0.05）;两组放射性咽喉部黏膜损伤程度差异有统计学意义,治疗组损伤程度明显低于对照组（P〈0.05）。结论清毒润喉方氧驱动雾化吸入能明显减轻咽喉部黏膜的放射性损伤,提高喉咽部肿瘤放疗患者急性放射反应发生时的放射剂量,降低反应级别。     

去氢骆驼蓬碱诱导白血病细胞凋亡的实验研究

目的：研究去氢骆驼蓬碱对白血病细胞的作用及其机制。方法：采用MTT法测定去氢骆驼蓬碱对各白血病细胞的生长抑制作用;以U937、HL-60为作用细胞,用琼脂糖凝胶电泳检测去氢骆驼蓬碱诱导白血病细胞凋亡的作用;应用蛋白印迹法检测去氢骆驼蓬碱诱导白血病细胞凋亡过程中Bcl-2表达的变化情况。结果：去氢骆驼蓬碱对白血病细胞有明显的生长抑制作用,其对各白血病细胞抑制率无明显差异,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;Bcl-2在白血病细胞中有表达,并随药物浓度的增高表达量逐渐降低。结论：去氢骆驼蓬碱可诱导白血病细胞凋亡,其作用与降低Bcl-2表达有关。     

滋肾活血法联合化疗治疗多发性骨髓瘤临床观察

目的：探讨滋肾活血法联合化疗治疗多发性骨髓瘤的临床疗效。方法：将36例患者随机分成2组各18例,对照组予M2方案,治疗组予M2方案配合以滋肾活血为主的中药汤剂治疗,4～5周为1个疗程,3个疗程后观察疗效及毒副作用。结果：对照组有效率66.7%,治疗组72.2%,2组比较无显著性差异,但治疗组毒副作用小,患者生活质量明显提高。结论：滋肾活血中药联合化疗能有效减轻化疗副作用,提高生活质量。