增强型绿色荧光蛋白真核表达载体的构建和表达

目的　构建增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein, EGFP)编码基因的真核表达载体 pcDNA3.1(+) GFP,并观察其在Hep 2细胞中的表达情况。　方法　据已知的EGFP基因序列,设计合成 1 对引物,并引入Hind Ⅲ和EcoR Ⅴ酶切位点。应用PCR技术,从含有 EGFP的 pAdTrack CMV中扩增 EGFP编码基因。通过 TA连接将其克隆入pGEM T easy载体,经PCR及限制性内切酶鉴定后,插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,转化Esche richia coli DH5α感受态细胞,于Amp+ LB平板上筛选阳性克隆。重组子经 Hind Ⅲ和EcoRⅤ双酶切、PCR鉴定,将该载体转染人喉癌细胞 Hep 2 后 48 h观察 EGFP表达情况。　结果　成功构建了含 EGFP 编码基因的真核表达载体pcDNA3.1(+) GFP,并成功转染Hep 2细胞,在倒置荧光显微镜下呈现绿色光。　结论　获得可产生绿色荧光的 EG FP,能方便地用作报告基因和筛选标记。     

玉屏风颗粒联合孟鲁司特和布地奈德治疗儿童感染后咳嗽的疗效观察

目的对玉屏风颗粒联合孟鲁司特和布地奈德治疗儿童感染后咳嗽的临床疗效进行分析和探讨。方法将我院2011年8月至2013年8月收治的120例感染后咳嗽患儿按随机数字表法随机分为治疗组和对照组,每组60例。治疗组患儿给予玉屏风颗粒联合孟鲁司特和布地奈德治疗,对照组患儿给予孟鲁司特+布地奈德治疗。分析和比较两组患儿的治疗效果。结果治疗组显效38例;有效15例,无效7例;总有效率为88.33%。对照组患儿显效22例,有效18例,无效20例;总有效率为66.67%。两组间的比较具有统计学意义(P<0.05)。治疗组患儿咳嗽缓解时间为(5.6±1.5)d,咳嗽消失时间为(7.1±1.2)d,半年内因感染咳嗽就诊的次数为(1.4±0.9)次。对照组患儿咳嗽缓解时间为(7.0±2.5)d,咳嗽消失时间为(8.6±1.8)d,半年内因感染咳嗽就诊的次数为(2.6±1.7)次。两组间的比较差异显著(P<0.05)。结论应用玉屏风颗粒联合孟鲁司特及布地奈德治疗儿童感染后咳嗽效果显著,安全可靠,可有效降低患儿气道的高反应性,在改善患儿临床症状的同时大大提高了患儿的机体免疫力,值得临床推广使用。     

三种肺炎支原体检测方法的比较

目的比较3种检测肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae，Mp）的方法，寻求肺炎支原体的快速、准确和特异的检测手段。方法选择198例社区获得性肺炎（CAP）患者中临床证实的45例肺炎支原体感染者的痰液、血清标本，分别经肺炎支原体培养、肺炎支原体核酸PCR扩增和血清学检测（IgM和IgG），采用Х^2检验比较3种方法的检测结果。结果3种方法检测Mp的阳性率分别为44．4％、71．1％和86．7％和，PCR法与培养法比较差异有显著性（Х^2=17．764，P〈0．001）；血清学与培养法比较差异有显著性（Х^2=6．559，P〈0．01）；PCR法与血清学比较差异无显著性（Х^2=3．269，P=0．071）。结论PCR法和血清学检测是肺炎支原体病原体诊断的有效手段。     

核酸疫苗Sj14-3-3联合CpG和mIL-12免疫小鼠抗日本血吸虫攻击感染的研究

目的 在证明核酸疫苗pcDNA3．1（＋）-Sj14-3-3具有部分抗血吸虫感染的基础上，联合使用CpG和pcDNA3．1（＋）-mIL-12，观察此二种佐剂在攻击感染小鼠的免疫效果及其抗血吸虫感染的保护机制。方法 分别用pcDNA3．1（＋）-Sj14-3-3＋pcDNA3．1（＋）-mIL-12、pcDNA3．1（＋）-Sj14-3-3＋CpG、pcDNA3．1（＋）-mIL-12和CpG免疫小鼠。攻击感染后6W计数成虫负荷和肝虫卵数；检测免疫后0W、6W和12W小鼠血清总IgG、IgG1和IgG2a水平；检测小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-4；流式细胞术检测免疫鼠脾细胞中CD4^＋和CD8^＋T细胞的比率。结果 pcDNA3．1（＋）-Sj14-3-3＋pcDNA3．1（＋）-mIL-12和pcDNA3．1（＋）-Sj14-3-3＋CpG免疫小鼠的减虫率分别为41．2％和28．7％；减卵率分别为52．6％和41．2％。单独使用pcDNA3．1（＋）-mIL-12和CpG也有一定的免疫保护作用。保护性免疫主要通过诱导宿主产生CTL、TH1型和体液免疫应答。结论 pcDNA3．1（＋）-mIL-12和CpG具有较强的增强核酸疫苗pcDNA3．1（＋）-Sj14-3-3抗血吸虫攻击感染作用。     

日本血吸虫(中国大陆株)14-3-3信号蛋白的真核表达

目的从日本血吸虫成虫cDNA中扩增出信号蛋白Sj14-3-3编码基因，并亚克隆至真核表达载体pcDNA3．1( )，旨在制备重组诊断抗原和分子疫苗。方法提取日本血吸虫成虫总RNA，分离mRNA，RT-PCR法制备cDNA．并扩增出Sj-4-3-3编码基因，通过线性TA克隆载体pGEM-T连接，亚克隆至真核表达载体pcDNA3．1( )，经转染至COS-7细胞中表达，Western blotting鉴定。结果RT-PCR产物、pGEM-T-Sj14-3-3及pcDNA3．1( )-Sj14-3-3分别经双酶切后均获得一特异性基因片段，经SDS-PAGE及Western blotting鉴定后的分子量为29kD。结论真核表达重组质粒pcDNA3．1( )-Sj14-3-3在COS-7细胞中的表达产物是一分子量为29kD的蛋白，并能被抗Sj14-3-3单克隆抗体识别。     

金属β-内酰胺酶研究进展

金属β-内酰胺酶是β-内酰胺酶中的B亚群,带有该酶的细菌表现为碳青霉烯类抗生素的耐药,该基因可通过染色体和转移基因在不同种细菌间传递,造成广泛耐药。本篇综述从金属β-内酰胺酶的分类、分子结构、抑制剂,检测方法,流行病学特点和MBL阳性的革兰阴性杆菌感染的处理等方面加以阐述。     

社区获得性肺炎的病原体调查与药物敏感性分析

目的研究社区获得性肺炎CAP病原体种类、药物敏感性等,为临床有效诊断、治疗提供依据。方法对154名社区获得性肺炎患者的标本进行细菌培养和血清学检测,并进行药物敏感性试验。用PCR检测社区获得性肺炎非典型病原体。结果在社区获得性肺炎患者中多重感染十分常见;在典型病原体感染中,以肺炎链球菌最为常见;在非典型病原体感染中,以肺炎支原体最为常见,非典型病原体感染在8～14岁阶段检出率最高;明确了各种病原体对常用抗菌药物的敏感性。结论明确了该地区社区获得性肺炎的病原谱,及其对药物敏感性的差异,为临床有效治疗提供了依据。     

检验结果危急值报告制度的建立与临床应用

检验结果危急值报告制度是中国医院协会在“患者安全目标”中提出来的。该制度的建立与应用既是检验科实施《医疗机构临床实验室管理办法》的目标之一,也是保障患者医疗质量和医疗安全的需要^[1]。我院自2007年建立和应用检验结果危急值报告制度以来,有效地防止和减少了不良事件、医疗纠纷和事故的发生。     

呼吸道感染病原菌分布及耐药性变化趋势研究

目的探讨社区获得性感染中呼吸道感染病原菌的分布及对抗生素的耐药性。方法用VITEK微生物鉴定仪鉴定细菌类别,K-B纸片扩散法检测细菌的耐药性。结果革兰阳性菌中,金黄色葡萄球菌渐少,从2003年的10.8%降到2005年的4.2%。化脓链球菌渐多(从2003年的2.9%升到2005年的6.8%);革兰阴性菌中,铜绿假单胞菌检出率最高且渐多。假丝酵母菌的检出率明显提高。细菌对各种抗生素的耐药率均有明显提高。结论由于临床大量抗生素的应用,假丝酵母菌检出率大大增加,细菌耐药率明显提高。