原发性高血压病合并微量蛋白尿患者血压控制程度对动脉弹性功能的影响研究

目的　探讨原发性高血压病合并不同程度微量蛋白尿患者血压控制程度对动脉弹性功能的影响。方法　选取2016年6月—2017年6月在贵州医科大学附属医院心内科及高血压科住院确诊的原发性高血压病患者114例,根据尿清蛋白/肌酐（UACR）水平,将30 mg/g≤UACR<100 mg/g作为Ⅰ组（50例）,其中血压控制良好〔收缩压<140 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa）且舒张压<90 mm Hg〕者25例,血压控制不良（收缩压≥140 mm Hg和/或舒张压≥90 mm Hg）者25例;100 mg/g≤UACR<200 mg/g作为Ⅱ组（34例）,其中血压控制良好者17例,血压控制不良者17例;200 mg/g≤UACR<300 mg/g作为Ⅲ组（30例）,其中血压控制良好者15例,血压控制不良者15例。根据血压控制情况将患者分为血压控制不良组（57例）、血压控制良好组（57例）。测量患者血压、血糖、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、UACR、血管弹性功能〔肱踝脉搏波传导速度（BaPWV）、颈-股动脉脉搏波传导速度（C-FPWV）及中心动脉收缩压（CSP）〕。结果　血压控制不良组年龄高于血压控制良好组,血糖低于血压控制良好组（P<0.05）。血压控制不良组收缩压、脉压、UACR、BaPWV、C-FPWV、CSP均高于血压控制良好组（P<0.05）。Ⅱ、Ⅲ组C-FPWV、CSP均高于Ⅰ组,Ⅲ组脉压、BaPWV均高于Ⅰ组（P<0.05）;Ⅲ组BaPWV、C-FPWV、CSP均高于Ⅱ组（P<0.05）。Ⅰ组血压控制良好者收缩压、舒张压、脉压、UACR、C-FPWV、CSP均低于血压控制不良者（P<0.05）。Ⅱ组血压控制良好者收缩压、脉压、UACR、C-FPWV、CSP均低于血压控制不良者（P<0.05）。Ⅲ组血压控制良好者收缩压、脉压、C-FPWV、CSP均低于血压控制不良者,舒张压高于血压控制不良者（P<0.05）。多元线性逐步回归分析结果显示,血糖是血压控制良好组患者C-FPWV的影响因素（β=0.526,P<0.05）;年龄、收缩压、脉压、UACR是血压控制不良组患者C-FPWV的影响因素（β=0.031、0.034、0.048、0.023,P<0.05）;舒张压、脉压、UACR是血压控制良好组患者CSP的影响因素（β=0.349、0.225、0.111,P<0.05）;年龄、脉压、UACR是血压控制不良组患者CSP的影响因素（β=0.321、0.243、0.113,P<0.05）。结论　原发性高血压病合并微量蛋白尿患者存在动脉弹性功能异常,随微量蛋白尿增加患者动脉弹性功能受损程度加重,动脉弹性功能受损与微量蛋白尿及血压控制程度相关。     

ACE基因多态性与贵州布依族、汉族原发性高血压及患者血清PⅢNT、MMP-9及 hs-CRP的相关性研究

目的：探讨血管紧张素转化酶（angiotensin converting enzymegene,ACE）基因I/D位点多态性与贵州布依族、汉族原发性高血压及患者血清Ⅲ型前胶原氨基端肽（procollagen Ⅲ N-terminal peptide,PⅢNT）、基质金属蛋白酶-9（matrix metallopro－teinase-9,MMP-9）及高敏C反应蛋白（hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP）的相关性。方法：入选贵州黔南地区原发性高血压患者302例（布依族154例,汉族148例）为高血压组,健康者299例（布依族143例,汉族156例）为正常对照组,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术检测ACE I/D位点各基因型及等位基因,采用酶联免疫吸附试验检测血清PⅢNT、MMP-9及hs-CRP水平。结果：①ACE基因ID基因型及D等位基因分布频率在高血压组和正常对照组间（ ?字2=13.50,P=0.001）、在布依族高血压组和布依族正常对照组间（ ?字2=28.28,P=0.000）差异均有统计学意义。②PⅢNT、MMP-9与hs-CRP水平在布依族与汉族间、在高血压组与正常对照组间、在布依族高血压组与对照组间,以及在汉族高血压组与对照组间差异均有统计学意义（P<0.01）;PⅢNT、MMP-9与hs-CRP水平在ACE I/D位点不同基因型间差异均有统计学意义（P<0.01）。结论：①ACE基因ID基因型及D等位基因可能与布依族高血压有关;在布依族正常人群中,具有ID基因型及D等位基因者可能比具有Ⅱ、DD基因型及I等位基因者患高血压的风险高;ACE基因 I/D多态性可能是贵州黔南布依族高血压的致病因素之一。②布依族高血压患者及具有ID基因型的患者可能更易出现血管壁胶原积累、炎症反应、细胞外基质沉积及血管重塑。     

中老年原发性高血压伴冠心病及微量蛋白尿与动脉弹性的相关性

目的探讨中老年原发性高血压(EH)患者合并冠心病和尿微量蛋白(MAU)对动脉弹性的影响。方法选择中老年EH患者246例,按年龄分为中年EH组114例,老年EH组132例,其中未经治疗的合并冠心病44例(中老年各22例,按冠状动脉病变支数和年龄分为中年单支病变9例、双支病变9例、3支病变4例;老年单支病变8例、双支病变6例、3支病变8例)。选择同期无高血压的门诊体检者45例为正常对照组。检测患者MAU/肌酐(ACR)。采用动脉硬化仪检测入选者的颈-股动脉脉搏波传导速度(CF-PWV)、肱踝脉搏波传导速度(ba-PWV)和中心动脉收缩压(CSP)。结果中年EH组和老年EH组ACR(P0.05)、冠心病患病率(19.30%和16.67%vs0%,P0.05)显著高于正常对照组。老年单、双、3支病变ba-PWV、ACR显著高于中年(P0.05);中年和老年3支病变CSP、CF-PWV、ba-PWV、ACR显著高于单、双支病变患者(P0.05)。多元线性回归显示,年龄、CF-PWV、CSP与中、老年EH患者MAU和冠状动脉变病支数呈正相关(P0.05,P0.01)。结论 CF-PWV、CSP在一定程度上反映中老年EH患者冠状动脉病变和肾损害程度,合并冠状动脉病变时,老年患者肾血管损害加重。     

FNDC5过表达慢病毒载体的构建及稳定转染THP-1细胞系

目的：构建过表达Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5（fibronectin type Ⅲ domain-containing protein 5, FNDC5）基因的慢病毒载体,获得稳定转染FNDC5的THP-1细胞系。方法：PCR扩增目的基因FNDC5,将目的基因构建入pLenti-EF1a-EGFP-P2A-Puro慢病毒载体中,在DH5α感受态细胞中进行扩增,测序及鉴定合格后利用四质粒包装系统转染293T细胞,包装成过表达慢病毒颗粒并测定病毒滴度。Western blot检测重组慢病毒中FNDC5的表达情况后,将获得的重组慢病毒转染THP-1细胞系,荧光显微镜观察并计算其转染效率。经嘌呤霉素筛选建立FNDC5过表达的稳转细胞系后,将细胞分为3组,分别为空白组、空载组和FNDC5组,用Western blot及RT-PCR检测其FNDC5的表达情况。通过油红O染色后观察FNDC5过表达对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞脂质蓄积的影响。结果：PCR产物鉴定及测序结果显示成功构建FNDC5过表达慢病毒载体;转染293T细胞后可检测到绿色荧光,Western blot检测FNDC5-Flag标签有表达,包装后病毒的滴度为1.32×109 TU/mL;Western blot及RT-PCR检测重组慢病毒转染THP-1细胞系,与空载组对比,FNDC5组中FNDC5蛋白表达明显增加[（238.0±24.9）％],有统计学意义（P=0.000）;与空载组对比,FNDC5组中FNDC5 mRNA表达水平明显增加[（228.5±3.4）％],有统计学意义（P=0.000）。FNDC5过表达转染THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞中的脂质蓄积减少。结论：本实验成功构建了FNDC5基因的过表达慢病毒载体,通过FNDC5过表达慢病毒感染建立了FNDC5稳转的THP-1细胞系,证明FNDC5可明显减少THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞的脂质蓄积,为后续研究奠定基础。     

鸢尾素对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的研究鸢尾素对载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠动脉粥样硬化的影响。方法将ApoE~(-/-)小鼠随机分为正常对照组、动脉粥样硬化模型组、鸢尾素组,每组10只,分别给予普通饮食+生理盐水、高脂饮食+生理盐水、高脂饮食+鸢尾素,饲养至12周后处死,处死前测体重,用化学法测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。采用HE染色和整体油红O染色分析主动脉粥样斑块面积大小,实时荧光定量(qRT-PCR)检测主动脉CD36、NF-κB p65的mRNA表达,Western blot检测主动脉CD36、NF-κB p65、SOD的蛋白表达。结果动脉粥样硬化模型组主动脉斑块面积明显高于正常对照组,内膜明显增厚,而鸢尾素组较动脉粥样硬化模型组斑块面积减少,内膜增厚程度下降。与正常对照组比较,动脉粥样硬化模型组小鼠体重、TC、TG、LDLC、MDA水平升高,NF-κB p65、CD36mRNA和蛋白表达增加,而血清SOD活性、HDLC水平减低(P0.05)。与动脉粥样硬化模型组比较,鸢尾素组小鼠体重、TC、TG、LDLC、MDA水平降低,NF-κB p65、CD36 mRNA和蛋白表达下调,而血清SOD活性、HDLC水平升高(P0.05)。结论鸢尾素能减轻ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的发生发展,这可能与其降低小鼠体重和血脂、抑制炎症反应、抗氧化应激有关。