FAS抗原胞外区片段GST融合蛋白的产生

目的：获得重组ＦＡＳ抗原，用于抗体制备及进一步的功能分析。方法：用ＰＣＲ技术从完整的ＦＡＳｃＤＮＡ克隆上扩增其编码胞外区的部分，将ＰＣＲ产物直接克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体系统，ＤＮＡ序列分析证实序列完全正确；用ＥｃｏＲⅠ和ＳａｌⅠ将ＦＡＳ胞外区片段切出，定向克隆到经同样酶切处理的ｐＧＥＸ－ＫＧ表达载体，转化大肠杆菌，经优化ＩＰＴＧ的诱导条件，获得了ＦＡＳ胞外区与谷胱甘肽－Ｓ－转移酶的融合蛋白高效表达；用亲合层析法从细菌粗提物中纯化了ＧＳＴ－ＦＡＳ融合蛋白，免疫家兔制备了抗ＦＡＳ抗体。结果：用重组ＦＡＳ为免疫原制备的抗体能诱导Ｕ９３７细胞产生细胞凋亡。结论：重组ＦＡＳ抗原和制备的抗体能用于对ＦＡＳ系统的功能研究     

人整合素分子β7亚基片段的表达鉴定及多抗制备

目的 在大肠杆菌中高效表达人整合素分子β７片段并制备多抗。方法 ＤＮＡ重组法构建表达质粒,经ＩＰＴＧ诱导在大肠杆菌中获高效表达。表达产物经免疫印迹鉴定后,用８ｍｏｌ／Ｌ尿素溶解包涵体,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纯化,免疫家兔获得多抗。结果 β７片段在大肠杆菌中训效表达。表达产物以包涵体形式存在。免疫印迹鉴定为目的蛋白。多抗效价达１：１０２４００。结论 制备了抗β７的多抗,对β７整合素的功能研究有重要意义。     

FAS系统在病毒性肝细胞损伤中的作用

细胞凋亡是急慢性肝炎的细胞死亡类型之一,ＦＡＳ系统在其中起重要的作用,肝浸润淋巴细胞通过表达ＦａｓＬ引起肝细胞凋亡,是病毒性肝细胞损伤的主要机制之一,本文对这方面的进展作一综述。     

FAS抗原胞外区片段GST融合蛋白 产生

获得得重组ＦＡＳ抗原，用于抗体制备及进一步的功能分析，方法用ＰＣＲ技术从完整的ＦＡＳｃＤＮＡ克隆上扩增其编码胞外区的部分，将ＰＣＲ产物直接克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体系统，ＤＮＡ序列分析证实序列完全正确；用ＥｃｏＲⅠ和ＳａｌⅠ将ＦＡＳ胞外区片段切出，     

CD44单克隆抗体对人黑色素瘤细胞的体内外生物学特性的影响

为了深入揭示粘附分子ＣＤ４４在肿瘤细胞中的作用，分析了ＣＤ４４单克隆抗体６Ｂ１对人黑色素瘤细胞ＨＭＭ２３９体内外特性的影响。结果显示：抗ＣＤ４４的单抗６Ｂ１对ＨＭＭ２３９与透明质酸的结合没有影响；尾静脉注射６Ｂ１能一定程度地抑制ＨＭＭ２３９细胞在裸鼠体内的致瘤性；但在体外６Ｂ１却能促进ＨＭＭ２３９细胞的增殖；经检测发现，ＨＭＭ２３９产生低水平的ＩＬ－２，且细胞经ＣＤ４４单抗６Ｂ１处理后能提高ＩＬ－２的表达水平。本文工作为深入揭示ＣＤ４４在肿瘤细胞上的功能和作用机制奠定了基础     

人整合素分子α4亚基片段的克隆和表达

目的克隆并表达人整合素分子α4亚基1.2kbcDNA片段。方法从HL-60细胞系中提取总RNA,以RT-PCR法扩增人整合素分子α4亚基片段1.2kbcDNA(1753～2934bp),并将该片段亚克隆至表达载体pGEX-3X,用IPTG诱导表达。结果克隆了α4亚基1.2kbcDNA片段。序列分析表明,其所编码的氨基酸序列与文献相比较只有一处错义突变(Arg→Gln),经分析该突变对抗原性影响不大。将该片段亚克隆至表达载体pGEX-3X,经IPTG诱导在大肠杆菌中获得高效表达。结论获得了α4亚基1.2kbcDNA片段及其原核表达产物,对研究α4整合素的功能具有重要的意义。     

细胞间粘附分子重组蛋白的表达与单克隆抗体的制备

细胞间粘附分子 (ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ 1,ＩＣＡＭ 1)是属于免疫球蛋白超家族的一类粘附分子 ,其配体是 β2整合素的两个成员 :ＬＦＡ 1(ＣＤ11ａ/ＣＤ18)和Ｍａｃ 1(ＣＤ11ｂ/ＣＤ18)。ＩＣＡＭ 1与其配体的结合具有重要的免疫学功能 :首先它介导了Ｔ细胞和ＮＫ细胞对靶细胞的杀伤作用 ;其次它还是Ｔ细胞激活的共刺激信号之一 ,在白细胞与血管内皮细胞的粘附中起重要作用 ;另外ＩＣＡＭ 1是鼻病毒的受体 ,还参与肿瘤细胞的转移。ＩＣＡＭ 1已成为抗炎症治疗的重要靶标。本文报道了重组ＩＣＡＭ 1的…     

CD44H胞外区cDNA片段的克隆及在大肠杆菌中的表达

以ｐＵＣ／ＣＤ４４为模板，用ＰＣＲ法扩增出Ｈ型ＣＤ４４的ｃＤＮＡ片段。用ＥｃｏＲＩ／ＢｃＩＩ双酶切保留编码ＣＤ４４Ｈ的信号肽及胞外内ＤＮＡ片段，插入融合蛋白表达载体ＰＥＸ３１ｂ的ＥｃｏＲＩ／Ｓａ１Ｉ位点，形成重组质粒ＰＥＸ－ＣＤ４４，将ＰＥＸ－ＣＤ４４导入大肠杆菌菌ＲＲ１（ＰＣＩ８５７），经４２℃温控诱导，有额外蛋白的产生，分子量与预期大小一致，表达产物形成包涵体，表达产量占菌体总蛋白的２１％左右     

bcr-abl基因免疫诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞杀伤功能

目的：研究bcr-abl融合基因免疫在慢性髓系白血病（chronic myelogenous leukemia CML)中的作用以及探讨CML基因免疫治疗的可行性。方法：设计两条引物扩增bcr-abl融合位点两侧约490bp大小的cDNA,经测序鉴定正确后,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1,通过电穿孔法转染至p815细胞,应用G418筛选建立稳定的靶细胞,同时将重组真核表达载体肌肉免疫BALB／c小鼠以获取特异的效应细胞,乳酸脱氢酶（LDH）法检测特异性杀伤率。结果：（1）PCR扩增出可用于基因免疫的位于Bcr-alb融合基因位点两侧的490bp大小的cDNA,序列测定除第452位碱基C突变为T外其余序列均正确;（2）构建了重组真核高效表达载体,命名为pcDNA/bcr-abl;(3)G418梯度筛选建立了稳定表达该融合基因的细胞系,逆转录－聚合酶链反应;（4）bcr-abl基因免疫后的小鼠能有效诱导出特异性细胞毒T细胞（cytotoxic T lymphcyte,CTL),结论：位于融合位点两侧的bcr-abl基因肌肉免疫小鼠能够诱导特异性CTL,杀伤bcl-abl融合基因转染的靶细胞。