自噬相关蛋白Atg5在BPA所致肝脏脂质沉积中的作用研究

目的:观察自噬相关蛋白Atg5是否介导双酚A(bisphenol A,BPA)所致的肝脏脂质沉积。方法:将Hep G2肝细胞分为对照组、BPA不同浓度(1、10μmol/L)干预组、阳性对照组即200μmol/L油酸(oleic acid,OA)联合400μmol/L软脂酸(Palmitic acid,PA),分别给予上述不同干预24 h。采用化学酶促-比色法定量检测细胞内甘油三酯(triglyceride,TG)含量,油红O染色观察细胞内脂滴沉积情况。Real-time PCR及Western blot、免疫荧光方法检测在不同干预情况下Hep G2细胞内Atg5的表达水平。结果:1不同浓度BPA干预后,Hep G2细胞内TG含量均有不同程度的升高,其中10μmol/L BPA组升高具有统计学意义(0.197±0.033;0.094±0.014,P=0.031);2油红O染色结果与TG定量一致。3Real-time PCR结果表明,与对照组相比10μmol/L BPA组Atg5 m RNA表达并无明显变化(0.93±0.088;1.017 5±0.062 4,t=0.811,P=0.428);Western blot结果显示与对照组相比10μmol/L BPA组其蛋白表达明显减少(0.519±0.059;1,t=0.8101,P=0.000);免疫荧光进一步检测发现,与对照组相比10μmol/L BPA组Atg5荧光小点数量明显减少。结论:自噬相关蛋白Atg5可能介导BPA所致的肝脏脂质沉积的发生。     

慢性乙型肝炎及乙型肝炎性肝硬化患者色氨酸代谢变化及其相关性分析

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)和乙型肝炎性肝硬化(HBC)患者色氨酸(Trp)代谢变化及相关性.方法 选取2015年10月至2016年1月在重庆医科大学附属第一医院住院的CHB 81例和HBC 40例患者为研究对象,40例健康者为对照.采用高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FD)对各组受试者血浆中Trp及代谢产物犬尿氨酸(Kyn)、5-羟色胺(5-HT)水平进行测定,实时荧光定量PCR检测HBV-DNA病毒复制数,分析3组间血清学指标差异,采用Pearson相关分析和Logistic回归分析筛选危险因素.结果 与对照组比较,CHB组、HBC组受试者血浆中Trp和5-HT水平明显降低(P<0.01);HBC组受试者血浆中Kyn/Trp明显高于其他两组(P<0.01).HBC组Kyn/Trp与A/G呈负相关(r=-0.686,P<0.01),CHB组Kyn/Trp与Log DNA呈正相关(r=0.784,P<0.01).Logistic回归分析显示Kyn/Trp为CHB和HBC的危险因素.结论 检测血浆中Trp及其代谢产物可作为辅助指标评估乙型肝炎进展情况.     

HPLC-UV检测法同时测定血浆色氨酸和犬尿氨酸的方法学研究

目的 建立一种同时测定血浆中Trp和Kyn浓度的HPLC-UV检测法.方法 以3-硝基酪氨酸(3-N-Tyr)为内标,采用Agilent Hypersil ODS色谱柱进行分离.流动相中醋酸缓冲液( 15 mmol/L,pH 5.5):乙腈为94∶ 6(v/v);流速为0.8 ml/min;柱温:25℃;紫外程序化检测波长:0～4 min,360 nm;4～5 min,302 nm.选取2010年9-12月重庆市九龙坡区第一人民医院15例慢性乙型肝炎患者、8例慢性肾炎患者、10例血小板减少性紫癜患者以及15名健康体检者,用该方法检测其血浆Trp、Kyn水平并计算Kyn/Tp比值;各指标在上述4组间的比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK法.结果 Kyn与Trp的保留时间分别为2.9 min和4.4 min,线性范围分别为0.44～18.30μmol/L和3.67～470.00 μmol/L,检测限分别为0.014 μmol/L和0.122 μmol/L.Kyn与Trp的日内变异均小于3％,日间变异均小于4％.平均回收率均在92.29％～104.40％之间.用该方法测定临床标本,健康对照组、慢性肾炎组、血小板减少性紫癜组以及慢性乙型肝炎组血浆中Kyn浓度分别为(1.59±0.28)、(2.73±0.56)、(2.69±0.44)和(1.54±0.48) μmol/L,Trp浓度分别为(59.8±10.0)、(46.1±11.7)、(58.5±8.0)和(41.4±13.1)μmol/L,Kyn/Trp比值分别为(0.027 4±0.007 5)、(0.061 6±0.0165)、(0.0467±0.0091)和(0.038 3±0.007 5),差异均有统计学意义(F值分别为23.734,8.463和20.921,P均＜0.01).结论 所建立HPLC-UV检测法可同时测定血浆中Kyn和Trp浓度,适合于临床检测.     

血清胆汁酸代谢轮廓分析在妊娠肝内胆汁淤积症诊断中的应用

目的:探讨血清胆汁酸代谢轮廓分析在妊娠肝内胆汁淤积症(Intrahepatic cholestasisofpregnancy,ICP)诊断中的作用.方法:应用柱前衍生HPLC-荧光检测法测定ICP患者,乙肝孕妇和正常孕妇(各11例)血清胆汁酸谱(5种游离型和4种甘氨结合型),结合主成分分析法(Principal component analysis,PCA)和偏最小二乘判别分析法(Partial least-squares discriminant analysis,PLS-DA)对血清胆汁酸谱进行分析.结果:血清胆汁酸代谢轮廓分析可区分ICP患者,乙肝孕妇和正常孕妇,其模型的正确诊断率和预测能力分别为97.0%和75.3%.结论:血清胆汁酸代谢轮廓分析有助于ICP的诊断和鉴别诊断.     

重庆市某社区代谢综合征及其组分发生率变化：一项10年随访研究

目的：调查重庆市某社区人群10年期间代谢综合征（metabolic syndrome,MS）及其各组分发生率的变化情况。方法：分别于2003、2008、2013年,对该社区人群进行问卷调查、人体学测量、空腹及餐后2 h血糖、血脂检测等。MS定义采用2013年中华医学会糖尿病学会的建议标准。结果：该社区2003、2008、2013年分别有3 140、3 867、5 429人接受调查,MS标化患病率分别为21.0%、21.3%、25.4%,10年间有显著性增加（?字2=30.85,P<0.01）。10年间,该社区人群代谢组分中高血压和高血糖的发生率明显增加（?字2分别为9.43、374.55,P值均<0.01）。结论：该社区人群MS标化患病率在近十年内显著升高,系代谢组分中高血压及高血糖的发生率明显增加所致。     

重庆地区正常育龄期女性雄激素水平初探

目的：了解重庆地区正常育龄期女性总睾酮（total testosterone,TT）、游离睾酮（free testosterone,FT）、游离睾酮指数（free androgen index,FAI）、硫酸脱氢表雄酮（dehydroepiandrosterone sulfate,DHEAS）的个体值分布范围。方法：于2007年10月至2012年8月招募健康成年女性121名,检测其血清TT、DHEAS水平,计算FT（calculated free testosterone,cFT）及FAI的值,对正态分布指标采用（x±1.96 s）、对非正态分布指标采用百分位数法（P2.5和P97.5）建立各指标95%的个体值分布范围。结果：（1）成年女性雄激素指标TT、cFT、DHEAS呈正态分布,平均水平TT为（0.46±0.16） ng/ml,cFT为（5.92±2.80） pg/ml,DHEAS为（222.81±86.82） μg/dl,FAI呈右偏态分布,中位数及四分位间距为2.60%（1.87%~3.56%）。（2）TT的95%个体值分布范围为（0.15~0.77） ng/ml,cFT的95%个体值分布范围为（0.43~11.40） pg/ml,FAI的95%个体值分布范围为0.90%~9.34%,DHEAS的95%个体值分布范围为（52.64~392.98） μg/dl。结论：初步建立了重庆地区正常育龄期女性TT、cFT、FAI、DHEAS的个体值分布范围。     

探讨促肾上腺皮质激素兴奋在肾上腺静脉取血中的应用价值

目的探讨促肾上腺皮质激素(ACTH)兴奋在肾上腺静脉取血(AVS)中的应用价值。方法纳入完成常规AVS和ACTH兴奋的AVS,且至少有一种AVS双侧肾上腺静脉插管成功的原发性醛固酮增多症(原醛症)患者。计算选择指数(SI)、优势侧指数(LI),比较ACTH兴奋与否对插管成功率及优势侧判断的影响。结果共纳入73名原醛症患者,其中28名术后证实为醛固酮瘤(APA)。ACTH注射后外周及肾上腺静脉的皮质醇和醛固酮均较注射前显著增高(P<0.01)。注射ACTH后,左侧SI从6.5(3.0~13.6)增加到26.8(16.9~40.3)(P<0.01),右侧SI从20.8(4.8~34.8)增加到57.6(35.7~80.9)(P<0.01)。LI在ACTH兴奋前后没有统计学差异[7.7(2.3~19.6)对5.6(1.9~14.6),P=0.14]。注射ACTH后,左侧和右侧插管成功率分别提高15%和10%。在两种AVS方法都判定为插管成功的57例患者中,27例为单侧优势分泌,21例为双侧分泌,两种AVS判断优势侧的一致性为84%(48/57)。28个术后证实为APA的患者中,两种AVS方法单侧优势判断的正确率均为89%(25/28)。结论ACTH兴奋试验有助于准确判断双侧肾上腺静脉插管成功率,有助于AVS结果的判断。对于插管成功的患者,两种AVS在判定优势侧方面没有明显差异。     

HPLC-ED检测血浆游离型甲氧基肾上腺素类物质诊断嗜铬细胞瘤及预后观察

目的：探讨高效液相色谱-电化学法（high performance liquid chromatography-electrochemical detection,HPLC-ED）检测血浆游离型甲氧基肾上腺素类物质（metanephrines,MNs）在嗜铬细胞瘤中诊断应用和预后观察。方法：采用HPLC-ED检测分析血浆游离型MNs嗜铬细胞瘤患者21例、健康对照组26例、原发性高血压组23例和非嗜铬细胞瘤性肾上腺占位性疾病组24例。结果：嗜铬细胞瘤患者血浆游离型MNs浓度明显高于其他３组（P<0.05）;以甲氧基去甲肾上腺素（normetanephrine,NMN）150 ng/L和（或）甲氧基肾上腺素（metanephrine,MN）120 ng/L为切点,诊断敏感度、特异性分别为100%、89%。NMN、MN浓度与肿瘤体积密切相关（NMN：r=0.952,P=0.000;MN：r=0.510,P=0.018）。嗜铬细胞瘤患者在肿瘤切除后血MNs浓度迅速降低。结论：血浆游离型MNs是诊断嗜铬细胞瘤和预后观察的良好标志物。     

6 种化学发光系统检测肿瘤标志物的应用评估分析

目的　探讨6 种化学发光系统检测甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、总前列腺特异抗原（tPSA）、游离前列腺特异性抗原（fPSA）、糖类抗原CA199（CA199）、糖类抗原CA153（CA153）和糖类抗原CA125（CA125）仪器参数、西格玛值（σ）、可比性及临床可接受程度。方法　收集6 种系统的检测速度,试剂仓位,开展项目数等硬件参数,使用单位半年质控数据,计算各系统检测项目的精密度及σ 值。以Roche E602 电化学发光系统为参考系统,根据EP9-A2 文件的要求,对检测结果进行方法比对和偏倚评估。结果　① 比较6 种检测系统的检测速度,试剂仓位,软件功能等参数,6 种检测系统基本满足临床需求。② Roche E602 与A厂家比较,多数检测项目σ 值多数高于6σ 水平;B,D 和E 三家厂家检测项目σ 值基本处于优秀水平（5~6）;C 厂家多个项目小于4σ 水平,存在较大差距。③除B厂家外,其它厂家与Roche E602 多数项目偏移超过1/2 TEa,临床不可接受。结论　实验室同时存在多种不同品牌化学发光检测系统检测同一检验项目时,应进行方法比对和偏倚评估,判断其临床可接受性能,以保证检验结果的可比性。