冻存脐带血中内皮祖细胞的分离培养及生物学特性鉴定

目的:建立和开发一种新型的从冻存脐带血中分离培养内皮祖细胞(EPC)的方法,探讨其生物学特性,提高冻存脐带血分离获得EPC的成功率。方法:自液氮罐中收集公共库中2000年至2001年保存的12例冻存脐带血,37℃水浴锅中快速复苏后,磷酸缓冲盐溶液(PBS缓冲液)洗涤,获得总有核细胞(TNCs),将TNCs接种至培养皿中诱导扩增EPC。使用流式细胞术和免疫荧光方法鉴定EPC并确定纯度。采用下列方法体外鉴定内皮祖细胞的功能:荧光显微镜观察细胞特异性摄取Dil-Ac-LDL和FITC-UEA-I的功能、在基质胶中形成毛细管样结构的情况,ELISA法检测释放VEGF因子的功能。结果:培养3周后,出现1-5个鹅卵石铺路石样内皮祖细胞集落。体外培养第1-3代EPC,其表面CD31、CD34、CD144和VEGFR (CD309)标记阳性率分别为(92. 91±5. 20)%、(30. 0±23. 27)%、(88. 55±3. 83)%和(67. 21±12. 12)%。EPC细胞具有特异性内吞Dil-Ac-LDL和FITCUEA-I、形成毛细管结构,释放低浓度VEGF因子等功能。结论:采用本方法从冻存脐带血中分离EPC的稳定性与重复性高,从冻存的脐带血中分离EPC的成功率可提高至85%。该方法为临床应用丰富的内皮祖细胞奠定了基础。     

治疗糖尿病药物的研究新进展

近年来,治疗糖尿病的药物研究取得长足进展,掌握这些药物的特性将有助于对糖尿病人选择最合适的治疗药物。现将这些药物的作用原理和近年来临床应用的新观点综述如下。 1 对口服抗糖尿病药物的新认识 1.1 磺酰脲类第一代有氯磺丙脲(chlorprpamide)、甲     

胰岛素抵抗对巨噬细胞ACAT-1表达的影响及罗格列酮的干预作用

目的 进一步探讨动脉粥样硬化的发生机制及罗格列酮的干预作用.及过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)高亲和性配体罗格列酮的干预作用.方法 体外培养人单核细胞系THP-1细胞,诱导分化为巨噬细胞,分别采用高浓度胰岛素、葡萄糖和不同浓度罗格列酮进行干预,实时定量PCR法检测巨噬细胞人巨噬细胞酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶-1(ACAT-1)mRNA表达水平,Western blot检测其蛋白表达.结果 在高浓度胰岛素和葡萄糖状态下巨噬细胞ACAT-1m RNA和蛋白表达明显增加(P＜0.01);罗格列酮可明显下调其表达且呈浓度依赖性.结论 胰岛素抵抗状态下巨噬细胞ACAT-1表达水平升高,罗格列酮可明显下调其表达;此可能为其发挥抗动脉粥样硬化作用的机制之一.     

PPAR-γ对巨噬细胞ACAT-1表达的影响及可能的信号途径

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)对巨噬细胞中酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(ACAT-1)表达影响及可能参与的信号途径.方法 在RPMI1640培养基中培养人单核细胞(THP-1),加入佛波酯(PMA)培养48 h,细胞贴壁呈巨噬细胞样分化.在高浓度胰岛素状态下,分别加入PPAR-γ的配体罗格列酮和胰岛素信号途径阻滞剂[细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059、p38促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580和c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125],采用Western-blot法检测巨噬细胞ACAT-1蛋白水平,实时定量PCR法检测ACAT-1 mRNA水平.结果 在高胰岛素状态下,给予罗格列酮干预后ACAT-1 mRNA和蛋白表达均降低;再加入SB203580后ACAT-1 mRNA和蛋白表达较加入罗格列酮时均增加.结论 p38MAPK途径参与了PPAR-γ抑制ACAT-1的表达,并发挥抗动脉粥样硬化的作用.     

渥曼青霉素阻断罗格列酮对人巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1表达的影响

目的:研究过氧化体增殖物激活型受体-γ(peroxisome proliferator activated receptors-γ,PPAR-γ)配体罗格列酮对巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(Acyl-CoA:cholesterol acyltransferase-1,ACAT-1)表达的影响及可能机制。方法:在RPMI 1640培养基中培养人单核细胞株(THP-1),加入佛波酯培养48h,细胞贴壁呈巨噬细胞样分化。将细胞分为空白对照组、不同浓度罗格列酮组和罗格列酮 渥曼青霉素(wortmannin)组,运用实时定量PCR和Western blot,观察巨噬细胞ACAT-1 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:罗格列酮可明显抑制ACAT-1 mRNA和蛋白的表达,且呈浓度依赖性;加入磷酯酰肌醇三磷酸激酶(phosphate dylinositol 3-kinase,PI3K)信号途径抑制剂渥曼青霉素后ACAT-1表达较罗格列酮组高,较空白对照组低。结论:PPAR-γ配体罗格列酮通过PI3K途径抑制ACAT-1表达发挥其抗动脉粥样硬化的作用。     

短暂性脑缺血发作病人的脑缺血耐受作用及血清MMP-9水平的变化

目的 评价短暂脑缺血发作(TIA)是否具有脑保护作用并探讨其机制.方法 选择2000～2004年142例脑梗死病人.脑梗死前有TIA病史者分为3组,A组30例,TIA持续时间10 min;B组30例,TIA持续时间10～20min;C组30例,TIA持续时间20 min;52例无TIA病史者列为D组.采用欧洲脑卒中神经功能缺损评分标准(ESS),对各组患者入院后24 h、21 d及发病后3个月进行神经功能评分;应用Pullicino等公式对各组病人发病21 d时进行脑梗死体积计算;应用酶联免疫吸附法测定各组病人发病12、24、48、72、96 h时血清MMP-9的水平.结果 A、B、C 3组病人神经功能评分明显高于D组,B组病人明显高于A、C两组;发病21 d时,A、B、C 3组病人梗死体积明显小于D组,B组最明显;每组患者血清MMP-9的水平呈动态变化即发病12 h开始增高,48 h达到高峰,96 h时恢复到正常水平.B组病人在不同时间点血清MMP-9的含量明显低于A、C两组,且明显低于D组.结论 缺血耐受在脑梗死前合并TIA的患者可能发挥作用.其作用可以与MMP-9的表达减少有关.     

谷胱甘肽的临床应用

谷胱甘肽(glutathione)是甘油醛磷脱氢酶的辅基,又是乙二醛酶及磷酸丙糖脱氢酶的辅酶,参与体内三羧酸循环及糖代谢,使人体获得高能量。它能激活各种酶,如体内的巯基(-SH)酶等,从而促进碳水化合物、脂肪及蛋白质代谢,也能影响细胞的代谢过程。本文就有关文献综述其在临床中的应用。 1 治疗糖尿病神经病变糖尿病神经变是糖尿病最常见的并发症之一。谷胱甘肽是一种细胞内重要的调节代谢物质,能提供巯基、半胱氨酸,维持细胞的正常代谢与保护细胞的完整性,并能结合亲电子基与自由基等有害物质,具抗脂质过氧化作用,可直接使自由基还原或促进超氧化物歧化酶合成。谷胱甘胱过氧化物酶能消除体内过氧化氢,并且可以预防体内羟基(-OH)的形成。高血糖可使组织谷胱甘肽代谢异常,导致谷胱甘肽依赖性H_2O_2降解机制受损害,从而使神经组织易受损伤。姚民秀等对28例糖尿病神经病变病人,在较好控制血糖的基础上,应用谷胱     

Neurotransmitter-precursor-supplement intervention for detoxified heroin addicts

This study examined the effects of combined administration of tyrosine, lecithin, L-glutamine and L-5-hydroxytryptophan (5-HTP) on heroin withdrawal syndromes and mental symptoms in detoxified heroin addicts. In the cluster-randomized placebo-controlled trial, 83 detoxified heroin addicts were recruited from a detoxification treatment center in Wuhan, China. Patients in the intervention group (n=41) were given the combined treatment with tyrosine, lecithin, L-glutamine and 5-HTP and those in the control group (n=42) were administered the placebo. The sleep status and the withdrawal symptoms were observed daily throughout the study, and the mood states were monitored pre- and post-intervention. The results showed that the insomnia and withdrawal scores were significantly improved over time in participants in the intervention group as compared with those in the control group. A greater reduction in tension-anxiety, depression-dejection, anger-hostility, fatigue-inertia and total mood disturbance, and a greater increase in their vigor-activity symptoms were found at day 6 in the intervention group than in the control group (all P<0.05). It was concluded that the neurotransmitter-precursor-supplement intervention is effective in alleviating the withdrawal and mood symptoms and it may become a supplementary method for patients’ recovery from heroin addiction.     

脑靶向纳米载体的研究进展

目的对近年来以纳米粒为载体的脑部给药系统研究进行总结和归纳。方法查阅大量的国内外文献,具体从聚氰基丙烯酸正丁酯（PBCA）、聚乙二醇－聚乳酸／聚乳酸聚羟乙酸纳米粒（mPEG—PLA／PLGA）、固体脂质纳米粒给药载体的发展现状、机理、临床应用及优缺点等方面进行阐述。结果纳米粒给药系统的研究重点在于怎样解决穿越血脑屏障的问题和用药的安全性。结论现阶段这种给药途径虽然已取得了突破性进展,有些药物已进入了临床试验,但仍然存在着很大的不足。